CXCL16在系統性紅斑狼瘡患者外周血清中的表達及意義

秦沐婷，王曉非

（中國醫科大學附屬盛京醫院風濕免疫科，沈陽110004）

CXCL16在系統性紅斑狼瘡患者外周血清中的表達及意義

秦沐婷，王曉非

（中國醫科大學附屬盛京醫院風濕免疫科，沈陽110004）

目的探討CXCL16在系統性紅斑狼瘡（SLE）患者外周血清中表達水平及其臨床意義。方法采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測來自系統性紅斑狼瘡（SLE）患者（34名）的47份血清和正常對照組14份血清CXCL16水平，收集被檢者同批次實驗室指標，計算SLE活動指數（SLEDAI），進行統計分析。結果SLE患者血清中CXCL16水平高于正常對照組，差異有統計學意義（P＜0.04）；具有面部皮損SLE患者血清CXCL16水平較無皮損組高、腎臟損傷SLE患者血清CXCL16水平高于無腎損傷組，差異均有統計學意義（均P＜0.04）；病情相對活動SLE患者（SLEDAI≥10）血清CXCL16水平較相對緩解組（SLEDAI＜10）高，差異有統計學意義（P＜0.04）；12例經治療SLE患者SLEDAI評分及血清CXCL16水平減低，差異有統計學意義（均P＜0.04）。結論CXCL16參與SLE的發病過程且與疾病嚴重程度有一定相關性；CXCL16可能參與了SLE患者皮膚炎癥和腎臟損害的發病過程；血清CXCL16水平變化對于判斷SLE治療效果有一定參考意義。

紅斑狼瘡；系統性；趨化因子；CXCL16

系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種多種因素互相作用下以T、B淋巴細胞異常活化產生大量自身抗體，臨床表現多樣，常造成多系統損害為特征的慢性自身免疫性疾病。細胞趨化因子在參與炎癥和免疫應答過程中起重要作用，趨化因子CXCL16以可溶分泌型（Soluble CXCL16，S-CXCL16）和跨膜膜結合型（Transmembrane CXCL16，TM-CXCL16）兩種形式存在，既可以以可溶形式參與激活的T淋巴細胞趨化作用，又可以與其受體CXCR6結合促進炎癥進展，已證實在腎炎［1］、肺部疾患［2］、動脈粥樣硬化［3］等多種炎性病變組織中表達。目前已有CXCL16與類風濕關節炎、干燥綜合征等結締組織疾病相關探索研究。國內外關于CXCL16與SLE尚缺乏相關性研究，本文通過檢測SLE患者外周血清CXCL16表達水平，旨在探討其水平變化與SLE發病機制和疾病活動程度關系及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象及其分組

根據美國風濕病學會（ACR）2009年制訂的SLE分類標準，收集來自34名SLE患者血清，其中男1例，女34例，病程3月～32年，平均年齡37.43±14.34歲（18歲～67歲）；正常對照組血清14例取自同期健康體檢者，女14例，男1例，平均年齡42.21±8.84歲（22歲～63歲）；SLE患者組與正常對照組的年齡、性別構成無明顯差異；入組人群入院檢查均未發現腫瘤或感染性疾病。

將SLE患者分為腎臟損傷組（16例）與非腎臟損傷組（19例）；血液損傷組（19例）與非血液損傷組（16例）；有關節腫痛組（16例）與無關節腫痛組（19例）；有面部皮損組（21例）與無面部皮損組（14例）；有雷諾現象組（14例）與無雷諾現象組（20例）；腎臟損傷標準為蛋白尿（24 h尿蛋白定量＞0.4 g/d）或管型尿，除外其他疾病導致腎損傷；血液損傷標準為有溶血性貧血伴網織紅細胞增多或白細胞＜4×109/L或血小板＜100×1012/L（以上指標至少2次且除外藥物影響）。

1.2 主要試劑及儀器

人CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒購自R&D公司；酶標儀為瑞士帝肯公司Rain-bow型。

1.3 標本采集

獲得研究對象同意情況下，采清晨空腹靜脈血3 mL，離心（3 000 r/min，10 min）后取上清，置PC管中-20℃保存，同批檢測。

1.4 CXCL16的測定

采用生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法，標本加入預包被人CXCL16單克隆抗體酶標孔中，溫育，加入生物素標記的抗CXCL16抗體，與鏈霉親和素-HRP結合，加入底物，酸化，嚴格按照試劑盒說明書程序進行操作。酶標儀440 nm處測OD值，繪制標準曲線，計算CXCL16濃度值。

1.5 資料收集

記錄患者血常規、尿常規、CRP、ESR、抗ds-DNA抗體、ANA滴度、補體C3、補體C4、24小時尿蛋白定量等實驗室指標由我院檢驗科協助完成，異常判定均參考同期該檢查的正常值。同時收集整理患者其他臨床資料，并計算患者SLEDA2評分。

1.6 統計學分析

2 結果

2.1 血清CXCL16的表達

結果顯示SLE患者血清中CXCL16水平（2.41± 0.99 μg/L）高于正常對照組（1.37±0.30 μg/L），差異具有統計學意義（t=4.73，P＜0.000 1，圖1）

圖1 SLE患者與對照組血清CXCL16表達Fig.1 Expression of serum CXCL16 in SLE and normal control group

2.2 不同臨床特征SLE患者血清中CXCL16水平表達

面部皮損組SLE患者血清中CXCL16水平較無皮損SLE患者組高、腎臟損傷組血清中SLE水平高于無腎損傷組，且差異均有統計學意義（均P＜0.04）；伴有關節腫痛癥狀SLE患者血清中CXCL16水平低于無關節腫痛患者、伴雷諾現象患者血清中CXCL16水平低于無雷諾現象患者，但差異無統計學意義（均P＞0.04），見表1。

2.3 SLE患者血清CXCL16與臨床指標相關性分析

SLE患者血清中CXCL16水平與ESR（r=0.177，P=0.333）、CRP（r=-0.09，P=0.78）、抗ds-DNA滴度（r=-0.11，P=0.47）、ANA滴度（r=0.030，P=0.321）、IgG（r=0.03，P=0.87）、IgM（r=-0.02，P=0.89）、IgA（r=0.26，P=0.14）、C3（r=-0.189，P=0.346）、C4（r=-0.19，P=0.34）、24 h尿蛋白定量（r=-0.01，P= 0.94）均無相關性（均P＞0.04）。

2.4 SLE患者病情活動程度與血清中CXCL16水平相關性

采用2000年SLE疾病活動度評分（SLE disease activity index，SLEDAI）［4］對SLE患者病情活動評分。

參考SLEDAI將SLE患者分為基本無活動（SLEDAI=0～4）、輕度活動（SLEDAI=4～9）、中度活動（SLEDAI=10～14）、重度活動（SLEDAI≥14）4組，進行方差分析，比較濃度差異。總體比較4組患者血清中CXCL16水平有統計學差異（F=3.64P=0.023）（圖2）。

將SLE患者按SLEDAI≥10分為相對活動組（22例），SLEDAI＜10分為相對緩解組（13例）。相對活動組血清CXCL16水平較相對緩解組高，濃度分別為（2.73±1.12 μg/L）及（1.90±0.43 μg/L），且差異具有統計學意義（P=0.017）。

表1 血清CXCL16表達與SLE臨床特征的關系Tab.1 Correlation between the expression of serum CXCL16 and clinical manifestation of SLE

圖2 CXCL16表達與SLEDAI關系Fig.2 Correlation between the expression of CXCL16 and SLEDAI

2.5 SLE患者治療前后血清CXCL16水平比較

12例SLE初治患者應用糖皮質激素及免疫抑制劑治療（其中2例患者僅接受糖皮質激素，7例患者接受糖皮質激素聯合環磷酰胺，余3例患者接受糖皮質激素聯合霉酚酸酯治療），檢測患者應用藥物前及治療2月后血清CXCL16水平，并對該患者重新進行SLEDAI評分；治療后SLE患者血清CXCL16水平（1.91±0.43 μg/L）較治療前（2.43±1.04 μg/L）明顯減低，差異有統計學意義（P=0.023）；且治療后SLE患者SLEDAI評分（9.42±3.68）相比治療前（14.74±6.31）亦明顯減低，差異有統計學意義（P= 0.021），見圖3。

3 討論

人CXCL16是由Matloubian于2000年首次報道［4］，由入侵部位的防御性免疫細胞產生的CXC家族趨化因子，CXCR6為CXCL16目前發現的唯一受體。TM-CXCL16在單核-巨噬細胞及樹突細胞呈現高表達，炎性環境下，經去整合素樣金屬蛋白酶10（A disintegrin and metalloprotease 10，ADAM-10）及ADAM-17水解后，TM-CXCL16趨化功能區從細胞表面脫落，形成S-CXCL16［6］，募集炎性細胞聚集、黏附、穿過內皮細胞到達靶位點，激活單核-巨噬細胞產生大量免疫調節因子，誘導肝細胞產生大量急性反應蛋白。炎性條件下TM-CXCL16表達亦增強，將募集到的炎性細胞固定于炎性反應部位，加速炎癥進展。本研究中SLE患者外周血清CXCL16表達水平升高，可能與CXCL16通過上述途徑誘導并促進了炎癥進展有關。

皮膚黏膜損害在SLE中發生率較高且表現多樣，本研究顯示伴有面部皮損SLE患者外周血清CXCL16表達水平增加。皮膚盤狀紅斑目前被認為是一種由Th1主導的疾病，Scholz［7］研究發現CXCL16可在人類及小鼠正常皮膚角質形成細胞表面表達，IFN-γ，TNF-α等細胞因子可誘導角質形成細胞表達CXCL16及CXCR6增加；S-CXCL16與表達CXCR6細胞特異性結合，促進Th1細胞浸潤，提示可能在皮膚盤狀紅斑發病中發揮作用。本實驗中腎臟損傷組SLE患者血清CXCL16表達亦有增加，可能與TM-CXCL16可在腎小球血管內皮細胞、腎足突細胞表達，腎小球浸潤的炎性細胞對S-CXCL16產生強烈應答［8］有關。然而本研究中未發現CXCL16表達水平與患者尿蛋白定量有相關性，SLE患者腎臟損傷機制復雜，CXCL16可能與多種致病因子共同參與腎臟炎性損傷及病理改變。

圖3 治療前后CXCL16及SLEDAI變化Fig.3 Changes of CXC16 expression and SLEDAI before and after treatment

Th1/Th2失衡被認為參與SLE發病機制：Th1促進炎癥發生，Th2對Th1作用逆向調控，抑制炎癥進展，SLE病情活動度也與Th1/Th2比率有關。CXCR6主要在Th1細胞中表達，Th2細胞表達量很少［9］，CXCL16僅對高表達CXCR6的細胞產生趨化作用。本試驗中按SLEDAI評分比較SLE患者血清CXCL16表達，結果顯示隨病情活動程度增高，血清CXCL16表達水平變化趨勢相同；按SLEDAI=10分為水準將患者分為相對活動組及相對緩解組，相對活動組血清CXCL16水平明顯高于相對緩解組，差異有統計學意義（P=0.017）。SLE患者經有效治療隨SLEDAI評分降低，外周血清CXCL16表達亦有減少，推測CXCL16可在一定程度上反應SLE病情活動程度，但靈敏程度有待進一步探究。實驗中亦未發現血清CXCL16表達水平與CRP、ESR、補體C3/C4、ANA滴度、抗ds-DNA抗體滴度等病情活動相關的實驗室指標具有相關關系，可進一步驗證血清CXCL16反映SLE病情活動程度有限。但血清CXCL16水平變化是否可作為判斷SLE治療效果的參考指標之一，由于本實驗存在病例數較少，統計學意義有限，有待擴大樣本數量行進一步研究。

綜上所述：CXCL16參與SLE的發病過程，與SLE皮膚黏膜損害、腎臟損傷可能相關，外周血清CXCL16表達水平在一定程度上反映疾病活動，但能否作為疾病活動程度、治療效果的參考檢測指標有待進一步探究。

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（編輯 裘孝琦）

The Expression and ClinicalSignificanceofCXCL16 in Serum from Patientswith Systemic Lupus Erythematosus

QINMu-ting，WANGXiao-fei
（DepartmentofRheumatology and Immunology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the levels and clinicalsignificance ofserum CXCL16 in patients with systemic lupus erythematosus.MethodsThe expression ofserum CXCL16 was measured by ELISA method in 34 patients with SLE（47 serum samples）and 14 normalcontrols.The correlation ofserum levels ofCXCL16 with clinicalactive index was analyzed.ResultsThe serum levelofCXCL16 in patients with SLEwashigherthan the normal controls（P＜0.04）.In addition，higher serum CXCL16 level was found in patients with cutaneous manifestations compared to others（P＜0.04）.Serum CXCL16 level in SLE patients with kidney damage was higher than these non-kidney damage ones（P＜0.04）.Serum CXCL16 levelin relatively active group（SLEDAI≥10）was higherthan these relatively release ones（SLEDAI＜10）（P＜0.04）.Both SLEDAIand the serum level of CXCL16 decreased after conventional treatment in 12 SLE patients（P＜0.04）.ConclusionThe SLE patients has high expression of CXCL16 in serum.CXCL16 may be involved in the process of pathogenesis of epithelial inflammation and renal damage.Variation of serum CXCL16 levelin SLE patientshasa certain reference value in monitoring therapeutic effects.

lupus erythematosus；systemic；chemokine；CXCL16

R493.24

A

0248-4646（2014）04-0300-04

遼寧省科學技術計劃（2011224014）；沈陽市科學技術計劃（F12-277-1-84）

秦沐婷（1989-），女，碩士研究生.

王曉非，E-mail：wangxf@sj-hospital.org

2014-02-19

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