注射用泮托拉唑鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的建立

黃洋 趙志龍

注射用泮托拉唑鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的建立

黃洋 趙志龍

目的建立注射用泮托拉唑鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。方法按《中國(guó)藥典》2005 年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法, 對(duì)不同批號(hào)的樣品進(jìn)行了干擾試驗(yàn)和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。結(jié)果注射用泮托拉唑鈉水溶液對(duì)TAL與細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)有干擾作用, 經(jīng)稀釋后可排除干擾。結(jié)論本品不干擾濃度為2 mg/ml可采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行質(zhì)量控制。

注射用泮托拉唑鈉；細(xì)菌內(nèi)毒素；鱟試劑；干擾試驗(yàn)

泮托拉唑鈉為質(zhì)子泵抑制劑, 通過(guò)與胃壁細(xì)胞的H+-K+-ATP酶系統(tǒng)的兩個(gè)位點(diǎn)共價(jià)結(jié)合而抑制胃酸產(chǎn)生的最后步驟。該作用呈劑量依賴性, 并使基礎(chǔ)和刺激狀態(tài)下的胃酸分泌均受抑制。臨床用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、急性胃黏膜病變, 復(fù)合性胃潰瘍等急性上消化道出血; 根據(jù)國(guó)家藥典委員會(huì)關(guān)于注射劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高專項(xiàng)工作有關(guān)精神和“注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則(修訂稿)”的要求, 將“熱原”檢查法修訂為“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”。《中國(guó)藥典》 2005 年版二部未對(duì)其細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行控制, 為保證臨床用藥安全參照《中國(guó)藥典》2005 年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究, 為《中國(guó)藥典》2010 年版注射用泮托拉唑鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 HH-1型恒溫水浴鍋, ZH-2 型自動(dòng)漩渦混合器。

1.2鱟試劑 湛江博康海洋生物有限公司, 靈敏度：0.5 EU/ml；湛江安度斯生物有限公司, 靈敏度：0.25 EU/ml；福州新北生化工業(yè)有限公司, 靈敏度：0.25 EU/ml。

1.3細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品 中國(guó)藥品生物制品檢定所 批號(hào)：2006-5 效價(jià)：120EU/支。

1.4細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 湛江安度斯生物有限公司。①規(guī)格：50 ml ；批號(hào)：0510120；②規(guī)格：2 ml 批號(hào)：0706020。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1供試品細(xì)茵內(nèi)毒素限值的確定 公式：L=K/M M為80 mg/60(kg·h), K為5 EU/(kg·h), 擬定限值L=3.75 EU/mg因此擬定本品內(nèi)毒素限值為 每1 mg注射用泮托拉唑鈉含內(nèi)毒素的量應(yīng)＜3.75 EU。

2.2供試品有效稀釋倍數(shù)(MVD)的計(jì)算 公式C=λ/L其中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值3.75 EU/mg, λ為鱟試劑標(biāo)示靈敏度, 目前市售鱟試劑靈敏度λ通常在0.5～0.06 EU/ ml, 則供試品對(duì)應(yīng)的有效稀釋濃度為：C0.5=0.5 EU/ml /3.75 EU/mg = 0.133mg/ml；C0.25=0.25 EU/ml /3.75 EU/mg =0.067 mg/ ml；C0.125=0.125 EU/ml /3.75 EU/mg =0.033 mg/ml；C0.06=0.06 EU/ml /3.75 EU/mg =0.016 mg/ml。

2.3細(xì)菌內(nèi)毒素干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn) 由于供試品的4 mg/ml稀釋液加入鱟試劑后, 溶液顯混濁, 所以預(yù)試驗(yàn)供試液濃度采用2 mg/ml的濃度, 該濃度加入鱟試劑后溶液澄清。按《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄(Ⅺ E)—細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查。陰性對(duì)照為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水, 陽(yáng)性對(duì)照為1.0 EU/ml內(nèi)毒素溶液, 供試品陽(yáng)性對(duì)照為以供試液稀釋的1.0 EU/ml內(nèi)毒素溶液, 結(jié)果表明, 注射用泮托拉唑鈉在稀釋至2 mg/ml時(shí),使用兩個(gè)廠家的鱟試劑檢查均無(wú)干擾。

2.4干擾試驗(yàn) 按《中國(guó)藥典》2005年版附錄(Ⅺ E)-細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行干擾試驗(yàn)。將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至1.0、0.5、0.25、0.125 EU/ml；根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果, 確定將供試品稀釋至2 mg/ml, 代替細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至上述濃度, 結(jié)果見(jiàn)表1。

正式干擾試驗(yàn)表明：ES均在0.5～2λ, 且Et均在0.5～2 ES；確認(rèn)注射用泮托拉唑鈉的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查在2 mg/ml以下濃度時(shí)進(jìn)行, 無(wú)干擾作用。

2.5細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 按《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄Ⅺ E 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查。陰性對(duì)照為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水, 陽(yáng)性對(duì)照為0.5 EU/ml內(nèi)毒素溶液, 供試液為0.067 mg/ml的供試品稀釋液, 供試品陽(yáng)性對(duì)照為以供試液稀釋的0.5 EU/ ml內(nèi)毒素溶液, 結(jié)果見(jiàn)表2。

表1注射用泮托拉唑鈉干擾試驗(yàn)(λ=0.5 EU/ml)

3 討論

本品濃度為2 mg/ml或以下濃度時(shí)均不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查；內(nèi)毒素?cái)M定限值為每1 mg中含細(xì)菌內(nèi)毒素量應(yīng)＜3.75 EU；按此標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn), 本品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查均符合規(guī)定。注射用泮托拉唑鈉臨床每次靜脈注射最大用量為80 mg。經(jīng)對(duì)12個(gè)生產(chǎn)單位20批產(chǎn)品進(jìn)行干擾試驗(yàn), 確認(rèn)本品在2 mg/ml或以下濃度下對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾；根據(jù)擬定限值對(duì)20批樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查, 結(jié)果均符合規(guī)定。綜合以上結(jié)果, 擬將注射用泮托拉唑鈉熱原檢查項(xiàng)修改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查, 本品在2 mg/ml濃度下不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查, 本試驗(yàn)為《中國(guó)藥典》2010 年版修訂時(shí)增加注射用泮托拉唑鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)提供了依據(jù)。

Establishment of bacterial endotoxin test of pantoprazole sodium for injection

HUANG Yang, ZHAO Zhilong.
Jinzhou Institute for Food and Drug Control, Jinzhou 121000, China

ObjectiveTo establish a method for bacterial endotoxin test of pantoprazole sodium for injection.MethodsAccording to appendix of "Chinese pharmacopoeia" 2005 edition, the interference test and bacterial endotoxin test of different batches of samples were carried out.ResultsThere was interference in the agglutinate reaction between the sample and the relative TAL with pantoprazole Sodium for Injection, and the interference was eliminated after diluted.ConclusionThe noninterference concentration of pantoprazole sodium for injection is 2 mg/ml.The bacterial endotoxin test can be used for the quality control of pantoprazole sodium for injection.

Pantoprazole sodium for injection; Bacterial endotoxin; TAL; Interference test

121000 錦州市食品藥品檢驗(yàn)所(黃洋)；遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所(趙志龍)