高效液相色譜法測定清宮長春膠囊中芍藥苷含量

李 君，黨曉偉，黃飛龍，商春麗

(1. 頸復康藥業集團有限公司，河北 承德 067000; 2. 河北省中藥新輔料工程技術研究中心，河北 承德 067000;3. 承德護理職業學院，河北 承德 067000)

清宮長春膠囊是頸復康藥業集團生產的具有延緩衰老、補益強壯作用的方藥，系根據清代宮廷成方長春益壽丹研制而成，1999 年2 月經國家藥監局批準列為國家二級中藥保護品種。該藥由人參、當歸、白芍、天冬、牛膝、茯苓、五味子、石菖蒲、枸杞子、麥冬、生熟地、遠志、覆盆子、杜仲、木香、花椒、菟絲子、地骨皮、山藥、山茱萸、柏子仁、澤瀉、肉叢蓉共24 味藥組方，具有補腎益精、強筋壯骨、延緩衰老之功效，治療神衰體弱、精力不足、健忘易倦、頭暈耳鳴、腰痛膝軟、性欲減退、畏寒肢冷。為更好地控制該制劑質量，結合相關研究[1-15]，在原有質量標準中，采用高效液相色譜(HPLC)法對清宮長春膠囊中芍藥苷進行定量分析，從而為該產品的質量控制提供客觀的定量評價方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10A 型高效液相色譜儀，包括島津LC-10AT 泵、SPD-M10A 型二級管陣列檢測器、CLASS-LC10 色譜工作站(日本);AL104 型萬分之一分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);AE240 型十萬分之一分析天平(瑞士Mettler 公司);KQ-700DE 型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。清宮長春膠囊(頸復康藥業集團有限公司);芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定研究院，供含量測定用，批號為110736 -200526);乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-0.1% 磷酸溶液(25 ∶75);流速:1.0 mL /min;檢測波長:230 nm;進樣量:10 μL;柱溫:35 ℃。理論板數按芍藥苷峰計算應不低于4 000，在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

精密稱取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每1 mL 含80 μg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取裝量差異項下的本品內容物20 粒，研細，取2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理45 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取按制劑處方比例及工藝制備不含白芍藥材的陰性對照品，取陰性對照品，依法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密稱取芍藥苷對照品20.1 mg，置50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，備用。精密吸取上述對照品溶液(0.402 g/L)0.2，0.5，0.8，1.0，1.5，2.0，3.0 mL，分別置5 mL 容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得芍藥苷質量濃度為16.08，40.2，64.32，80.4，120.6，160.8，241.2 μg/mL 的溶液。精密吸取上述溶液10 μL 注入液相色譜儀，按色譜條件測定芍藥苷的峰面積，以峰面積Y 對進樣質量濃度(X，μg/mL)進行線性回歸，回歸方程為Y =10 783 X +25 933( r =0.999 5)。結果表明，芍藥苷質量濃度在16.08 ～241.2 μg /mL 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次，記錄色譜峰面積。結果的RSD=0.9%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h時各進樣1 次，每次10 μL，記錄色譜峰面積。結果的RSD=1.02% ( n=6)，表明供試品溶液在24 h 內穩定。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為291260)，取樣9 份，分為3 組，每組分別為1.6，2.0，2.4 g，分別精密稱定，按2.2 項下供試品溶液制備方法制成供試品溶液，測定芍藥苷峰面積并計算含量。結果平均含量為0.275 mg/粒，RSD 為1.85%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為291260，含量為0.275 mg/粒)，研細，分別稱取9 份，每份1.0 g，分為3組，置具塞錐形瓶中，精密加入不同量的對照品，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進行HPLC 分析，測定芍藥苷的峰面積，計算加樣回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取6 個批號的樣品，依法測定。結果批號為291261，291262，291263，291245，291205，291206 的6 批樣品中芍藥苷的含量分別為0.275，0.274，0.276，0.268，0.259，0.266 mg/粒。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結果( n=9)

3 討論

用紫外分光光度計對芍藥苷對照品溶液在200 ～400 nm 波長范圍內掃描，結果在230 nm 波長處有最大吸收，故選該波長為檢測波長。

先后考察多種提取方法對本品提取效果的影響，試驗證明，超聲處理方法和加熱回流提取方法所得芍藥苷較高，而超聲提取方法所得雜質少，并減少了色譜柱的污染，故最終選擇超聲提取。同時對不同超聲時間(30，45，60 min)的提取效果進行了考察，結果超聲提取時間45 min 時提取效果最好，故選擇超聲提取45 min，參照2010 年版《中國藥典(一部)》方法，分別用甲醇和乙醇提取，根據過濾時的難易程度和所得色譜峰的情況以及回收率測定結果，確認用甲醇提取的效果更好。

用高效液相色譜法測定清宮長春膠囊中白芍主要成分芍藥苷的含量，出峰時間適宜，陰性對照無干擾，樣品峰形和分離效果好。因此，高效液相色譜法方法簡便、快速、準確、重復性好，可用于該制劑的質量控制。

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