硫氧還蛋白TXN對視神經軸突損傷的保護作用

劉曉文 付汛安

硫氧還蛋白TXN對視神經軸突損傷的保護作用

劉曉文 付汛安

硫氧還蛋白；軸突形成；軸突保護；視神經

目的研究硫氧還蛋白(thioredoxin,TXN)在視神經軸突保護中的作用，為視神經損傷提供有效的治療方案。方法制作大鼠視神經夾傷模型，以正常大鼠作為正常對照組。按夾傷后處死時間不同，選取傷后1周、2周、4周三個時間點，提取實驗組和正常對照組中大鼠視網膜的mRNA和蛋白，通過RT-PCR和Western blot實驗方法檢測TXN表達情況；用曲古抑菌素A(TSA)刺激RGC-5細胞，觀察在TSA刺激后，RGC-5細胞的軸突形成情況，并檢測TXN表達量的變化。構建TXN的真核表達質粒，轉染進RGC-5細胞，在TNF-α刺激條件下，觀察RGC-5細胞的軸突形成情況以及軸突長度的改變。結果與正常大鼠比較，視神經夾傷模型大鼠中TXN的mRNA以及蛋白水平明顯下降。在傷后1周，TXN mRNA表達量僅下降了32%,而在傷后2周、4周則分別下降了55%以及70%，說明TXN表達水平的降低是隨著夾傷后時間的延長而增加的。用TSA誘導RGC-5細胞24 h，觀察到RGC-5細胞形態發生明顯改變，約65%的細胞分化產生軸突，而對照組(DMSO處理)中細胞沒有形成軸突，同時Western blot結果顯示，相對于DMSO處理，TSA刺激后TXN的表達明顯升高。在TNF-α刺激下，RGC-5細胞的軸突形成比率從(65±5)%減少至(30±4)%，軸突長度從(100±6)μm下降至(74±6)μm。而在過表達TXN情況下，TNF-α刺激RGC-5細胞，軸突形成比率為(52±7)%，軸突的長度為(92±8)μm，較未刺激細胞僅有較少的降低。結論在軸突發生損傷后，TXN的表達量顯著下降。而在軸突形成過程中，TXN的表達量明顯上升并且過表達TXN能很好地減輕外界刺激誘導的軸突損傷。……