不同抗凝劑及標本放置時間對T淋巴細胞亞群檢測結果的影響

摘要：目的 探討不同抗凝劑及標本放置對流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群檢測結果的影響。方法 采集健康體檢者血液，分別用肝素鈉、EDTA-K2抗凝，室溫保存，在不同時間進行T淋巴細胞亞群檢測。結果 EDTA-K2抗凝血與0h相比，CD3+、CD8+細胞百分率在24h開增高，CD3+到48h明顯增高（P<0.05），CD8+細胞到36h明顯增高（P<0.05），CD4+細胞到72h變化無統計學意義（P>0.05）；肝素鈉抗凝血CD3+、CD4+、CD8+細胞到72h與0h相比無統計學意義（P>0.05）。結論 不同抗凝劑在室溫下不同保存時間對T淋巴細胞檢測有影響，EDTA-K2抗凝的標本在室溫下應在24h內完成檢測；肝素鈉抗凝的標本可在72h內測定。

關鍵詞：流式細胞術；標本放置時間；T淋巴細胞亞群

T淋巴細胞亞群是目前臨床用于評估患者細胞免疫功能常用的檢測指標之一，其準確性直接影響臨床診斷。因此標本采集真空采血管所用抗凝劑及標本送檢及保存時間等因素都會影響測定結果。針對這一問題，本研究對靜脈血采集后不同抗凝劑、標本放置時間對T淋巴細胞亞群的影響進行實驗分析和評估，報道如下。

1資料與方法

1.1標本來源 2013 年9月本院健康體檢者10例，其中男6例，女4例，平均年齡37歲。

1.2主要儀器和試劑 Beckman Coulter公司FC500型流式細胞儀，熒光標準微球Flow-Check、CD45-FITC /CD3- PE-Cy5/CD4-PE/CD8-ECD及同型對照均購自Immunotech公司。

1.3方法 空腹采集健康體檢者靜脈血于EDTA-K2及肝素鈉抗凝管各2.0mL，充分混勻，室溫（20℃）保存。分別于采血后0h、1h、2h、4h、8h、12h、16h、24h、36h、48h及72h按常規方法用CD45-FITC /CD3- PE-Cy5/CD4-PE/CD8-ECD標記并設同型對照；用熒光標準微球Flow-Check校準流式細胞儀的光路和流路，用同型對照設定陽性域值后檢測，每份樣本均檢測并分析10000個細胞，記錄各抗原表達的百分率。

1.4統計學處理 使用SPSS12.0統計軟件包進行統計學分析，各抗原表達的百分率以x±s表示，組間比較常用t檢驗。

2結果

2.1 EDTA-K2抗凝不同時間CD3+、CD4+、CD8+表達見表1。CD3+、CD8+細胞抗原表達隨著標本放置時間的延長而逐漸增高，CD8+細胞到36h、CD3+細胞到48h與0h相比明顯增高，差異有統計學意義（P<0.05）；CD4+細胞放置到72h變化無統計學意義（P>0.05）。

2.2 肝素鈉抗凝不同時間CD3+、CD4+、CD8+表達見表2。CD3+、CD4+、CD8+細胞抗原表達在標本放置到72h與0h相比無統計學意義（P>0.05）。

3討論

通過流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群評估機體細胞免疫功能是目前普遍采用的方法。但由于受醫院設備條件和地理等因素的限制，采樣送檢與上機檢測間往往不能緊密銜接，樣品保存時間過長會影響結果。而細胞不同抗原的表達對不同抗凝劑抗凝全血及抗凝血放置時間的要求各不相同[1，2]。

本組測定結果顯示，EDTA-K2抗凝的血液標本，CD3+，CD8+細胞抗原表達分別從24h和16h逐漸增高，CD3+在樣品保存至48h與0h相比明顯增高（P<0.05），CD8+細胞抗原表達在樣品保存至36h與0h相比有顯著差異（P<0.05）；CD4+細胞放置到72h抗原表達變化無統計學意義（P>0.05）。這是否與隨著標本放置時間過長使細胞膜通透性增加，胞漿內抗原的暴露，還是其它原因引起有待于進一步研究。肝素鈉抗凝的血液標本CD3+、CD4+、CD8+細胞抗原表達在標本放置到72h與0h相比無統計學意義。

綜上所述，不同抗凝劑的抗凝血及在室溫下不同保存時間對T淋巴細胞檢測有影響。在用流式細胞儀檢測T淋巴細胞時，建議最好用肝素鈉作抗凝劑，而用EDTA-K2抗凝時，標本應該在24h內完成檢測。

參考文獻：

[1]曹魯寧，張玲珍，仲人前，等.流式細胞儀檢測人白細胞抗原-B27的影響因素[J].檢驗醫學，2007，22（3）：233-234.

[2]張愛梅，翟志敏，徐修才，等.標本放置時間及年齡對CD4+CD25+調節性T細胞的影響[J].免疫學雜志，2007，22（1）：62-65.

編輯/孫杰