通陽利濕方對神經根型頸椎病急性期模型大鼠的影響*

河北省中醫院骨傷科（石家莊 050011）

王 鵬 喬 鋼△ 賈露露△△ 國延軍 牟成林 趙 建 崔書國 杜景華

神經根型頸椎病是因椎間盤突出、退變、節段性不穩定、骨質增生或骨贅形成等在椎管內或椎間孔處壓迫、刺激頸神經根導致，在各型頸椎病中發病率最高，約占60% ～70%，［1］而其急性期根性疼痛尤為突出。筆者通過大量臨床實踐自擬通陽利濕方經驗用藥，取得較好臨床療效，但其機制尚不完全明了。本研究擬對大鼠頸神經根性疼痛的行為學等變化進行觀察，探討通陽利濕方對神經根型頸椎病急性期大鼠模型根性疼痛的治療作用及機制。

1 材料

1.1 實驗動物 選取健康成年雄性SPF級Spra gue－Dawley（SD）大鼠60只，體質量 （210±10）g，由河北省實驗動物中心提供 （合格證編號:1212144）。籠內標準大鼠顆粒飼料飼養，室溫 （24±2）℃，相對濕度70%左右，定時通風換氣，照明:白天/黑夜各12 h循環。

1.2 試驗藥品 通陽利濕方，藥物組成:桂枝9 g，黃芪30 g，葛根15 g，白芍25 g，白術12 g，茯苓15 g，豬苓12 g，澤瀉10 g，苦杏仁6 g，香薷9 g，葶藶子10 g，車前子15 g，薏苡仁30 g，延胡索10 g，川芎9 g，酒大黃3 g，羌活9 g，姜黃10 g，威靈仙9 g。中藥配方顆粒購于廣東一方制藥有限公司，批號:1308151。

1.3 儀器 ZH－YLS－3E電子壓痛儀。

2 方法

2.1 神經根型頸椎病急性期大鼠模型的建立參照謝煒［2］、于林［3］、趙偉宏［4］椎管插線法。具體造模方法如下:用10%水合氯醛按0.3mL/100 g劑量麻醉腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后，剪毛，取俯臥位固定，常規消毒后，手指觸及下頸部最高棘突 （T2），以此為基準，向上于頸部正中線做4 cm左右切口，切開皮膚、皮下組織，逐層鈍性分離頸后部肌群，直至C4～T2左側椎弓充分暴露，剝離干凈其表面肌肉、韌帶等組織，使用顯微鑷輕輕挑開 C5～6、C6～7、C7～ T1椎間隙的黃韌帶及結締組織，用止血鉗輕輕鉗開C6、C7左側錐弓板及部分關節突，開窗暴露脊髓，用眼科神經剝離子把脊髓輕柔推至右側，再用顯微外科鑷子將2根各8 mm長、直徑0.55 mm尼龍漁線 （漁線經過酒精浸泡，無菌干燥后使用）分別沿脊髓縱軸向頭尾兩端插入至C5～7、C6～T1左側神經根處，兩根漁線在C6、C7神經根處重疊，牢固嵌入骨性椎管內，以加強對下位左側頸神經根C6、C7的卡壓損傷，避免大鼠自我修復過快。插線時精細操作，漁線避免過度向下壓迫，以免碰破椎靜脈叢后致椎管內大出血。置線成功后，逐層關閉創口，間斷縫合。術后常規予手術大鼠肌內注射慶大霉素預防創口感染。術中麻醉意外致死亡2只，手術損傷致死亡4只，術后5天內死亡4只。剩余50只大鼠于術后即表現出顯著的患肢疼痛相關行為，5天時進入病變平臺期，無脫失，無自愈。

2.2 實驗分組 入組大鼠于術后第5天進行評價，篩選條件如:①步態評分，2～3分;②未見脊髓壓迫癥狀，共有40只大鼠符合條件入組。隨機編號，分為2個組:對照組、治療組，每組20只。

2.3 藥物干預 兩組均于術后第6天開始灌胃，以14天為1個療程，治療1個療程。

2.3.1 治療組:用藥劑量按“動物體表面積比率換算等劑量方法”，由正常成人每日常用劑量換算得出，相當于成人20 g/70 kg·d－1，以1.79 g/kg·d－1劑量計算，將通陽利濕方顆粒加生理鹽水配成濃度為62.65 g/kg的溶液，每只大鼠灌胃量為3 mL，連續灌胃14 d（2次/d）。

2.3.2 對照組:取與治療組等量的生理鹽水，連續灌胃14 d（2次/d）。

2.4 觀察指標 在9:00～11:00期間，分別觀察并記錄治療前后的數據，即術后第5天 （灌胃前1天即治療前），術后第20天 （灌胃結束第1天即治療后）的數據。

2.4.1 自發痛評估:將大鼠置于觀察箱中，待其安靜30 min后，記錄5 min內左前肢離地的累積時間 （s），取3次的平均值。

2.4.2 步態評估:觀察大鼠行走及休息時的姿勢，參考Kawakami和Dubuisson法對其因疼痛攣縮造成的步態障礙進行評估。1分=左前足無畸形、正常步態;2分=左前足內收、蜷縮畸形;左前足輕觸玻璃臺面，輕微持重或不持重，走時跛行;3分=左前足內收、蜷縮畸形;左前足抬起，走動時不觸臺面。

2.4.3 痛閾值改變:用電子壓痛儀壓迫大鼠左前掌中央部位，以大鼠掙扎、嘶叫時的壓力作為該大鼠的痛閾值。

2.4.4 游泳時間測定:大鼠于 （43±0.5）℃、水深35 cm的恒溫水槽中游泳，當大鼠出現自然下沉時從水槽取出，大鼠入水至自然下沉的時間間隔記為大鼠游泳時間。

2.5 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件分析，實驗數據用（±s）描述，治療前后不同時間段的組內數據比較用兩組配對t檢驗，P＜0.01為差異有非常顯著性;組間比較采用兩組獨立t檢驗，P＜0.05為差異有顯著性。

3 結果

3.1 治療前后自發痛變化 治療組大鼠術后第20天 （治療后）左前肢離地的累積時間較術后第5天 （治療前）降低，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對照組則差異不大 （P＞0.05）;治療組治療后左前肢的離地時間縮短明顯，與對照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見表1。

表1 治療前后自發痛比較（±s）

表1 治療前后自發痛比較（±s）

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對照組相比，△P＜0.05

組別 例數 治療前 治療后 治療前后的差值治療組 20 132.55±9.76 74.70±15.50＊△57.85±13.76對照組 20 133.80±12.78 117.05±21.5716.75±12.92

3.2 治療前后步態評分變化 治療組大鼠術后第20天 （治療后）左前足步態評分較術后第5天（治療前）減少，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對照組治療后與治療前差異不大 （P＞0.05）;治療組治療后左前足步態評分減少明顯，與對照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見表2。

表2 治療前后步態評分比較（±s）

表2 治療前后步態評分比較（±s）

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對照組相比，△P＜0.05

組別 例數 治療前 治療后 治療前后的差值治療組 20 2.55±0.31 1.24±0.18＊△1.31±0.38對照組 20 2.55±0.22 2.21±0.230.34±0.30

3.3 對大鼠痛閾值的影響 造模后，患側痛閥值較健側明顯降低，但治療組大鼠術后第20天（治療后）左下肢痛閾值較術后第5天 （治療前）顯著提高，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對照組治療后與治療前差異不大 （P＞0.05）;治療組治療后左下肢痛閾值增加明顯，與對照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見表3。

表3 治療前后痛閾值比較（±s）

表3 治療前后痛閾值比較（±s）

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對照組相比，△P＜0.05

組別 例數 治療前左下肢 右下肢治療后左下肢 右下肢治療組 20 497.85±61.66 743.05±61.96 572.95±79.68＊△845.90±98.72對照組 20 514.65±89.69 720.05±68.22 520.80±112.51775.90±69.30

3.4 游泳時間測定 治療組和對照組大鼠游泳時間均較造模前的正常時間縮短，但治療組大鼠術后第20天 （治療后）游泳時間較術后第5天 （治療前）增加，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對照組治療后與治療前變化不大 （P＞0.05）;治療組治療后游泳時間增加明顯，與對照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見表4。

表4 治療前后游泳時間比較（±s），s

表4 治療前后游泳時間比較（±s），s

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對照組相比，△P＜0.05

組別 例數 治療前 治療后 治療前后的差值治療組 20 336.70±27.11 380.65±53.98＊△43.80±52.78對照組 20 349.25±51.96 359.25±50.6510.00±6.53

4 討論

目前國內頸神經根型疼痛動物模型的造模方法主要有2種:①椎管插線法;②福爾馬林定量濾紙片法。福爾馬林定量濾紙片法較難對兩種刺激在實驗中各自的作用進行定量研究，易造成實驗結果偏倚，可控性因素低，所以選用單一發病機制的椎管插線法制備模型。［5］本實驗對照組4組數值治療前后的組內比較差異有一些變化，提示本實驗模型存在一定的自愈性。

筆者通過大量臨床觀察發現神經根型頸椎病急性期多可對應中醫濕阻陽遏型，自擬通陽利濕方對癥治療。方中君藥黃芪、桂枝補氣通陽。白芍、葛根舒太陽之經氣;白術、薏苡仁、茯苓、豬苓、澤瀉、車前子、葶藶子共用，溫腎陽、健脾陽以氣化運水;苦杏仁、香薷啟肺上源，提壺揭蓋;延胡索、川芎，調達肝氣，使疏泄正常，以上皆為臣藥。佐藥酒大黃，制羌活、黃芪之燥熱。威靈仙通行十二經，羌活入膀胱經上部，姜黃行肢臂，為使藥。諸藥合用，可通三焦陽氣，化積聚水濕，共彰通陽利濕之效。

本實驗表明，通過上述藥理作用，通陽利濕方可以明顯提高模型大鼠壓足痛閾值，促進模型動物行為學改變的恢復，可能具有神經保護作用，符合中醫理論對于“濕阻陽遏”的治療原則，為臨床推廣應用提供了實驗依據，但其具體作用機制還有待進一步研究。

［1］ 中國康復醫學會頸椎病專業委員會.頸椎病診治與康復指南（2010版）［R］.北京:中國康復醫學會，2010.

［2］ 謝煒，趙偉宏，于林，等.川芍提取物對神經根型頸椎病模型大鼠根性疼痛的保護作用研究 ［J］.廣東藥學院學報，2008，24（5）:498－499

［3］ 于林.葛根提取物對神經根型頸推病根性疼痛治療作用及機制研究［D］.廣州:南方醫科大學，2008.

［4］ 趙偉宏.川芍提取物對神經根型頸推病根性疼痛治療作用及機制研究［D］.廣州:南方醫科大學，2008.

［5］ 蔣詩超，房敏，程英武，等.神經根型頸椎病動物模型國內研究進展及評價［J］.中華中醫藥雜志，2012，27（12）:3 052－3 056

（2014－04－03 收稿）