高效液相色譜法測定氯鋅油中氯霉素含量

胡娟妮，聶 平，鄧永琪，李曉燕，李文莉

(1. 中南大學，湖南 長沙 410013;2. 湖南省食品藥品檢驗研究院，湖南 長沙 410001)

氯鋅油為第2 版《中國醫院制劑規范·西藥制劑》收載的制劑，由氯霉素、氧化鋅、麻油等組方，適用于亞急性及慢性皮炎、濕疹、燙傷等，對嬰幼兒重度臀紅有良好效果[1-2]。低鈣血癥患兒靜脈滴注時出現局部皮膚紅腫、水皰時，給予氯鋅油局部涂藥后，可不需拔針重新穿刺，減輕了患兒痛苦[3]。改良后的氯鋅油滲透性強，具有減輕組織水腫、軟化痂皮的作用，適用于小兒消化道術后皮膚感染[4]。氯鋅油的現行標準均為各醫院的注冊標準，各標準中缺乏對氯霉素的含量控制方法，因此建立該品種中氯霉素的含量測定方法很有必要。筆者建立了氯鋅油中氯霉素的含量測定方法，旨在為有效地控制氯鋅油的質量提供參考。

1 儀器與試藥

LC-20AT 型高效液相色譜儀(日本島津公司);LC Solution色譜工作站;Mettler AE-200 型電子天平，Mettler CP-225D 型電子天平(德國梅特勒公司);超高速離心機。重蒸餾水自制，甲醇為色譜純，均經0.45 μm 濾膜過濾;其余試劑均為分析純;氯霉素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為130555-200602，含量99.4%)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Waters C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.01 mol /L 庚烷磺酸鈉緩沖溶液(取磷酸二氫鉀6.8 g，用0.01 mol/L 庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，混勻，用磷酸調節pH 至2.0)-甲醇(60 ∶40);流速:1.0 mL/min;檢測波長:277 nm;柱溫:30 ℃。理論板數按氯霉素計，不低于5 000。

取對照品溶液、供試品溶液及缺氯霉素的陰性對照品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果表明，樣品中其他成分對氯霉素的測定無干擾，見圖1。

2.2 溶液制備[5]

圖1 高效液相色譜圖

精密稱取氯霉素對照品52.03 mg，置50 mL 容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液各0.5，2.0，5.0，20.0 mL，分別置50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.010 34 g /L 的對照品溶液Ⅰ、0.041 37 g /L 的對照品溶液Ⅱ、0.103 4 g /L 的對照品溶液Ⅲ、0.413 7 g /L 的對照品溶液Ⅳ、以及1.034 mg /mL 對照品溶液Ⅴ。精密稱取本品適量(約相當于氯霉素10 mg)，置50 mL 離心管中，加入石油醚(30-60)25 mL 使溶解，搖勻，4 000 r/min 離心3 min，棄去上清液，加甲醇25 mL，搖勻，3 000 r/min 離心2 min，收集上清液于100 mL 容量瓶中，再重復收集甲醇提取液2 次，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方比例和方法去除氯霉素外的其余輔料制成缺氯霉素樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺氯霉素的陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品溶液Ⅰ～Ⅴ各10 μL，注入高效液相色譜儀測定，以峰面積積分值為縱坐標、樣品質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=2 ×107X-209 35，r=1。結果表明，氯霉素對照品質量濃度在0.010 34 ～1.034 g/L 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:取氯霉素對照品溶液Ⅲ，按擬訂色譜條件，連續進樣6 次，每次10 μL，記錄色譜峰面積。結果的RSD 為0.08%。表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液(批號為120427)，分別于配制后的0，1，2，4，6，8 h 時，精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，測定氯霉素峰面積。結果的RSD 為0.39%，表明供試品溶液8 h 內穩定。

重復性試驗:取同一批(批號為120427)樣品，依法制備供試品溶液，測定氯霉素的含量。結果氯霉素的平均含量為標示量的98.6%，RSD 為0.94%，表明方法重復性良好。

回收率試驗:精密稱取氯霉素原料9 份，分別加入相應處方量的空白輔料，制成每2 g 中約含氯霉素的量分別為0.08，0.10，0.12 mg 的溶液，按照樣品處理方法處理，加甲醇至刻度，搖勻;另取氯霉素原料適量，加甲醇定量稀釋并制成每1 mL 含氯霉素0.10 mg 溶液，作為對照品溶液。分別取對照品溶液和供試品溶液各10 μL 注入高效液相色譜儀;按外標法計算。結果見表1。

表1 氯霉素加樣回收試驗結果( n=9)

2.4 樣品含量測定

取不同批次的氯鋅油樣品，依法制備供試品溶液。結果批號為120427 和120509 的樣品含量為標示量的98.5%和99.3%。

3 討論

供試品溶液制備方法的確定:參照2010 年版《中國藥典(二部)》中氯霉素的性狀[6]，氯霉素在甲醇、乙醇、丙酮或丙二醇中易溶，在水中微溶，而氧化鋅在水或乙醇中幾乎不溶，故首先采用石油醚除去輔料麻油，再用甲醇提取氯霉素。本試驗考察了不同提取方式、提取次數、提取時間的提取效率，選擇最優提取條件。而離心的目的是分離溶液與沉淀，便于收集上清液，故離心的轉速與時間不會影響氯霉素的提取效率，在試驗過程中觀察發現3 000 r /min 離心2 min 時，易于收集上清液。

檢測波長選擇:采用紫外分光光度法測定，氯霉素在277 nm 波長附近有最大吸收，因2010 年版《中國藥典(二部)》氯霉素項下含量測定選擇277 nm 波長作為檢測波長，故本試驗選擇該檢測波長。

流動相選擇:本試驗曾采用甲醇-水體系洗脫，但氯霉素峰形拖尾，理論板數較低，采用甲醇-庚烷磺酸鈉緩沖溶液體系后收到了很好的效果，可以滿足測定需要。

[1] 陳淑英，陳春青，陳紅梅，等. 氯鋅油軟膏用于嬰兒紅臀的效果觀察[J]. 當代護士，2008(11):39.

[2] 丁川中，王鳳姣，肖 嬪，等.2 種藥物治療嬰幼兒重度臀紅的效果比較[J]. 當代護士，2009(10):60.

[3] 楊亞玲，邵成香. 氯鋅油治療靜脈注射鈣劑外滲[J]. 護理學雜志，2002，1(17):27.

[4] 王可為. 改良氯鋅油軟膏在小兒消化道術后皮膚感染中的應用[J].護理學雜志，2007，2(22):62.

[5] 魏丕紀，劉鳳聲，董偉海，等. 氯鋅油軟膏的制備及臨床應用[J]. 中國醫院藥學雜志，2001，21(9):564.

[6] 國家藥典委員會. 中國藥典二部[J]. 北京:中國醫藥科技出版社，2010:1 029 -1 030.