理脾化痰降脂片調脂療效與LDLR多態性的相關性研究

蔣興偉，曾益宏

(1.廣東省深圳市羅湖區中醫院，廣東 深圳518001;2.廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東 廣州510405)

高脂血癥是指人體內脂質代謝失常，血漿內脂質濃度超過正常高限的一種病癥。低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein recepotor，LDL－R)對血脂代謝平衡起著重要的調節作用。編碼該蛋白的基因位于19p13.1－p13.3，長45kb，由18個外顯子和17個內含子組成，其約有300多種不同的基因病變。有研究表明［1］，LDLR－R的外顯子13中編碼第632位纈氨酸(val)的第三堿基有單核苷酸基因多態性(single nucleotide polymorphisms，SNPS)，變異位點可被 AvaIl內切酶識別(GGTTC→GGTCC)。該SNPS與血清膽固醇水平密切相關。為探討理脾化痰降脂片的調脂療效與LDLR多態性的關系，我們對60例高脂血癥患者，應用PCR技術進行初步研究，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象:所有觀察病例均為2010年10月至2012年10月我院急診科及門診病人，均符合診斷標準，采用單盲法隨機分為治療組和對照組。其中治療組35例，男20例，女15例，平均年齡51.2歲;輕度血脂升高者5例，中度血脂升高者14例，重度血脂升高者16例。對照組25例，男14例，女11例，平均年齡48.5歲;輕度血脂升高者4例，中度血脂升高者10例，重度血脂升高者11例。納入、排除標準［2］。

1.2 研究方法

1.2.1 治療方法:治療組服用理脾化痰降脂片(由廣州中醫藥大學附一院制劑室提供)。對照組服安慰劑(由廣州中醫藥大學附一院制劑室提供，用淀粉制成，其顏色、劑型同理脾化痰降脂片)。兩組病人服藥均為3次/d，5片/次，飯前服，療程為6周，受試者飲食及生活習慣與治療前保持基本一致。

1.2.2 檢驗方法:①低密度脂蛋白受體(LDLR)基因多態性的測定:兩組病人在治療前后早晨空腹取血2 mL，常規苯酚氯仿法提取白細胞基因組DNA，然后用聚合酶鏈試反應 限制性片段長度多態性(PCR－RFLP)技術檢測LDLR基因的多態性［3］。②血脂的測定:兩組病人治療前后清晨空腹抽血以酶法測定TC，TG，HDL－C，用聚乙烯硫酸沉淀法測定LDL－C。

1 2.3 數據處理:等位基因頻率用卡方檢驗，治療組與對照組血脂、脂蛋白含量比較用t檢查，亞組間血脂、載脂蛋白含量差異用F檢驗。

2 結果

2.1 RFLPS分析 LDL－R基因外顯子18擴增片段為2490 bp，LDL－R外顯子13編碼第632位纈氨酸可發生突變(GGTIC→GGTCC)，突變后的片段可被AVaII酶切。經酶切后得到144 bp和110 bp兩條帶為十等位基因，無酶切位點的只能得到254 bp一條區帶為一等位基因。基因型可分為野生型純合子－/－，突變型雜合子和突變型純合子+/+3種，從表1中可以看出，－/－基因型患者居多(50%以上)，兩組LDL－R基因型和等位基因的頻率比較，差異無統計學意義(P ＞0.05)。

2.2 LDL－R基因多態性對血脂水平的影響，見表2。從表2、表3中可以看出，TC、TG、LDL－C水平有隨著+/+，－/－基因型有依次遞減的趨勢。治療組治療前后血脂水平的比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，對照組治療前后血脂水平的比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。

表1 兩組LDL－R基因型及等位基因頻率分布

表2 治療組LDL－R基因多態性對血脂水平的影響 ( ± s，mmol/L)

表2 治療組LDL－R基因多態性對血脂水平的影響 ( ± s，mmol/L)

治療前治療后基因型TC TG HDL－C LDL－C+/+ 6.02 ±1.18 20.15 ±0.76 1.06 ±0.32 3.62 ±0.4 TC TG HDL－C LDL－C 8 5.08 ±1.16 1.72 ±0.54 1.25 ±0.45 2.88 ±0.42－ /－ 5.78 ±1.09 2.05 ±0.80 1.12 ±0.32 3.42 ±0.45 4.86 ±1.04 1.68 ±0.52 1.32 ±0.42 2.67 ±0.38－ /－ 5.38 ±1.02 1.88 ±0.72 1.02 ±0.28 3.18 ±0.413.98 ±0.98 1.51 ±0.45 1.35 ±0.32 1.88 ±0.25

表3 對照組LDL－R基因多態性對血脂水平的影響 (± s，mmol/L)

表3 對照組LDL－R基因多態性對血脂水平的影響 (± s，mmol/L)

治療前治療后基因型TC TG HDL－C LDL－C+/+ 6.03 ±1.17 2.14 ±0.75 1.07 ±0.31 3.61 ±0.47 TC TG HDL－C LDL－C 6.02 ±1.18 2.14 ±0.75 1.08 ±0.32 3.60 ±0.48－ /+ 5.80 ±1.10 2.05 ±0.78 1.11 ±0.32 3.43 ±0.42 5.8 ±1.10 2.04 ±0.77 1.11 ±0.32 3.43 ±0.42－ /－ 5.38 ±1.03 1.87 ±0.72 1.03 ±0.28 3.20 ±0.405.38 ±1.03 1.88 ±0.72 1.03 ±0.27 3.18 ±0.41

3 討論

LDL受體是一種細胞表面糖蛋白，LDL受體基因多態性可影響LDL－C、TC水平。AVaII位點位于LDL受體的第13個外顯子，第632位密碼子的第3個堿基C→T突變，產生1個AVaII內切酶識別位點(GGTTC→GGTCC)國內外大量文獻提示AVaII基因多態性與膽固醇和低密度脂蛋白水平密切相關，可導致家族性高膽固醇血癥［4］，本研究發現，在血脂異?；颊咧?，TC、TG、LDL－C水平有隨著+/+，－/+，－/－基因型有依次遞減的趨勢，理脾化痰降脂片對不同基因型患者都有降脂效果，但對－/－型基因患者較佳，能明顯降低TC及LDL－C水平，其作用機制尚不十分明確，有待進一步研究。

［1］ 劉愛萍，詹思延，李立明.低密度脂蛋白受體基因多態性與高脂血癥的關系［J］.中華流行病學雜志，2001，22(4):30 －33.

［2］ 蔣興偉，許宏大，劉德健.理脾化痰降脂片治療高脂血癥36例小結［J］.湖南中醫藥導報，2004，2:3 －4.

［3］ YoungI Ahn，M.Hyas Kamboh，Chris top her E，et al Role of Common Genetic Polymorphisms in the LDL Receptor Gesse in Afecting Plasma Cholesterol Levele in the General Pipalation［J］.Arterioselerosis and Thrombosis，1994，14(5):663 －670.

［4］ 錢偉，錢志遠.高膽固醇血癥的危害與現行對策［J］.實用預防醫學，2009，16(2):632 －634.