RECK基因GFP融合蛋白真核表達載體的構建及鑒定

劉利軍， 扈 梅， 楊向明， 申致遠， 趙偉禮， 孫沫逸

(1新疆醫科大學口腔醫學院, 新疆醫科大學第一附屬醫院口腔頜面腫瘤外科, 烏魯木齊 830054; 2第四軍醫大學口腔醫學院口腔頜面外科, 西安 710032; 3武警新疆總隊吐魯番支隊, 新疆 吐魯番 838000)

在惡性腫瘤出現局部侵襲生長與發生遠處轉移的過程中，涉及到腫瘤細胞通過多種方式穿破細胞外基質、 浸潤血管壁基膜、促進腫瘤細胞新生微小血管生成及進入腫瘤細胞周邊微環境等復雜多樣的病理過程[1]。而在惡性腫瘤轉移的過程中，由腫瘤細胞分泌的多種蛋白酶降解細胞外基質(ECM)及基底膜的能力被認為與惡性腫瘤的侵襲與遠處轉移的能力密切相關，細胞外基質及基底膜的破壞程度也與患者的預后呈正相關。基質金屬蛋白酶 (MMPs)是這些蛋白酶中最重要的一種蛋白酶，所以在對腫瘤侵襲與轉移的實驗研究中，關于MMP及其抑制劑的研究方興末艾，對其了解的不斷深入，也為臨床治療腫瘤提供了新的途徑。

伴有kazal結構域的富含半胱氨酸的逆轉誘導蛋白(reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs, RECK)基因是1998年 Takahashi等[2]在 v-Ki-ras基因轉染的NIH3T3細胞中發現的一種基因。其染色體定位于 9p13～p12,長度約為87 bp,序列中包含有21個外顯子和20個內含子, 其轉錄子大小為 4.6 KU。相關研究證實，RECK基因在轉錄水平上能有效抑制MMP-2、MMP- 9及 MT1-MMP, 從而抑制腫瘤的侵襲及轉移能力[3]。Frumoto等[4]在有關胰腺星形細胞TGF-beta 信號通路中的研究中發現，抑制RECK蛋白酶水解活性能有效增加ECM的積累。Takahashi等[2]研究發現, 鼠內源性RECK基因在正常的NIH3T3細胞中有表達,而在多種癌基因轉染的細胞中表達水平明顯降低，說明此基因的表達可能受多種癌基因的負向調控而在腫瘤細胞中的表達水平下降。……