重組豬源胰蛋白酶原的構建、表達與活性分析

馮雪婷，劉素麗，黃瀟，王云康，龍軍，金亮，曹榮月*

（1. 中國藥科大學生命科學與技術學院，江蘇 南京210009；2. 江蘇未名生物醫藥有限公司，江蘇 常州 213000 ；3. 南京中醫藥大學生命科學與技術學院，江蘇 南京 210046）

·藥學研究·
PHARMACEUTICAL RESEARCH

重組豬源胰蛋白酶原的構建、表達與活性分析

馮雪婷1,2，劉素麗2，黃瀟2，王云康1，龍軍3，金亮1，曹榮月1*

（1. 中國藥科大學生命科學與技術學院，江蘇 南京210009；2. 江蘇未名生物醫藥有限公司，江蘇 常州 213000 ；3. 南京中醫藥大學生命科學與技術學院，江蘇 南京 210046）

目的：構建、表達重組豬源胰蛋白酶原，并對其進行分離純化和酶活性分析。方法：利用大腸埃希菌表達系統（pET-28a，宿主菌BL21 DE3）優化天然豬源胰蛋白酶原基因，經乳糖誘導表達重組胰蛋白酶原蛋白，采用陰離子交換色譜法分離純化，以SDS-PAGE電泳鑒定目標蛋白，以紫外分光光度法檢測重組蛋白的酶活力。結果：測序結果表明，重組豬源胰蛋白酶原基因工程菌構建成功，SDS-PAGE檢測顯示目的蛋白條帶位置與標準豬源胰蛋白酶條帶位置一致，且酶活力可達513.09 U?mg-1。結論：成功獲得了重組豬源胰蛋白酶原，且酶活力較好，為進一步研究生產提供了基礎。

豬源胰蛋白酶原基因；包涵體變性；乳糖誘導；稀釋復性

胰蛋白酶(trypsin，EC3.4.21.4)屬于絲氨酸蛋白酶的一種，在胰臟中以胰蛋白酶原的前體形式被合成和分泌。胰蛋白酶原與胰蛋白酶的結構中均存在一個對Ca2+高度親和的部位，其對胰蛋白酶原的激活及胰蛋白酶活性狀態的保持非常重要[1]。在Ca2+的存在下，胰蛋白酶原被腸激酶或有活性的胰蛋白酶激活，形成活化胰蛋白酶[2]，后者作為肽鏈內切酶，對多肽鏈中賴氨酸或精氨酸羧基所形成的肽鍵呈高度專一性，可水解該肽鍵產生以堿性氨基酸為羧基末端的小分子肽。……