抑睪調(diào)經(jīng)湯對(duì)多囊卵巢綜合征模型大鼠高雄激素血癥的影響

張艷慧，王麗娜

(1.黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院，鄭州 450063； 2.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，鄭州 450003)

多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育齡婦女常見的一種極為復(fù)雜的內(nèi)分泌及糖代謝異常所致的病理狀態(tài)，以雄激素過多以及長期無排卵為特征[1]。其臨床表現(xiàn)為高雄激素血癥、胰島素抵抗及高胰島素血癥、促性腺激素水平異常、月經(jīng)異常、閉經(jīng)、無排卵、多毛、肥胖、不孕、卵巢多囊性改變，高雄激素血癥是其突出的特征。本研究采用PCOS模型大鼠為研究對(duì)象，旨在探討抑睪調(diào)經(jīng)湯對(duì)PCOS模型大鼠高雄激素血癥的影響及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料 SD大鼠(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：510216)60只,均為雌性，體質(zhì)量為(180±10)g。將60只SD大鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為5組：正常對(duì)照組(A組)、模型對(duì)照組(B組)、達(dá)英-35對(duì)照藥組(C組)、抑睪調(diào)經(jīng)湯高劑量治療組(D組)、抑睪調(diào)經(jīng)湯低劑量治療組(E組)，各12只。

1.2主要藥品、試劑 抑睪調(diào)經(jīng)湯(黨參15 g、白術(shù)12 g、姜半夏10 g、云苓 25 g、香附12 g、木香9 g、制大黃9 g、焦楂 20 g、雞血藤20 g、車前子15 g、石菖蒲15 g)(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，批號(hào)：200810)；中性胰島素注射液(江蘇徐州萬邦生化制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0106225)；人絨毛膜促性腺激素粉針劑(上海第一生化藥業(yè)有限公司提供，批號(hào):H31020520)；達(dá)英-35片(德國Shering GmbH Und Co.Produktions KG 生產(chǎn)，批號(hào)：174A)；血清黃體生成素(luteinizing hormone,LH)、放免試劑盒(深圳拉爾文生物工程技術(shù)有限公司提供，批號(hào):200704)；血清胰島素放免試劑盒(北京原子高科技術(shù)有限公司提供，批號(hào)：200703)；血清雄激素放免試劑盒(深圳拉爾文生物工程技術(shù)有限公司提供，批號(hào):200704)。

1.3模型制備 正常對(duì)照組每日皮下注射等量生理鹽水，其余大鼠按照Poresky L法皮下注射人絨毛膜促性腺激素 15 U，每日2次，共22 d；胰島素于第1～11日內(nèi)自0.5 U/d開始，逐漸遞增至6.0 U/d，按此劑量維持至第22日。以5%葡萄糖溶液替代日常飲水。造模最后1 d禁食過夜，大鼠每周稱體質(zhì)量1次，連續(xù)進(jìn)行陰道上皮細(xì)胞涂片檢查兩個(gè)性周期(每個(gè)性周期4 d)。以大鼠陰道角化細(xì)胞持續(xù)出現(xiàn)，涂片失去完整動(dòng)情周期及血清胰島素、雄激素升高者，提示PCOS大鼠模型制作成功。

1.4給藥方法 各組動(dòng)物等容灌胃，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予生理鹽水20 mL/(kg·d) 灌胃；達(dá)英-35對(duì)照藥組、給予達(dá)英-35 0.435 g/(kg·d)；抑睪調(diào)經(jīng)湯高劑量組、抑睪調(diào)經(jīng)湯低劑量組分別給予抑睪調(diào)經(jīng)湯48.6 g/(kg·d)、32.4 g/(kg·d)。測(cè)定大鼠體質(zhì)量變化以及血清LH、胰島素、雄激素的水平。

2 結(jié) 果

2.15組大鼠用藥前后體質(zhì)量的變化 用藥前A組體質(zhì)量顯著低于B、C、D、E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-21.90、-26.20、-20.03、-25.50，P<0.05)；用藥后C、D、E組體質(zhì)量顯著低于B組(t=27.73、31.83、34.13，P<0.05)與正常對(duì)照的A組相近；B、C、D、E組治療前后體質(zhì)量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 抑睪調(diào)經(jīng)湯對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響 (g)

A組：正常對(duì)照組；B組：模型對(duì)照組；C組：達(dá)英-35組;D組:抑睪調(diào)經(jīng)湯高劑量組；E組:抑睪調(diào)經(jīng)湯低劑量組；a與A組比較，P<0.05；b與B組比較，P<0.05

2.25組大鼠用藥前后黃體生成素的變化 用藥前A組血黃體生成素水平顯著低于B、C、 D、 E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.18、-0.18、-0.30、-0.29，P<0.05)；用藥后C、D、E組血黃體生成素水平顯著降低,與B組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.31，0.19、0.11，P<0.05)，C組黃體生成素下降水平較D組顯著(t=-0.12，P<0.05)，D組黃體生成素下降水平較E組顯著(t=-0.08，P<0.05)；C、D、E組大鼠治療前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

2.35組大鼠用藥前后胰島素的變化 用藥前B、C、D、E組血胰島素水平顯著高于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-10.35、-9.35、-9.96、-9.51，P<0.05)，用藥后B、C組胰島素水平高于與D、E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.61、7.26，P<0.05)，D組胰島素下降水平較E組顯著(t=-3.35，P<0.05)；D、E組大鼠治療前后胰島素水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表2 抑睪調(diào)經(jīng)湯對(duì)大鼠血清LH的影響 (mIU/mL)

A組：正常對(duì)照組；B組：模型對(duì)照組；C組：達(dá)英-35組;D組:抑睪調(diào)經(jīng)湯高劑量組；E組:抑睪調(diào)經(jīng)湯低劑量組;a與A組比較，P<0.05；與B組比較，bP<0.01,cP<0.05，；c與D組比較，P<0.01

2.45組大鼠用藥前后雄激素水平的變化 用藥前A組血雄激素水平顯著低于B、 C、 D、E組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(t=-18.29、-16.70、-17.51、-17.46，P<0.05),用藥后B組雄激素水平顯著高于C、D、E組(t=19.47、14.29、9.70，P<0.05)，且C組雄激素下降水平較D組顯著(t=-5.18，P<0.05)，D組雄激素下降水平較E組顯著(t=-4.59，P<0.05)；C、D、E組大鼠治療前后雄激素水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表4)。

表3 抑睪調(diào)經(jīng)湯對(duì)大鼠血清胰島素的影響 (mIU/mL)

A組：正常對(duì)照組；B組：模型對(duì)照組；C組：達(dá)英-35組;D組:抑睪調(diào)經(jīng)湯高劑量組；E組:抑睪調(diào)經(jīng)湯低劑量組;a與A組比較，P<0.05；b與B組比較；P<0.05；c與D組比較，P<0.05

表4 抑睪調(diào)經(jīng)湯對(duì)大鼠血清雄激素的影響 (mIU/mL)

A組：正常對(duì)照組；B組：模型對(duì)照組；C組：達(dá)英-35組;D組:抑睪調(diào)經(jīng)湯高劑量組；E組:抑睪調(diào)經(jīng)湯低劑量組;a與A組比較，P<0.05；b與B組比較；P<0.05；c與D組比較，P<0.05;a與A組比較，P<0.05；b與B組比較，P<0.01；c與C組比較，P<0.05；d與D組比較，P<0.05

3 討 論

PCOS發(fā)病原因很多，臨床主要表現(xiàn)為雄性激素過多、持續(xù)無排卵，導(dǎo)致生育期婦女月經(jīng)紊亂、不孕。高LH促使卵巢卵泡內(nèi)膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞合成過多雄激素，并抑制性激素結(jié)合蛋白的合成，使游離的雄激素增多。PCOS伴有明顯的胰島素抵抗與高胰島素血癥，高胰島素血癥又可引起高雄激素血癥[2]。其機(jī)制有：①直接作用。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，胰島素可通過胰島素受體或胰島素樣生長因子受體刺激卵巢雄激素的合成[1]，在體內(nèi)胰島素可能影響17α-羥化酶、17，20-碳鏈酶系統(tǒng)(P450c17)的作用[3]。②間接作用。胰島素可提高性腺細(xì)胞對(duì)促性腺激素釋放激素的敏感性而影響促性腺激素的分泌，抑制性激素結(jié)合蛋白的合成，從而導(dǎo)致游離睪酮水平的升高，促進(jìn)卵巢與胰島素樣生長因子1的結(jié)合并抑制肝臟合成胰島素樣生長因子結(jié)合球蛋白1，而胰島素樣生長因子1可促進(jìn)卵巢雄激素的分泌并可同時(shí)增強(qiáng)LH促卵巢雄激素合成的作用[4]。PCOS的高雄激素血癥治療多采用減輕體質(zhì)量、降低胰島素水平、抗雄激素。由于藥物的療效維持時(shí)間短，多數(shù)患者不能接受，因而探索中醫(yī)藥治療PCOS具有重要意義。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，本病屬本虛標(biāo)實(shí)證，腎虛為本，病位在沖任，脾虛、痰濕與瘀血內(nèi)阻。中醫(yī)治療多采用“補(bǔ)腎舒肝，活血化痰”等治療，對(duì)恢復(fù)月經(jīng)、促進(jìn)排卵取得較好療效。

目前，對(duì)PCOS的研究偏重于腎臟,對(duì)它臟的研究較少,研究角度比較單一；研究偏重臨床,基礎(chǔ)研究開展較少；中醫(yī)發(fā)病機(jī)制研究不夠深入，對(duì)痰、瘀、虛、郁等主要病機(jī)因素的實(shí)質(zhì)及其在PCOS形成和進(jìn)展中的作用和相互聯(lián)系缺乏深入研究，對(duì)不同治法的療效的比較研究較少[5]。經(jīng)過長期臨床實(shí)踐，得出“脾陽虛”為本病一重要癥型，“痰、瘀”為本病之標(biāo)，認(rèn)為健脾化痰、調(diào)經(jīng)助孕可作為PCOS的主要治療方法之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，抑睪調(diào)經(jīng)湯可降低PCOS大鼠體質(zhì)量，降低大鼠血清LH、胰島素、雄激素水平，促使卵巢恢復(fù)排卵的作用。

本方以黨參、白術(shù)為君藥，功于健脾燥濕；以半夏、茯苓、石菖蒲、木香、香附為臣藥，共湊化痰理氣調(diào)經(jīng)之功。以大黃、焦山楂、車前子、雞血藤為佐藥，有利濕活血調(diào)經(jīng)的功效。縱觀全方標(biāo)本兼治、攻補(bǔ)兼施，具有健脾化痰、活血化瘀、調(diào)經(jīng)助孕的功效。本方應(yīng)在臨床應(yīng)用方面進(jìn)行更多的實(shí)踐和研究，并且在中西醫(yī)結(jié)合方面進(jìn)行探索。

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