胃鏡活檢與外科病理診斷胃癌及HER2檢測的對比研究

冼麗英

胃鏡活檢與外科病理診斷胃癌及HER2檢測的對比研究

冼麗英①

目的：評估對比配對的胃腺癌活檢標(biāo)本及外科病理手術(shù)標(biāo)本臨床病理學(xué)特征及HER2表達(dá)，研究其異質(zhì)性并評估臨床意義。方法：選取2011年1月-2013年1月本院診斷的胃食管交界區(qū)普通型腺癌內(nèi)鏡活檢標(biāo)本及相應(yīng)的腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本患者98例，并收集相應(yīng)的臨床病理學(xué)資料，用免疫組化（IHC）及原位熒光雜交（FISH）法檢測內(nèi)鏡活檢標(biāo)本及相應(yīng)的腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本HER2蛋白過表達(dá)和基因擴(kuò)增情況，觀察并分析其異質(zhì)性表達(dá)的情況，分析臨床病理學(xué)特征，評估臨床意義。結(jié)果：98例胃腺癌患者中免疫組化HER2陽性16例（16.3%），F(xiàn)ISH HER2陽性14例（14.3%），12例（75%）免疫組化HER2陽性胃腺癌組織中HER2呈現(xiàn)明顯異質(zhì)性，而FISH檢測HER2陽性胃腺癌組織中僅有5例（41.7%）。結(jié)論：HER2在胃癌組織中呈現(xiàn)明顯的異質(zhì)性；活檢標(biāo)本能良好地預(yù)測胃癌手術(shù)標(biāo)本HER2表達(dá)，應(yīng)該對活檢標(biāo)本進(jìn)行HER2檢測。

胃鏡活檢； 外科病理診斷； HER2； 胃癌確診

胃癌是最常見的癌癥之一，盡管胃癌在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率有所下降，但它仍然是繼肺癌之后死亡率居第二位的高發(fā)性腫瘤[1]。我國和日本、智利、芬蘭、冰島等國家同是胃癌的高發(fā)區(qū)，發(fā)病率6～8倍于西方國家。目前，手術(shù)切除仍然是治療早期胃癌的主要手段。但對晚期胃癌，盡管治療方法很多，如手術(shù)、化療、放療等，但患者的存活率仍很低。ToGA研究證實(shí)曲妥珠單抗聯(lián)合化療可改善HER-2/neu陽性晚期胃癌患者的生存[2]。本研究的主要目的是評估對比配對的胃腺癌活檢標(biāo)本及外科病理手術(shù)標(biāo)本臨床病理學(xué)特征及HER2表達(dá)，研究其異質(zhì)性并評估臨床意義，因此選取2011年1月-2013年1月本院診斷的胃食管交界區(qū)普通型腺癌胃癌內(nèi)鏡活檢標(biāo)本及相應(yīng)的腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本患者98例，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月-2013年1月在本院接受治療的胃癌患者的胃鏡活檢標(biāo)本及相應(yīng)的腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本98例，并收集相應(yīng)的臨床病理學(xué)資料。其中男52例，女性46例，年齡65～78歲，平均年齡（52.2±3.5）歲。所有標(biāo)本均經(jīng)10%的中性福爾馬林液中固定，石蠟包埋，常規(guī)HE染色。所有HE切片均在光鏡下觀察進(jìn)行病理診斷及分型。

1.2 試劑和方法 采用兔抗HER-2單克隆抗體（ZA-0023，即用型）和En-Vision試劑盒（二抗試劑），以及HER-2熒光原位雜交試劑。

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 按照使用說明，以胃腺癌陽性片做陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 熒光原位雜交技術(shù) 組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、復(fù)水、高溫清洗25 min后，采用蛋白酶100 mg/L，在K37 ℃條件下作用5～28 min，后用體積分?jǐn)?shù)1%甲醛固定，作用10 min，再用梯度乙醇脫水，加入混合液10 μL，使之變性。用乙醇清洗3 min，保持室溫條件，待其干燥后，加入10 μL DAPI復(fù)染劑復(fù)染密封，作用時間20 min后，于熒光顯微鏡下觀察。

1.2.3 Her-2過表達(dá)的分析方法 采用Hercep Test進(jìn)行IHC檢測分析并根據(jù)修訂的評分系統(tǒng)進(jìn)行評分[3]。此評分系統(tǒng)中，IHC3+為Her-2陽性，IHC+及IHC-為Her-2陰性。Her-2陽性染色呈棕黃色顆粒，位于細(xì)胞膜。無著色/少于10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色（0/陰性）；大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱、不完整的細(xì)胞膜著色（1+/陰性）；大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的細(xì)胞膜著色（2+/不確定）；大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的、完整的細(xì)胞膜著色（3+/陽性）。

1.2.4 FISH結(jié)果判定 選擇細(xì)胞核大小一致、胞核邊界完整、染色均一、細(xì)胞核無重疊、綠色CSP17信號清晰的細(xì)胞，隨機(jī)計數(shù)至少20個癌細(xì)胞核中雙色信號。判讀標(biāo)準(zhǔn)：（1）紅色信號總數(shù)與綠色信號總數(shù)比值＜1.8提示無擴(kuò)增，比值＞2.2提示HER2基因擴(kuò)增；（2）若眾多信號連接成簇時可不計算，視為基因擴(kuò)增；（3）若比值位于1.8～2.2之間，則需再計算20個細(xì)胞核中的信號或由另外一個分析者重新計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采取統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計數(shù)資料采取率（%）表示，組間率對比采取 χ2檢驗(yàn)及非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌HER2基因擴(kuò)增患者與HER2陰性患者的臨床病理學(xué)特征比較 統(tǒng)計顯示，HER2陰性患者比例與患者年齡與性別、TMN分期和病理分級均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），HER2陰性患者比例與Lauren分型相關(guān)（P＜0.05），見表1。

表1 胃癌HER2陽性患者與HER2陰性患者的臨床病理學(xué)特征比較

2.2 標(biāo)本中免疫組化與FISH方法檢測HER2的比較 98例胃腺癌患者中免疫組化HER2陽性16例（16.3%），F(xiàn)ISH HER2陽性14例（14.3%），見表2。

表2 胃鏡活檢標(biāo)本與外科病理標(biāo)本中免疫組化與FISH方法檢測HER2的比較

2.3 免疫組化與FISH的HER2檢測比較 98例患者中，以免疫組化評分為基準(zhǔn)，其中胃鏡活檢標(biāo)本中FISH陰性符合率為88.8%，外科病理標(biāo)本符合率85.7%，見表3。

2.4 腫瘤異質(zhì)性被定義為可觀察到腫瘤不同區(qū)域IHC不同評分和FISH不同的HER2基因擴(kuò)增。12例（12/16， 75%）免疫組化HER2陽性胃腺癌組織中HER2呈現(xiàn)明顯異質(zhì)性，而FISH檢測HER2陽性胃腺癌組織中僅有5例（5/12，41.7%），見圖1～2。

3 討論

HER2/neu是癌基因又稱cerbB-2基因，定位于人染色體17q21，與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)。胃癌是最常見的癌癥之一，據(jù)報道約20%的進(jìn)展期胃癌有HER2過表達(dá)或擴(kuò)增。國際多中心隨機(jī)對照Ⅲ期臨床研究（ToGA試驗(yàn)）結(jié)果顯示，化療聯(lián)合抗HER2的曲妥珠單抗治療可顯著延長進(jìn)展期胃癌及胃食管交界腺癌患者的生存期[4-5]。目前，HER2檢測方法主要包括免疫組織化學(xué)（IHC）及原位雜交（ISH），準(zhǔn)確檢測HER2的表達(dá)才能準(zhǔn)確選擇可能對該表面受體的靶向治療，達(dá)到緩解病情的效果。但是胃癌和乳腺癌不同，胃癌中的腫瘤異質(zhì)性更常見[6-7]。由于大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)癌時已不宜手術(shù)，用活檢標(biāo)本檢測HER2成為最方便的選擇。另外，也有研究顯示，HER2是能夠預(yù)測今后胃癌病情發(fā)展情況的一個重要預(yù)后因子，胃癌患者必須進(jìn)行病理檢測，明確HER2狀態(tài)并及時采取針對性的治療。

表3 胃鏡活檢與外科病理標(biāo)本中免疫組化與FISH的HER2檢測比較

圖1 HER2 IHC（200×）

圖2 HER2 FISH

已發(fā)表的胃癌HER2過表達(dá)率在8.2%～53.4%之間[8-9]。HER2陽性率的差異可能與研究人群的差異、組織固定與處理的不同、抗體的敏感性和特異性差異、不同的評分標(biāo)準(zhǔn)以及病理醫(yī)生的主觀性有關(guān)[10-11]。結(jié)合本次研究結(jié)果，98例胃腺癌患者中免疫組化HER2陽性16例（16.3%），F(xiàn)ISH HER2陽性14例（14.3%），與上述研究的表達(dá)率符合，而且外科手術(shù)標(biāo)本中IHC 與FISH的符合率比內(nèi)鏡活檢標(biāo)本的符合率高（分別為98.0%和91.8%）。

腫瘤異質(zhì)性在大部分人類實(shí)體腫瘤中存在，是導(dǎo)致檢測HER2狀態(tài)偏差的主要原因。HER2基因擴(kuò)增的腫瘤內(nèi)異質(zhì)性據(jù)報道為5%～30%[12-13]。本次研究12例免疫組化HER2陽性胃腺癌組織中HER2呈現(xiàn)明顯異質(zhì)性，而FISH檢測HER2陽性胃腺癌組織中僅有5例，HER2在胃癌組織中呈現(xiàn)明顯的異質(zhì)性。腫瘤內(nèi)異質(zhì)性可能會影響病理醫(yī)生對HER2的準(zhǔn)確判讀，同時也可能是IHC與FISH結(jié)果不一致和內(nèi)鏡活檢標(biāo)本和外科手術(shù)標(biāo)本結(jié)果不一致的主要原因[14-15]。活檢標(biāo)本能良好的預(yù)測胃癌手術(shù)標(biāo)本HER2表達(dá)，應(yīng)該對活檢標(biāo)本進(jìn)行HER2檢測。本次研究結(jié)果與Gokce[14]等的研究結(jié)論基本相同，表明在胃癌診斷中，HER2檢測具有重要的意義，值得臨床重視和思考。

[1]李軍.胃鏡活檢與外科病理檢查對早期胃癌診斷價值的比較[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2011，17（33）：60.

[2]韓金霞.胃鏡活檢與外科病理診斷胃癌臨床對比分析[J].中國社區(qū)醫(yī)師（醫(yī)學(xué)專業(yè)），2012，14（8）：245，247.

[3] Hofmann M，Stoss O，Shi D，et al.Assessment of a HER2 scoring system for gastric cancer：results from a validation study[J]. Histopathology，2008，52（7）：797-805.

[4] Van Cutsem E，Kang Y，Chung H，et al.Efficacy results from the ToGA trial：a phase III study of trastuzumab added to standard chemotherapy （CT） in first-line human epidermal growth factor receptor 2 （HER2）-positive advanced gastric cancer （GC）[J].ASCO Meeting，2009，27（18）：509.

[5] Bang Y J，Vam Custsem E，F(xiàn)eyereisolva A，et al.Trastuzumab in combination with chemotherapy versus chemotherapy alone for treatment of HER2-positive advanced gastric or gastro-oesophageal junction cancer（ToGA）：a phase 2，open-label，randomized controlled trial[J].Lancet，2010，376（9742）：687-697.

[6] Jorgensen J T.Targeted HER2 treatment in advanced gastric cancer[J]. Oncology，2010，78（1）：26-33.

[7] Vance G H，Barry T S，Bloom K J，et al.Genetic heterogeneity in HER2 testing in breast cancer：panel summary and guidelines[J].Arch Pathol Lab Med，2009，133（4）：611-612.

[8]舒健.胃癌患者術(shù)前胃鏡活檢病理與外科術(shù)后病理的差異分析[J].中國保健營養(yǎng)（下旬刊），2013，23（3）：1099-1100.

[9] Tabit C E，Chung W B，Hamburg N M，et al.Endothelial dysfunction in diabetes mellitus：molecular mechanisms and clinical implications[J].Rev Endocr Metab Disord，2010，11（1）：61-74.

[10] Endemann D H，Schiffrin E L.Endothelial dysfunction[J].J Am Soc Nephrol，2004，15（8）：1983-1992.

[11] Izzard A S，Rizzoni D，Agabiti-Rosei E，et al.Small artery structure and hypertension：adaptive changes and target organ damage[J].J Hypertens，2005，23（2）：247-250.

[12] Tabit C E，Chung W B，Hamburg N M，et al.Endothelial dysfunction in diabetes mellitus：molecular mechanisms and clinical implications[J].Rev Endocr Metab Disord，2010，11（1）：61-74.

[13] Nicolls M R，Haskins K，F(xiàn)lores S C.Oxidant stress，immune dysregulation，and vascular function in type Ⅰ diabetes[J].Antioxid Redox Signal，2007，9（7）：879-889.

[14] Gokce N，Vita J A，McDonnell M，et al.Effect of medical and surgical weight loss on endothelial vasomotor function in obese patients[J].Am J Cardiol，2005，95（2）：266-268.

[15] Lteif A A，Han K，Mather K J.Obesity，insulin resistance，and the metabolic syndrome：determinants of endothelial dysfunction in whites and blacks[J].Circulation，2005，112（1）：32-38.

Comparative Study of Endoscopic Biopsy and Surgical Pathology Diagnosis of Gastric Cancer and HER2 Detection

/XIAN Li-ying.//Medical Innovation of China，2014，11（21）：080-083

Objective：To evaluate contrast match biopsy specimens of gastric adenocarcinoma demonstrate mitoses and surgical pathology specimen clinical pathology characteristic and the expression of HER2，study its heterogeneity and to assess clinical significance.Method：98 patients who were diagnosed adenocarcinoma of the stomach esophagus border area type endoscopic biopsy specimens and the corresponding tumor patients with surgically resected specimens in our hospital from January 2011 to January 2013 were selected，and collected the corresponding clinical pathology data. The endoscopic biopsy specimens and the corresponding tumor resection specimens HER2 protein expression and gene amplification were detected by immunohistochemical（IHC） and fluorescence in situ hybridization （FISH） method，the expression of heterogeneity was observed and analyzed，the characteristic of clinical pathology was analyzed and the clinical significance was evaluated.Result：98 patients with gastric adenocarcinoma immunohistochemical HER2 positive were 16 cases（16.3%），F(xiàn)ISH HER2 positive were 14 cases（14.3%），12 cases （75%） immunohistochemical HER2 positive HER2 in gastric adenocarcinoma tissue presents obvious heterogeneity，and FISH to detect HER2 positive gastric adenocarcinoma tissues was only 5 cases（41.7%）.Conclusion：The HER2 present obvious heterogeneity in gastric cancer tissues，biopsy specimen can well predict surgical specimens of gastric cancer HER2 expression，should HER2 detection on biopsy specimens.

Gastroscope biopsy； Surgical pathology diagnosis； HER2； Diagnosis of gastric cancer

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.21.026

2014-05-06） （本文編輯：歐麗）

①廣東省東莞市人民醫(yī)院 廣東 東莞 523000

冼麗英

First-author’s address：The People’s Hospital of Dongguan City，Dongguan 523000，China