HPLC法檢測(cè)藥品中有關(guān)物質(zhì)殘留的研究

作者簡(jiǎn)介：張靜（1981.8- ）女，滿族，河南商丘人，上海現(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司化驗(yàn)員，研究方向：液相。摘要： 有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)是對(duì)藥品中殘留合成原料、中間體、副產(chǎn)物及可能的降解產(chǎn)物的檢測(cè)，是對(duì)藥品質(zhì)量控制的一項(xiàng)重要指標(biāo)，目的是根據(jù)安全性的要求檢測(cè)藥品中所含上述雜質(zhì)是否符合標(biāo)準(zhǔn)。下面就工作中遇到的一些問題以及我們的一些解決辦法與大家交流一下。

關(guān)鍵詞：HPLC；藥品有關(guān)物；殘留檢測(cè)

【中圖分類號(hào)】R453【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A【文章編號(hào)】1002-3763（2014）09-0109-021 關(guān)于藥品中有關(guān)物質(zhì)殘留檢查研究的一點(diǎn)建議：

1.1 有關(guān)物質(zhì)檢查常用的方法是主成分自身對(duì)照法和已知雜質(zhì)對(duì)照品比較法。對(duì)于主成分自身對(duì)照法，采用此方法時(shí)確定的檢測(cè)波長(zhǎng)是否合理直接影響到方法的可行性，因此，檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇是方法學(xué)研究的重要內(nèi)容。

1.2 我們認(rèn)為一些藥物采用HPLC主成分自身對(duì)照法檢查有關(guān)物質(zhì)時(shí)直接以主成分的最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)不合理。

2 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中遇到的問題

日常工作中我們常遇到的問題主要有：雜質(zhì)峰和輔料峰不好界定；理論板數(shù)要求過高；關(guān)于溶劑峰；其它干擾；藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的保留時(shí)間不夠。

2.1 理論板數(shù)問題：例如：對(duì)乙酰氨基酚有關(guān)物質(zhì)檢查是用對(duì)氨基酚作雜質(zhì)對(duì)照品，對(duì)氨基酚保留時(shí)間為6分鐘，對(duì)乙酰氨基酚的保留時(shí)間為15分鐘，兩者分離度在10以上，但由于對(duì)乙酰氨基酚的進(jìn)樣量過大，所以理論板數(shù)達(dá)不到要求的5000，更換多支柱子仍達(dá)不到，但樣品濃度在含量測(cè)定下時(shí)理論板數(shù)達(dá)6000以上。我們認(rèn)為本法只測(cè)定對(duì)氨基酚，只要兩者的分離度達(dá)到要求就可以，而樣品峰的理論板數(shù)與測(cè)定無關(guān)。

2.2 關(guān)于溶劑峰：在有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)溶劑峰，特別是低波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)溶劑峰更大，這樣會(huì)使雜質(zhì)峰的面積增大，造成有關(guān)物質(zhì)的量不準(zhǔn)確。我們的經(jīng)驗(yàn)是：注入一針溶劑，如果保留時(shí)間和峰形與樣品溶液的峰形一致，則表示為溶劑峰，峰面積不能計(jì)入雜質(zhì)峰。

2.3 其他干擾峰

2.3.1 在對(duì)某企業(yè)生產(chǎn)的吡拉西坦氯化鈉注射液有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)時(shí)，液相圖譜在2分多鐘時(shí)出現(xiàn)一個(gè)較大的吸收峰，如果按有關(guān)物質(zhì)算遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了限度。但氯化鈉本身為無機(jī)鹽應(yīng)該沒有吸收，可是雜質(zhì)峰又不可能那么大。為此我們用氯化鈉注射液按同樣濃度進(jìn)樣，結(jié)果色譜圖上出現(xiàn)了相同保留時(shí)間的吸收峰。該峰究竟是由氯化鈉產(chǎn)生的還是氯化鈉中的雜質(zhì)產(chǎn)生的還不能證實(shí)。我們對(duì)多個(gè)廠家的氯化鈉注射液進(jìn)樣均有此吸收峰，所以建議在有關(guān)物質(zhì)檢查中增加氯化鈉空白實(shí)驗(yàn)。

2.3.2 在用薄層色譜法檢查煙酸占替諾有關(guān)物質(zhì)時(shí)采用的為主成分自身對(duì)照法，樣品通過展開顯色后在主斑點(diǎn)下方有一較大的斑點(diǎn)，超出對(duì)照斑點(diǎn)很多倍，多次實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象相同，懷疑此方法存在問題，請(qǐng)示了上級(jí)藥品檢驗(yàn)所和原標(biāo)準(zhǔn)起草單位，答復(fù)是此斑點(diǎn)是煙酸，是正常的。所以有些標(biāo)準(zhǔn)的不完善給我們檢驗(yàn)者也帶來了很多的麻煩。

2.4 藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的保留時(shí)間不夠由于有的藥物與其有關(guān)物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的極性相差較大，因此在液相色譜分析中有關(guān)物質(zhì)按規(guī)定的記錄時(shí)間（為主峰保留時(shí)間的2倍），雜質(zhì)峰沒有完全出現(xiàn)，具體表現(xiàn)是當(dāng)?shù)谝会樧咄旰螅M(jìn)第二針的時(shí)候，峰形與第一針不同，當(dāng)保留時(shí)間延長(zhǎng)到3倍時(shí)，又出現(xiàn)一個(gè)吸收峰，如此按保留3倍多次進(jìn)樣，則峰形—致，說明標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的保留時(shí)間延長(zhǎng)2倍時(shí)間是不夠的。液相色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)時(shí)經(jīng)常遇到的問題是主峰拖尾嚴(yán)重與雜質(zhì)峰分離不開，理論板數(shù)不夠，其原因之一是柱子本身柱效低或柱子用的時(shí)間久了，柱效降低了。當(dāng)遇到這些問題時(shí)我們解決的辦法首先是換柱子，如果發(fā)現(xiàn)柱子拖尾嚴(yán)重，在流動(dòng)相內(nèi)加入0.02%的三乙胺作為掃尾劑，如果分離不好，則調(diào)節(jié)流動(dòng)相，降低有機(jī)相的比例。如發(fā)現(xiàn)是柱子本身問題可打開柱子檢查是否有塌陷或柱頭污染情況，如果有污染可挖去一部分，填上同型號(hào)填料，沖柱即可。

3 乙酰水楊酸制劑中游離水楊酸的檢查

阿司匹林類藥物為常用解熱鎮(zhèn)痛藥，由于阿司匹林易分解為水楊酸和醋酸，而水楊酸對(duì)人體有一定的毒副作用，因此，阿司匹林及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均有游離水楊酸的限度檢查，標(biāo)準(zhǔn)中均采用比色法進(jìn)行檢查。此方法靈敏度底，目視誤差較大。方法研究：乙酰水楊酸鋅是某藥廠生產(chǎn)的原料藥，游離水楊酸也是采用比色法，我們提出是否用HPLC法測(cè)定其含量和游離水楊酸，經(jīng)過多次試驗(yàn)，得到一個(gè)較可行的HPLC法。

3.1 方法：選擇了最常用的C18柱，流動(dòng)相為（6.8g磷酸二氫鉀，加0.1mol/L氫氧化鉀70ml溶解后，加水至850ml，用0.1mol/L氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH為6.3±0.1，加甲醇80ml，再加水1000m1）檢測(cè)波長(zhǎng)290nm，進(jìn)樣量20ul。取供試品相當(dāng)于乙酰水楊酸鋅300mg，加流動(dòng)相使成100ml，濾過，濾液作為供試品溶液；另取水楊酸對(duì)照品15mg，加流動(dòng)相使成200ml，取2ml加流動(dòng)相稀釋至50ml。

3.2 結(jié)果：如供試品溶液中有與對(duì)照品相同保留時(shí)間的吸收峰，其面積不得大于對(duì)照品峰面積。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)線性關(guān)系r=0.9999，加樣回收率為99.5%，RSD=0.5%

3.3 討論

3.3.1 由于乙酰水楊酸鋅在酸性條件下不穩(wěn)定，故選擇的流動(dòng)相和溶劑為中性。

3.3.2 水楊酸易溶于甲醇，所以選擇流動(dòng)相為溶劑。

3.3.3 通過對(duì)其他制劑的實(shí)驗(yàn)證明用此方法檢查游離水楊酸分離效果良好，重現(xiàn)性好，專屬性較強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確。

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