連翹中蘆丁和連翹酯苷A的含量測定方法分析

齊迎春

·實驗研究·

連翹中蘆丁和連翹酯苷A的含量測定方法分析

齊迎春

目的對連翹中蘆丁和連翹酯苷A的含量測定方法進行分析探討, 為今后的研究工作提供可靠的參考依據。方法采取反相高效液相色譜法, 選用ThermoODS C18色譜柱, 流動相為甲醇-濃度為2 g/L冰醋酸(20:80), 波長為329 nm。結果蘆丁與連翹酯苷A的進樣量在0.0210～0.4219 μg和0.0152～0.3058 μg之間存在良好的線性關系, 蘆丁與連翹酯苷A的平均回收率為102.6%和103.4%。結論采取反相高效液相色譜法對連翹中蘆丁與連翹酯苷A的含量進行測定時具有操作簡單, 結果準確可靠, 穩定性與精密度良好等優勢, 值得關注并推廣。

連翹；蘆丁；連翹酯苷A ；含量測定；反相高效液相色譜法

已有研究證實［1］, 連翹中的主要有效成分有黃酮類、木質素類、苯乙醇苷類以及揮發油等, 現代藥理研究結果顯示,連翹中的連翹酯苷A具有顯著的抗菌、抗病毒活性, 蘆丁則具有顯著的抗氧化活性。本次研究中出于對連翹中蘆丁和連翹酯苷A的含量測定方法進行分析探討的目的, 采取反相高效液相色譜法對連翹中上述兩種成分的含量展開了測定, 現報告結果如下。

1 儀器與試藥

1.1實驗儀器 實驗中所需儀器為LC-20A高效液相色譜儀、KQ-300超聲波提取器。

1.2實驗試藥與試劑 實驗所需制劑包括：甲醇為色譜純、超純水, 冰醋酸為分析純。實驗所需試藥包括：蘆丁、連翹酯苷A對照品, 連翹藥材。

2 方法與結果

2.1色譜條件［2］色譜柱選用ThermoODS C18柱, 規格為4.6 mm×250 mm, 5 μm, 柱溫為30℃, 流動相配比為：甲醇-濃度為2 g/L的冰醋酸溶液(20:80), 檢測波長選擇329 nm, 進樣量為10 μl, 流速為1.0 ml/min。

2.2對照品溶液制備 分別精密稱定蘆丁與連翹酯苷A對照品適量, 經500 g/L的甲醇溶解后, 配制成濃度分別為21.1 mg/L和15.3 mg/L的混合溶液, 經0.45微孔濾膜濾過后混勻,制成混合對照品溶液。

2.3供試品溶液制備 取連翹藥材, 粉碎, 過40目篩, 精密稱定0.1 g, 放置在具塞錐形瓶中, 精密加入50 ml濃度為500 g/L的甲醇溶液, 稱定質量, 超聲條件下提取30 min, 冷卻至室溫后, 再次稱定質量, 經濃度為500 g/L的甲醇溶液對損失重量進行補充, 搖勻后過濾, 濾液過0.45微孔濾膜后制得供試品溶液。

2.4線性關系考察 精密吸取2.2所制混合對照品溶液1、2、5、10、15、20 μl, 注入到液相色譜儀中, 以2.1所示色譜條件進行測定, 以峰面積作為縱坐標, 以進樣量作為橫坐標, 作線性回歸方程, 結果為：Y蘆丁=590209X-732.33, r=0.9999, Y連翹酯苷A=653571X+686.79, r=0.9999。蘆丁與連翹酯苷A的進樣量在0.0210～0.4219 μg和0.0152～0.3058 μg之間存在良好的線性關系。

2.5精密度考察 精密吸取2.2所制備的混合對照品溶液,10 μl進樣, 連續測定5次, 對峰面積進行記錄, 計算RSD值,結果為：蘆丁的RSD值為1.20%, 連翹酯苷A的RSD值為1.15%。證實儀器精密度良好。

2.6重現性實驗 精密稱定同一批次的連翹粉末0.1 g, 分成5份, 在2.3所示條件下制成供試品溶液, 在2.1所示色譜條件下進樣檢測, 記錄峰面積, 計算RSD值, 結果為：蘆丁的RSD值為1.51%, 連翹酯苷A的RSD值為1.48%, 證實該方法的重現性良好。

2.7穩定性實驗 精密稱定0.1 g連翹粉末, 如2.3所示條件制成供試品溶液, 室溫下放置0、2、4、6、8、12、24 h后, 在2.1所示色譜條件下進樣檢測, 記錄峰面積, 計算RSD值, 結果為：蘆丁的RSD值為1.32%, 連翹酯苷A的峰面積為1.37%, 證實供試品溶液在24 h內具有良好的穩定性。

2.8加樣回收實驗 精密稱定已知含量的連翹樣品粉末0.1 g,蘆丁的含量為2.54 mg/g, 連翹酯苷A的含量為4.88 mg/g, 共分成6份, 分別精密加入濃度為500 g/L的甲醇溶液進行溶解,制成20 ml蘆丁質量分數為21.1 mg/L和15.3 mg/L的混合對照品溶液, 而后精密加入30 ml 500 g/L的甲醇溶液, 按照2.3所示條件制備加樣回收實驗供試品溶液, 在2.1所示色譜條件下10 μl進樣檢測, 記錄峰面積, 計算蘆丁與連翹酯苷A的回收率。結果詳見表1。

表1 連翹中蘆丁與連翹酯苷A加樣回收實驗結果統計

2.9樣品測定 取3個批次的連翹樣品粉末, 在2.3所示條件下制成供試品溶液, 在2.1所示色譜條件下10 μl進樣檢測,記錄峰面積, 計算蘆丁與連翹酯苷A含量, 結果為：蘆丁的含量分別為2.61、2.56、2.41 mg/g, 連翹酯苷A的含量分別為4.95、4.89、4.69 mg/g。

3 討論

近幾年隨著中藥領域的發展, 使得中藥有效成分研究不斷深入, 已有研究證實, 蘆丁與連翹酯苷為連翹的主要活性成分, 在連翹定性與定量研究中可作為重要觀察指標。本次研究中采取反相高效液相色譜法對連翹中蘆丁與連翹酯苷A含量進行了測定, 結果發現, 該方法具有操作簡單、結果準確可靠、精密度與穩定性良好等諸多優勢, 值得關注并推廣。

［1］ 郭強, 王智民, 林麗美, 等.連翹屬藥用植物化學成分研究進展.中國實驗方劑學雜志, 2009, 15(5):74-79.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部.北京:中國醫藥科技出版社, 2010:159-160.

2014-04-04］

130022 長春, 解放軍第二○八醫院四六一臨床部