血清胱抑素C在AU2700系統上測定的方法學評價

陳愛金 涂斐佩

摘要：目的：探討膠乳凝集法在奧林帕斯AU2700非原裝試劑自建系統中測定血清胱抑素C的性能評價。方法：方法評價血清胱抑素C測定的精密度、回收率、檢測限、干擾因素、線性范圍。結果：膠乳凝集法測定血清Cys C批內變異系數為1.52 %（低值） 、1.25 %（高值） 日間變異系數為2.73 %（低值） 、1.77 %（高值）平均回收率為97.3 % 檢測線性范圍為0.1～ 6.00 mg/L。總膽紅素正干擾在573 mol/L，血紅蛋白負干擾6 g/L ，甘油三酯負干擾12 mmol/L以下對Cys C偏差﹤5 % 。基本不受溶血、黃疸和脂血干擾。結論：：膠乳凝集法測定血清Cys C快速、準確、精密度高，可作為腎臟功能損傷的指標。

關鍵詞：胱抑素C腎小球濾過率肌酐清除率

【中圖分類號】R453【文獻標識碼】 A【文章編號】1002-3763（2014）09-0040-01為了評價該試劑盒的性能指標我們依據美國國家臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）頒發的文件對該法測定CysC進行初步評價。

1 材料與方法

1.1 實驗標本：對照組40例無心肝腎等病史男20例，女20例41～59歲。腎臟病組40例，男21例，女20例，年齡16～58歲。

1.2 儀器與方法：血清Cys C采用OLYMPUSAU2700測定血清Cys C試劑采用美國G.cell公司膠乳凝集法檢測試劑盒。主要反應參數為血清3μl，？試劑1180μl，試劑260μl，測定波長570/800nm，固定時間法正反應讀點13～27。

1.2.1 方法學評價：（1）精密度取高低值2個不同水平的混合血清Cys C樣品每天測定2次（2次間隔不少于2h）每次測定均做雙份連續測定20d按NCCLS EP-5A文件進行精密度評價；（2）線性分析取0.1mg/L和6.00mg/L的混合血清按0/4、1/3、2/2、3/1、4/0比例混合制備5個不同Cys C水平的標本，各測定4次按NCCLS EP-6A文件進行線性分析；（3）干擾試驗將混合血清分成2份，1份加入1/10體積的含膽紅素5730mol/L的高總膽紅素血清，另一份不加。然后將兩標本按照4/0、3/1、2/2、1/3、0/4比例混合成5個不同濃度，每份標本重復測定10次，計算平均干擾值。用同樣方法加入含血紅蛋白為12g/L的溶血物和含甘油三酯為18mmol/L的脂肪乳 重復測定10次計算各自的干擾值。干擾值=各組均值-未加干擾物的各組均值。按照NCCLS EP-7文件進行干擾試驗評價；（4）最低檢測濃度以9g/L NaCl溶液作標本測定21次，用x+3s計算最低檢測濃度；（5）回收率取Cys C（0.68？mg/L）樣本分別與標準Cys C溶液（0.524mg/L）等體積混合，測定混合液中Cys C含量，計算出樣本中加入標準Cys C后的測得值（回收值）以求得回收率

1.2.2 試劑和標本的穩定性：試劑1和2分別放入AU2700中每5天測定1次試劑空白同時測定高低質控血清將混合血清標本分裝后分別置于室溫4℃、-20℃定期測定Cys C濃度。

2 結果

2.1 精密度評價：采用EP-5A可以對批內批間日間及總精密度進行計算高低混合血清批內精密度分別為1.25%、1.52%日間精密度分別為1.77%、2.73%

2.2 線性分析：線性范圍內不同濃度的稀釋水平重復4次取均值本法線性回歸方程為Y=0.9966X+0.0183

r=0.9999，表明Cys C在0.1～6.0mg/L范圍內線性良好

2.3 最低檢測濃度：21次結果中11次為0.01mg/L，8次為0mg/L，2次為0.02mg/L。x=0.0071mg/L，s=0.00644。最低檢測限為0.03mg/L。

2.4 回收率在血清：Cys C為0.68 mg/L時加入等體積濃度分別為0.5 mg/L、2 mg/L、4 mg/L。Cys C的標準液加入標準液的濃度分別為1/2原標準液濃度。回收率分別為（96%.97%、99%）

2.5 干擾試驗：總膽紅素正干擾在573mol/L血紅蛋白負干擾6g/L，甘油三酯負干擾12mmol/L以內相對偏差﹤5%

2.6 試劑和樣本的穩定性：試劑置4℃30d內試劑空白保持不變，高低質控血清變化值﹤1%，血清標本置于室溫（25℃）6d，4℃ 12d及-20℃ 30d，血清Cys C變化≤5%

3 討論

NCCLS文件對于檢驗醫學的標準化具有重要的指導意義[1]，本研究全部試驗過程使用單一批號試劑和校準品。試驗結果顯示該CysC試劑盒具有較好的精密度，批內日間及總變異系數均﹤5%，檢測線性范圍為0.1～6.00mg/L，基本不受溶血黃疸和脂血的影響，最低檢測限0.03mg/L，平均回收率為97.3%。能夠較好地滿足臨床需要試劑在儀器倉中開蓋長達30d，無需定標，試劑吸光度幾乎無變化。說明本試劑膠乳包被技術穩定液體試劑均勻一致，不會隨著時間的延長出現膠乳沉淀的現象。血清標本置4℃冷藏12d血清Cys C值基本不變，說明樣品易于保存。本研究的方法是臨床實驗室常規測定血清Cys C的首選方法近年來，國外對Cys C的臨床應用報道較多，認為其血濃度能夠較準確地反映GFR[2]，Cys C可以自由通過腎小球濾過，幾乎完全在腎小管重吸收及分解代謝，因此Cys C是反映腎小球濾過率的一個非常好的標志物。

Cys C的濃度不受炎癥反應、惡性腫瘤、肌肉、性別及年齡等多種外界因素的影響，更證明Cys C成為優于傳統的血尿素、尿酸、肌酐和內生肌酐清除率檢測的新的腎功能評價指標。

參考文獻

[1]Laverdiere M， Restieri C， Habel F. Evaluation of the in vitro activity of caspofungin against bloodstream isolates of Candida speciesfrom cancer patients：comparison of Etest and NCCLS reference methods.Int J Antimicrob Agents，2002，20：468-471

[2]Le Bricon T，Thervet E，Froissart M，et al.Plasma cystatin C issuperior to 24 -h creatinine clearance and plasma creatinine for estimation of glomerular filtration rate 3 months after kidney transplantation.Clin Chem，2000， 46：1206-1207