梔翹生肌軟膏毒理學實驗研究

張 靜 黃麗華 耿秀蘭

濟南市衛生科技交流服務中心，山東濟南 250013

隨著人們保健養生意識的增強，對藥品的毒副作用關注度提高，為使患者放心用藥，就要有真實的科學依據。梔翹生肌軟膏是以梔子[1]、連翹、大黃[2]、蜂蠟等制成的治療燒、燙傷及痔瘡的外用軟膏制劑，為確保臨床用藥安全，我們對其進行了多項毒理實驗，研究起止時間1991—2013年，現將實驗結果報道如下。

1 實驗材料

1.1 材料來源

梔翹生肌軟膏由本中心中試基地提供，2，4—二硝基氯代苯由山東省藥檢所提供。

1.2 動物來源

實驗動物由山東醫科大學動物室提供，家兔為中國本兔（白色，紅眼）年齡130 d左右；豚鼠為非純種短毛三色豚鼠，年齡3個月左右；小鼠為昆明小白鼠，年齡60～70 d。健康狀況良好，購進后常規飼養一周進行實驗。

1.3 分組依據

實驗方法及分組是根據新藥審批辦法皮膚用藥毒理研究的技術要求進行的，[3]動物脫毛用氯化鋇、氧化鋅法。

1.4 統計學分析

實驗數據用SPSS 13.0統計軟件對數據進行分析，方法用均數顯著性檢驗（t檢驗）[4]，結果用P值表示，P﹥0.05為無顯著性差異；P﹤0.05為顯著性差異；P﹤0.01為非常顯著性差異。

2 實驗方法

2.1 皮膚急性毒性試驗方法

家兔8只，雌雄各半，體重1.5～2.5 kg。實驗分完整皮膚與破損皮膚組，每組4只兔。8只家兔背部脫毛﹙150 cm2﹚，其中4只脫毛區用刀片致損，24 h后將梔翹生肌軟膏均勻涂于脫毛區，每3 h涂一次﹙即每只兔涂藥20 g左右，相當于人體用藥有效劑量的20倍以上﹚，24 h后去掉殘留受試物，連續14 d觀察家兔的中毒表現。

2.2 皮膚長期毒性試驗方法

家兔 12只，雌雄各半，體重 1.5～2.5 kg，實驗分對照組﹙NS﹚和實驗組﹙梔翹生肌軟膏﹚每組6只兔。家兔背部脫毛﹙150 cm2﹚，24 h后按分組涂藥，4次/d，5 g/次﹙為有效劑量的20倍以上﹚，連續用藥45 d，最后一次給藥24 h后取心血做血液學檢驗，生化檢驗。另每組隨機取2只兔進行系統尸解，取心、肝、脾、腎、皮膚﹙用藥部位﹚進行病理學檢查。余者繼續觀察3周，再行檢查。

2.3 皮膚刺激試驗方法

豚鼠5只，雄性3只，雌性2只，體重250～350 g，實驗分對照組﹙不涂藥﹚，完整皮膚和破損皮膚組﹙梔翹生肌軟膏﹚。豚鼠背部脫毛三個區﹙20 cm2﹚定為 1、2、3 區，將第 3 區用刀片致損，24 h后按分組將藥物均勻的涂于脫毛區，2次/d，1 g/次，連續用藥7 d，最后一次給藥24 h后用溫水清洗殘留物，1、24、48、72 h觀察涂藥部位有無紅斑和水腫。

2.4 皮膚過敏試驗方法

豚鼠 18只，雌雄各半，體重250～350g，實驗分空白對照組﹙基質﹚，陽性對照組﹙2,4—二硝基氯代苯，致敏濃度為1℅，激發濃度為0.1%﹚和實驗組﹙梔翹生肌軟膏﹚。每組6只豚鼠，豚鼠背部兩側脫毛，24 h后按分組將藥物0.2 g涂在豚鼠左側脫毛區致敏，3 h后重復涂藥一次，以保證藥物接觸6 h，第7天和第14天重復涂藥致敏，于末次給藥14 d再按分組將藥物涂于豚鼠右側脫毛區激發，6 h后去掉受試物，觀察紅斑和水腫情況，連續觀察3 d，按皮膚過敏反應標準進行評分。

2.5 小鼠骨髓嗜多染紅細胞﹙PCE﹚微核試驗方法

小鼠24只，雌雄各半，體重25～30 g，實驗分陰性對照組﹙NS﹚，陽性對照組﹙環磷酰胺[CP]，22 mg/kg，一次給藥﹚和實驗組﹙基質組、梔翹生肌軟膏組，均為4次/d連續5 d給藥﹚每組6只小鼠，方法參照文獻[5]。實驗鼠全部背部脫毛,24 h后按分組給藥，最末一次給藥24 h后頸椎脫臼處死，取雙后股骨，小牛血清沖洗骨髓制成細胞懸液，推片，甲醇固定，Giemsa染色，計數1000個PCE的微核細胞數，計算微核細胞率，并計算PCE/RBC比值。

3 實驗結果

3.1 皮膚急性毒性試驗結果

兩組家兔均食欲正常，精神狀況良好，毛發光滑，用藥局部未見紅、腫及其它不良反應。表明家兔皮膚短期內接觸梔翹生肌軟膏未產生毒性反應。

3.2 皮膚長期毒性試驗結果

①一般觀察。試驗期間兩組家兔精神、體征良好，食欲活動正常，無死亡，亦未見任何不良反應。

②血液學檢查、生化檢驗均未見異常。

③系統尸解及各臟器病理組織學未見異常。

④恢復性觀察未見延遲性毒性反應，參照人及家兔的檢測指標正常值[6]，以上試組結果均在正常范圍內，兩組比較均無顯著意義﹙P﹥0.05﹚，表明家兔長期用梔翹生肌軟膏不產生毒性反應。

3.3 皮膚刺激試驗結果

根據皮膚刺激強度評價標準，刺激反應分值﹤0.5即為無刺激性，實驗結果顯示各組分值均﹤0.5，表明梔翹生肌軟膏對豚鼠完整與破損皮膚均無刺激性。

3.4 皮膚過敏試驗結果

實驗結果顯示陽性對照組紅斑和水腫都非常明顯﹙紅斑3.83分，水腫2.33分﹚，而空白和實驗組則皮膚光滑、無紅斑、無水腫﹙均為0分﹚，不顯示任何過敏反應。

3.5 小鼠骨髓嗜多染紅細胞﹙PCE﹚微核試驗結果

實驗結果顯示陰性對照組微核率為(2.33±1.03)‰與日前文獻報導5‰以下相符，陽性對照CP誘導小鼠骨髓PCE微核率為（22.16±2.92）‰與陰性對照組比較有顯著意義﹙P﹤0.01﹚，而實驗組盡管用藥劑量為人體有效劑量的100倍以上與陰性對照組比較仍無顯著意義﹙P﹥0.05﹚。表明梔翹生肌軟膏對小鼠無誘變作用。且各組PCE∕RBC比值均大于0.1，說明骨髓增生不受抑制。

4 討論

中藥的有毒、無毒是中藥藥性理論的重要組成部分。但長期以來，古今醫家對同一味中藥毒性大小載述不一，給臨床用藥帶來混亂，究其原因，顯然是中藥毒性確定無客觀標準，也反應中藥毒性的確定因素是復雜的。如配伍是否合理、劑量是否適當、炮制是否得法、劑型是否適宜，這些均能影響藥物的毒性。另外中藥的產地、用藥部位、采收時間、儲存條件等對中藥的毒性也有一定影響。為確保臨床用藥安全，我們對梔翹生肌軟膏進行了急毒、長毒、刺激、過敏和誘變實驗研究，實驗結果顯示梔翹生肌軟膏對實驗動物皮膚無刺激、不致敏、無吸收中毒，亦無潛在的誘變作用，表明臨床應用安全可靠，為臨床用藥提供了科學依據。

[1]賈玉杰.梔子對大鼠出血壞死性胰腺炎早期內臟血流的影響[J].中國中藥雜志，1993，18（7）：431.

[2]劉興祥.大黃的藥理作用及臨床應用[J].中國中西醫結合雜志，1992，2（9）：571.

[3]中華人民共和國衛生部新藥審批辦法[S].1992：35.

[4]施新猷.醫學動物實驗方法[M].北京：人民衛生出版社，1983：357.

[5]黃幸紓.環境化學物致突變致畸致癌試驗方法[M].浙江：浙江科技出版社，1985：220.

[6]施新猷.醫學動物實驗方法[M].北京：人民衛生出版社，1983：442.