豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）感染：臨床癥狀、病理學(xué)及實(shí)驗(yàn)室診斷（續(xù)完）

中圖分類號：S852 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C 文章編號：1001-0769（2014）02-0079-03

3 PCV2感染相關(guān)的病理特征

PCV2感染相關(guān)的解剖和顯微病理學(xué)在其它文章中（Burnborg等， 2007； Clark， 1997； Kennedy等， 2000； Krakowka等， 2000； Nielsen等， 2008； Rosell等， 1999； Saha等， 2010； West等， 1999）和綜述中（Chae， 2005； Opressnig等， 2007； Segalés等， 2004）均有描述。此外PDNS詳細(xì)病理學(xué)描述在其與PCV2建立聯(lián)系之前就有報(bào)道。表2總結(jié)了PCVAD相關(guān)的最明顯的解剖和顯微病變。此外，接下來的數(shù)段重點(diǎn)描述不常見但最近報(bào)道的與PCV2感染有關(guān)的損傷。

自然發(fā)生PCV2-SD的10 %豬群中至少可以有一個(gè)淋巴結(jié)發(fā)生壞死性淋巴腺炎（Segalés等， 2004）。這損傷還在實(shí)驗(yàn)豬表現(xiàn)淋巴衰竭和淋巴結(jié)肉芽腫性炎癥的情況下觀察到（Opriessnig等， 2006a， b）。這種壞死可以影響大范圍的淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)或集中在特定的濾泡區(qū)域。PCV2在壞死區(qū)域被廣泛發(fā)現(xiàn)。隨后的研究發(fā)現(xiàn)受壞死影響的淋巴結(jié)肥大和增生，維勒布蘭德因子和二級血栓過度表達(dá)。（Galindo-Cardiel等， 2011）。因此這一研究指出豬感染PCV2后發(fā)生的壞死性淋巴腺炎是血管內(nèi)血栓形成的致病機(jī)制。觀查到的壞死中沒有發(fā)生凋亡（Galindo-Cardiel等， 2011）。壞死組織并未發(fā)現(xiàn)脈管炎，但是總的研究發(fā)現(xiàn)壞死組織可能與損傷的血管有關(guān)（Galindo-Cardiel等， 2011； Opriessnig等， 2006b）。另一方面，有人發(fā)現(xiàn)臨床健康豬的單個(gè)淋巴結(jié)壞死性淋巴腺炎并未伴有淋巴衰竭和肉芽腫炎癥（Kim和Chae， 2005）。此外，PCV2-SD感染引起的淋巴結(jié)壞死位點(diǎn)還有偽狂犬病毒共同感染（Rodriguez-Arrioja等， 1999）。然而，后一種病毒的廣泛存在于壞死組織，同時(shí)還有PCV2，說明了偽狂犬病毒是主要發(fā)病原因（Rodriguez-Arrioja等， 1999）。

心臟衰竭是由于心肌急性壞死或慢性纖維化，保育豬心臟、腎臟和淋巴結(jié)慢性脈管炎；心肌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)和心肌層內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞可以檢測到PCV2抗原（Opriessnig等， 2006b）。此外在其它保育豬一些器官中發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重分段或圓周狀淋巴組織細(xì)胞及漿細(xì)胞動(dòng)脈周炎和動(dòng)脈內(nèi)膜炎（Opressnig等， 2006b）。雖然最后只在一只豬證實(shí)缺少PCV-SD樣淋巴損傷，但是不能排除這些病變可能在很多情況下歸入PCV-SD。另一方面，在實(shí)驗(yàn)性的豬復(fù)制PCV2-SD也發(fā)現(xiàn)淋巴組織細(xì)胞和漿細(xì)胞脈管炎（Langohr等，2010；Opressnig等， 2006b）。總的來說，這些不同尋常的發(fā)現(xiàn)說明心血管系統(tǒng)和內(nèi)皮細(xì)胞可能在PCV2感染的致病性上發(fā)揮作用。事實(shí)上在早期PCV2的報(bào)道中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在表皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中有PCV2抗原和核酸（Kennedy等， 2000； Krakowka等， 2000； McNeilly等， 1999； Rosell等， 1999），最近證實(shí)病毒能在這些細(xì)胞系中復(fù)制（Hamberg等， 2007； Perez-Martin等， 2007）。

PCV2-SD很少發(fā)生腦部損傷（Rosell等， 1999）。然而，兩個(gè)不相關(guān)的研究報(bào)道了豬自然感染PCV2-SD后出現(xiàn)小腦組織細(xì)胞脈管炎和出血和/或腦膜炎（Correa等， 2007； Seeliger等， 2007）。此外，其中一篇文章表明壞死性脈管炎導(dǎo)致的灰質(zhì)和白質(zhì)的退化和壞死（Seeliger等， 2007）。在兩個(gè)案例中，巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞PCV2均為陽性。最近的報(bào)道稱共同感染捷申病毒屬和PCV2可以產(chǎn)生非化膿性腦脊髓炎（Takahashi等， 2008）。前一種病毒是腦部損傷中發(fā)現(xiàn)的唯一的病毒，并且認(rèn)為是產(chǎn)生的因素；人們推測PCV2-SD產(chǎn)生的免疫抑制促進(jìn)了豬捷申病毒的感染（Takahashi等， 2008）。某些PCV2毒株是否對腦部內(nèi)皮細(xì)胞或腦膜表皮細(xì)胞具有嗜性還不清楚。一個(gè)提到的研究對一些PCV2進(jìn)行測序發(fā)現(xiàn)與之前的分離株有89 %～100 %的相似性，與神經(jīng)損傷無關(guān)（Seeliger等， 2007）。

PCVDs引起的腎臟損傷被廣泛報(bào)道（Segales等， 2004）。豬感染PCV2-SD通常表現(xiàn)間質(zhì)性腎炎，被描述為淋巴漿細(xì)胞間質(zhì)性小管腎炎、腎間質(zhì)肉芽腫性腎炎和混合型（Sarli等， 2008）。在所有這些損傷型中，PCV2在炎性細(xì)胞和腎表皮細(xì)胞含量豐富（Sarli等， 2008）。另一方面腎臟損傷在PDNS病例中非常嚴(yán)重，表現(xiàn)為嚴(yán)重的纖維素性壞死性腎小球腎炎，非化膿性間質(zhì)性腎炎和腎盂壞死性脈管炎（Drolet等， 1999； Segales等， 1998）。在腎臟間質(zhì)性炎性滲出物和PDNS病理中的腎小管細(xì)胞中可以檢測到（Rosell等， 2000a） PCV2。最近在約克夏雜交豬腎小管細(xì)胞發(fā)現(xiàn)大量的PCV2，伴有腎小管壞死和間質(zhì)出血（火雞蛋腎）（Imai等， 2006）。這些作者認(rèn)為這些豬的腎臟損傷不是典型的PCV2-SD或PDNS（滲出性腎小球腎炎不是研究動(dòng)物的特征癥狀），然而動(dòng)物表現(xiàn)腎臟和脾臟壞死性脈管炎（Imai等， 2006），說明這是血管的系統(tǒng)病變。因此這些動(dòng)物可能是PDNS非典型病例（Segalés等， 2004）。

上述提到的APE眼觀病變表現(xiàn)為胸腔中積聚清亮的液體和缺乏肺部塌陷、中等至嚴(yán)重的間質(zhì)性滲出（Cino-Ozuna等， 2011）。肺部顯微檢查表現(xiàn)間質(zhì)性滲出、間質(zhì)中彌散巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。一個(gè)常見的發(fā)現(xiàn)是血管壁纖維性壞死，周圍肺泡水腫。很多感染的豬表現(xiàn)為彌散的淋巴衰竭，一些豬還有鼻炎。這些新的狀況說明淋巴損傷和血管損壞相結(jié)合，可以將其歸入PCV2-SD （Langohr等， 2010； Opriessnig等， 2006b），只是表現(xiàn)為急性臨床經(jīng)過。

4 PCVDs診斷要點(diǎn)

PCV2-SD是一種多因素豬病，而PCV2是潛在的傳染源（Segales等， 2005a）。由于該病毒廣泛傳播，許多但不是全部表現(xiàn)明顯臨床體征的PCVDs認(rèn)為是多種因素、復(fù)雜原因產(chǎn)生的，而PCV2是嚴(yán)格的必須因子。在所有的PCVDs中，PCV2-SD被認(rèn)為是經(jīng)濟(jì)上最重要的一種（Armstrong和Bishop， 2004）。然而目前疫苗的廣泛使用證實(shí)PCV2-SI經(jīng)濟(jì)上可能是全世界更重要，因?yàn)榇蠖鄶?shù)但并非全部農(nóng)場都感染了該病毒（Young等， 2011）。亞臨床感染造成的具體損失還有待闡明。

診斷的第一步總是涉及到發(fā)現(xiàn)明顯疾病時(shí)臨床癥狀的分析。表1總結(jié)了本綜述認(rèn)為的PCVDs的主要癥狀，但是需要注意這些癥狀對每個(gè)PCVDs沒有特異性。因此針對每個(gè)情況都應(yīng)有區(qū)分診斷的列表，這在其它文獻(xiàn)中均有報(bào)道（Harding和Clark， 1997； Segalés， 2002； Segalés等， 2005a）。有趣的是，PCV2疫苗的使用可能代表了評估PCV2-SI影響的強(qiáng)制措施（Young等， 2011）。

如表1所示，現(xiàn)在對所有的PCVDs都可以給出診斷建議（Segalés， 2002； Segalés等， 2005a； Sorden， 2000）。這些診斷標(biāo)準(zhǔn)非常嚴(yán)謹(jǐn)，因?yàn)镻CV2是常見的病毒，對PCVDs的診斷不能僅僅依賴診斷病毒或抗體（McNeilly等， 2002； Opriessnig等， 2007； Segalés和Domingo， 2002）。根據(jù)個(gè)體標(biāo)準(zhǔn)（PCV2-SD，PCV2-LD，PCV2-ED和晚期PCV2-RD），實(shí)驗(yàn)室有許多診斷PCVDs的簡單方法。雖然前面提到可能會(huì)有重疊，但是如前面提到的那樣，PCV2-SI的實(shí)驗(yàn)室診斷評估可能很容易，不過病毒在自然界廣泛傳播阻礙了臨床獸醫(yī)建立這些診斷方法。然而，PCV2與回歸到發(fā)情期的關(guān)系現(xiàn)在還處于實(shí)驗(yàn)階段（Mateusen等， 2007）。因此這些觀察應(yīng)該與田間數(shù)據(jù)對比，這種情況下最終的診斷標(biāo)準(zhǔn)還有待深入研究（表1）。

考慮到PCV2抗原和/或核酸與PCV2-SD組織病理學(xué)損傷有很強(qiáng)的相關(guān)性，有人提出了不處死豬的診斷方法。具體說來，一些研究提出血清中實(shí)施熒光定量PCR閾值作為PCV2-SD的診斷標(biāo)準(zhǔn)：104.7（Harding等， 2008），106.21（Grau-Roma等， 2009），106.91（Fort等， 2007），107（Brunborg等， 2004； Olvera等， 2004； Segales等， 2005b）和107.43（Grau-Roma等， 2009）病毒拷貝/mL。不同實(shí)驗(yàn)室之間qPCR診斷極限有很大差異（Harding等， 2009； Hjulsager等， 2009）。因此，PCV2診斷閾值取決于實(shí)驗(yàn)室和診斷技術(shù)的使用。重要的是，qPCR觀察到的敏感性和/或特異性數(shù)據(jù)（單獨(dú)或與血清學(xué)結(jié)合）不能替代對PCV2-SD的組織病理學(xué)和組織中檢測PCV2（Grau-Roma等， 2009）。后來有人嘗試用群體混合血清作為樣本來優(yōu)化qPCR的敏感性和特異性（Cortey等， 2011）。雖然這些技術(shù)參數(shù)不能證明，但是群體血清看起來是對PCV2-SD可疑群體PCV2載量定量的節(jié)省成本的方式。

使用qPCR診斷除了PCV2-SD的PCVDs還很少，雖然已經(jīng)確定了PCV2-SI（Brunborg等， 2010； Cortey等， 2011； Grau-Roma等， 2009），PCV2-RD（Brunborg等， 2007； Hansen等， 2010a）和PDNS（Aramouni等， 2011； Olvera等， 2004）。對丹麥經(jīng)歷了增多的死胎和木乃伊胎的豬群（Hansen等， 2010a）進(jìn)行PCV2-RD診斷，得到了有趣的數(shù)據(jù)。基于數(shù)據(jù)和樣本的可重復(fù)性，不同診斷方法的價(jià)值被評估。對仔豬心臟中PCV2的免疫組織化學(xué)檢測對診斷急性繁殖障礙非常有用，qPCR在長時(shí)間的間隔診斷是非常敏感的（Hansen等， 2010a）。特別是仔豬組織中qPCR值高于107 PCV2 DNA 拷貝數(shù)/500 ng（Brunborg等， 2007； Hansen等， 2010a），患有心肌炎仔豬高于105 PCV2 DNA 拷貝數(shù)/500 ng都被認(rèn)為是PCV2-RD的明顯標(biāo)志。相比之下檢測仔豬體液IgG給出不確定結(jié)果，因?yàn)镻CV2存在尿道內(nèi)感染（Hansen等， 2010a）。

當(dāng)一個(gè)動(dòng)物感染一種特定疾病時(shí)，個(gè)體案例定義是關(guān)鍵。然而，防控措施需要依賴群體診斷來建立，而不是根據(jù)個(gè)別豬的診斷。我們給出了在群體水平建立PCV2-SD診斷的標(biāo)準(zhǔn)建議（www.pcvd.eu）。這些群體診斷基于兩個(gè)要素：（1）斷奶仔豬死亡率顯著增加，伴有與PCV2-SD抑制的臨床體征；（2）在剖檢的3～5頭豬至少有1頭診斷為PCV2-SD（表1），同時(shí)死亡率增加（www.pcvd.com），排除其它在這種情況下死亡率可能增加的原因。目前沒有群體診斷出的PCVDs不是PCV2-SD的。

PCV2疫苗的有效性使人們對PMWS診斷的缺乏興趣，至少一部分比例的臨床獸醫(yī)喜歡反復(fù)試驗(yàn)系統(tǒng)，而不是建立實(shí)驗(yàn)室診斷方法。產(chǎn)生這種喜好的主要原因是建立針對全世界PCVD病例的診斷確切方法非常困難。

現(xiàn)在全世界豬群健康項(xiàng)目的趨勢是廣泛免疫仔豬抵抗PCV2感染（在臨床感染和亞臨床感染豬群）。在這種情況下，疫苗免疫前的實(shí)驗(yàn)室診斷（主要是PCV2-SD）沒有意義。相比之下，建立一個(gè)實(shí)驗(yàn)室診斷方法的興趣可能在其它情況會(huì)增加：（1）PCVD樣臨床癥狀出現(xiàn)在PCV2疫苗免疫豬群（2）PCV2免疫的農(nóng)場需要進(jìn)行確認(rèn)。這些情況相對會(huì)比較新。獸醫(yī)必須要認(rèn)識到PCV2疫苗可能不會(huì)像預(yù)期那樣有效或可能失敗。為了達(dá)到這一結(jié)果，需要有完整的診斷研究，不僅僅針對PCV2，還有其它引起生長退化和致死率的原因。

5 討論

自然界中廣泛存在的PCV2感染和PCV2-SD實(shí)驗(yàn)性復(fù)制的難度對了解病毒如何引起明顯的疾病造成困難（Segalés等， 2005a）。最初報(bào)道PCV2-SD的十五年后（Harding， 1996），PCV2感染豬發(fā)展為PCV2-S1或臨床PCVD的精確機(jī)制還有待闡明（Kekarainen等， 2010）。因此臨床和病理學(xué)研究在描述和定性明顯的PCVD是必須的，可以推測這些情況下的致病機(jī)理（Harding， 2004； Segalés等，2004）。此外，PCV2感染的臨床和病理學(xué)認(rèn)知在90年代晚期得到拓展，現(xiàn)在PCVD的分類命名基于嚴(yán)格的診斷標(biāo)準(zhǔn)（表1）。PDNS（免疫復(fù)合疾病）歸根于PCV2緣由的最大問題是對這些綜合征的定性不包括PCV2的檢測，實(shí)驗(yàn)性復(fù)制PDNS的可能性很小是因?yàn)樗俣ǖ闹虏⌒裕℉elie等， 1995； Segalés等， 1998； Thibault等， 1998）。因此，即使將來對臨床病理學(xué)的認(rèn)識更加廣泛（Cino-Ozuna等， 2011），PCV2感染仍舊會(huì)有一些問題值得更深入研究。淋巴細(xì)胞衰竭和淋巴組織肉芽腫性炎癥（Kim 和 Chae， 2004； Nielsen等， 2003； Tsai等， 2010），壞死性淋巴腺炎（Galindo-Cardiel等， 2011； Kim 和 Chae， 2005），心血管損傷（Langohr等， 2010； Opriessnig等， 2006b）和肝臟損傷（Krakowka等， 2004； Resendes等， 2011； Sinha等， 2011）僅僅只是一些很好描述的病理學(xué)特征的例子，而對他們致病機(jī)理的認(rèn)識卻很少。此外，雖然有一些PCV2-RD實(shí)驗(yàn)性研究（Mateusen等， 2007； Pensaert等， 2004； Sánchez等， 2001， 2004），但是對PCV2感染在生殖黏膜，胚胎和仔豬的致病機(jī)理還不太了解。

PCV2疫苗免疫的成功與臨床疾病的控制和組織損傷的預(yù)防相關(guān)（Desrosiers等， 2009； Horlen等， 2008； Kixmoller等， 2008； Pejsak等， 2010； Segalés等， 2009）。疫苗在PCVD養(yǎng)豬場廣泛使用會(huì)使PCVD從全世界嚴(yán)重爆發(fā)（1997～2007）轉(zhuǎn)變?yōu)樽陨硐拗苼喤R床感染，偶爾爆發(fā)。因此，對獸醫(yī)和病理學(xué)家非常重要的是更新PCV2感染的結(jié)果、診斷的可能性和相應(yīng)的正確解釋。

6 致謝

本綜述作者感謝歐盟6期框架協(xié)議（項(xiàng)目號513928），項(xiàng)目GEN2003-20658-C05-02和西班牙教育和科學(xué)部的Consolider Ingenio 2010-PORCIVIR的資金支持。他誠摯的感謝所有的臨床獸醫(yī)和PCV2疫苗生產(chǎn)商，在過去的14年間的合作、幫助和討論。最后特別感謝此期間Sanitat動(dòng)物研究中心（CReSA）和巴塞羅那自治大學(xué)（UAB）許多研究者和技術(shù)員在此期間的合作，以及UAB獸醫(yī)學(xué)院臨床病理學(xué)診斷系的技術(shù)人員。最后作者誠摯的感謝Tuija Kekarainen博士（Sanitat動(dòng)物研究中心，CReSA，西班牙）對英語的修改。