丹參酚酸抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究

林民貴　肖彥燊

【摘要】 目的 探討丹參酚酸抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA） 致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)情況。方法 成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結(jié)果 丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（抗CCP抗體）、骨保護(hù)素（OPG）、核因子κβ受體活化因子配體（RNAKL）均優(yōu)于生理鹽水組， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 丹參酚酸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的效果明顯， 值得進(jìn)一步探討和應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 丹參酚酸；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；骨質(zhì)疏松

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）在疾病發(fā)展和治療過(guò)程中會(huì)并發(fā)骨質(zhì)疏松， 骨關(guān)節(jié)的破壞和骨質(zhì)疏松是其致殘的主要原因。新的研究表明[1]， 骨礦密度減少在RA病程早期就已經(jīng)出現(xiàn)， 抗骨質(zhì)疏松的治療在疾病早期即應(yīng)考慮。此外， RA引起骨質(zhì)疏松跟激素療法有關(guān)， 糖皮質(zhì)激素治療RA過(guò)程中會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松。選擇有效的治療方法， 治療RA致骨質(zhì)疏松成為臨床科室研究的重點(diǎn)問(wèn)題[2]。本研究通過(guò)對(duì)丹參酚酸抗RA致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行觀察和分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 首先建立RA的大鼠模型， 1月齡雌性SD大鼠每只于左后足跖皮內(nèi)注射濃度為2.5 mg/ml的Ⅱ型膠原蛋白（collagen Ⅱ， CⅡ） 0.1 ml（將酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐劑配成于CⅡ濃度為2.5 mg/ml乳劑）。1周后以相同劑量于每只大鼠尾部及左后足跖部加強(qiáng)注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組、丹參骨寶高劑量組、丹參骨寶中劑量組、丹參骨寶低劑量組， 每組10支。灌胃1次/d， 連續(xù)給藥12周。給藥12周后處死取材。

1. 2 方法

1. 2. 1 制備丹參總酚酸 稱取干燥至恒質(zhì)量的丹參飲片適量， 以80% 的乙醇溶液為溶劑， 按體積比1：5加入， 置錐形瓶中， 混勻， 放入超聲清洗器中超聲提取30 min， 冷卻至室溫， 過(guò)濾取濾液， 濾渣再進(jìn)行二次超聲振蕩提取， 合并濾液， 密閉冷藏保存， 備用。采用Folin-Ciocalteu 法測(cè)定總酚酸含量。

1. 2. 2 通過(guò)ELISA法對(duì)三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體和OPG、RNAKL進(jìn)行測(cè)定。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察研究對(duì)象三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（抗CCP抗體）、骨保護(hù)素（OPG）、核因子κB受體激活配體（RNAKL）指標(biāo)變化情況：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率判定標(biāo)準(zhǔn)是≥20 RU/ml。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究對(duì)象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL情況， 見表1。丹參骨寶高、中、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性素、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）及RA性骨質(zhì)疏松是一種老年性、疑難性重癥疾病， 對(duì)人類和社會(huì)危害極大[3]。RA患者的骨丟失有三種類型：關(guān)節(jié)軟骨下骨和關(guān)節(jié)邊緣骨丟失、受累關(guān)節(jié)周圍骨丟失、軀干和四肢骨骼廣泛骨丟失。研究證實(shí)[4]， 在各關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞的環(huán)境中， 破骨細(xì)胞是骨侵蝕和骨質(zhì)疏松的主要因素。此外， 炎癥因子作用下的成骨細(xì)胞加速凋亡和成骨細(xì)胞的功能下降， 使RA中的成骨細(xì)胞數(shù)量不足， 功能不佳；在加上過(guò)度活化的破骨細(xì)胞系統(tǒng)， 這就使得骨重建的平衡大大偏向骨丟失的一端。而治療RA過(guò)程中， 大量使用糖皮質(zhì)激素藥物， 會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松， 因此糖皮質(zhì)激素治療RA受到一定的限制。目前國(guó)內(nèi)約有400萬(wàn)RA患者， 如能尋找到一種低毒有效的藥物將大有市場(chǎng)[5]。因此， 將丹參酚酸開發(fā)成防治RA性骨質(zhì)疏松的新藥， 將造福于廣大RA患者， 具有良好的市場(chǎng)前景和具有廣闊的發(fā)展前景。丹參是著名抗衰老中藥， 為唇形科植物丹參（salvia miltiorrhiza bge） 的干燥根， 是著名的傳統(tǒng)中藥， 具有抗氧化、改善微循環(huán)防止血栓形成等多種功能[6]。丹參可促進(jìn)骨愈合， 預(yù)防股骨頭壞死， 有效降低絕經(jīng)期婦女骨質(zhì)疏松血中骨吸收生物指標(biāo)， 還具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用[7]。近代已從中分離得多種化學(xué)成分， 包括脂溶性成分和水溶性成分， 水溶性成分有原兒茶醛、丹參素（丹參酸甲）、丹參酸乙等。丹參富含丹參素， 丹參酚酸等具有抗脂質(zhì)氧化、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)作用， 也具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用的活性成分[8]。但丹參酚酸是否對(duì)RA性骨質(zhì)疏松有預(yù)防作用未見有相關(guān)報(bào)道， 本研究通過(guò)成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結(jié)果：丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組， 提示丹參酚酸可以有效的改善風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎并骨質(zhì)疏松的各項(xiàng)因子陽(yáng)性率和因子水平。

綜上所述， 丹參酚酸開發(fā)成治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的相關(guān)藥品或食品具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 周晟芳，李艷，劉梅潔.無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠脛骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的影響.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志， 2012，18（11）：1211-1212.

[2] 陳健，黃禮群，胡裕君，等.低頻脈沖電磁場(chǎng)對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松大鼠腰椎骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響.中國(guó)修復(fù)重建外科雜志， 2011， 25（12）：1455-1458.

[3] 陳海嘯，梁軍波，伍海昭.骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)去卵巢大鼠腰椎松質(zhì)骨骨形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)的影響.中醫(yī)正骨， 2011，23（4）：18-20.

[4] 劉易軍，孟廣偉，宮赫，等.人工加載對(duì)懸吊大鼠骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào)， 2008， 27（6）： 838-841.

[5] 史曉林，吳連國(guó)，徐建春.強(qiáng)骨飲對(duì)去卵巢大鼠腰椎骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響.中國(guó)骨傷， 2008，21（4）：287-288.

[6] 薛冬英，陳一奕，葉軍.丹參酚酸B山楂黃酮聯(lián)用對(duì)大鼠非酒精性脂肪性肝病相關(guān)因素的干預(yù)作用.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志， 2012，20（6）：245-248.

[7] 羅朵生，何偉，郭姣，等.大孔吸附樹脂純化丹參酚酸的研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2010，16（6）：14-16.

[8] 黃繼漢，王鯤，許羚，等.丹參酚酸B在健康人群個(gè)體內(nèi)暴露程度的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn).中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)， 2011， 16（5）：510-517.

[收稿日期：2014-04-14]endprint

【摘要】 目的 探討丹參酚酸抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA） 致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)情況。方法 成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結(jié)果 丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（抗CCP抗體）、骨保護(hù)素（OPG）、核因子κβ受體活化因子配體（RNAKL）均優(yōu)于生理鹽水組， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 丹參酚酸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的效果明顯， 值得進(jìn)一步探討和應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 丹參酚酸；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；骨質(zhì)疏松

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）在疾病發(fā)展和治療過(guò)程中會(huì)并發(fā)骨質(zhì)疏松， 骨關(guān)節(jié)的破壞和骨質(zhì)疏松是其致殘的主要原因。新的研究表明[1]， 骨礦密度減少在RA病程早期就已經(jīng)出現(xiàn)， 抗骨質(zhì)疏松的治療在疾病早期即應(yīng)考慮。此外， RA引起骨質(zhì)疏松跟激素療法有關(guān)， 糖皮質(zhì)激素治療RA過(guò)程中會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松。選擇有效的治療方法， 治療RA致骨質(zhì)疏松成為臨床科室研究的重點(diǎn)問(wèn)題[2]。本研究通過(guò)對(duì)丹參酚酸抗RA致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行觀察和分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 首先建立RA的大鼠模型， 1月齡雌性SD大鼠每只于左后足跖皮內(nèi)注射濃度為2.5 mg/ml的Ⅱ型膠原蛋白（collagen Ⅱ， CⅡ） 0.1 ml（將酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐劑配成于CⅡ濃度為2.5 mg/ml乳劑）。1周后以相同劑量于每只大鼠尾部及左后足跖部加強(qiáng)注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組、丹參骨寶高劑量組、丹參骨寶中劑量組、丹參骨寶低劑量組， 每組10支。灌胃1次/d， 連續(xù)給藥12周。給藥12周后處死取材。

1. 2 方法

1. 2. 1 制備丹參總酚酸 稱取干燥至恒質(zhì)量的丹參飲片適量， 以80% 的乙醇溶液為溶劑， 按體積比1：5加入， 置錐形瓶中， 混勻， 放入超聲清洗器中超聲提取30 min， 冷卻至室溫， 過(guò)濾取濾液， 濾渣再進(jìn)行二次超聲振蕩提取， 合并濾液， 密閉冷藏保存， 備用。采用Folin-Ciocalteu 法測(cè)定總酚酸含量。

1. 2. 2 通過(guò)ELISA法對(duì)三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體和OPG、RNAKL進(jìn)行測(cè)定。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察研究對(duì)象三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（抗CCP抗體）、骨保護(hù)素（OPG）、核因子κB受體激活配體（RNAKL）指標(biāo)變化情況：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率判定標(biāo)準(zhǔn)是≥20 RU/ml。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究對(duì)象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL情況， 見表1。丹參骨寶高、中、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性素、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）及RA性骨質(zhì)疏松是一種老年性、疑難性重癥疾病， 對(duì)人類和社會(huì)危害極大[3]。RA患者的骨丟失有三種類型：關(guān)節(jié)軟骨下骨和關(guān)節(jié)邊緣骨丟失、受累關(guān)節(jié)周圍骨丟失、軀干和四肢骨骼廣泛骨丟失。研究證實(shí)[4]， 在各關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞的環(huán)境中， 破骨細(xì)胞是骨侵蝕和骨質(zhì)疏松的主要因素。此外， 炎癥因子作用下的成骨細(xì)胞加速凋亡和成骨細(xì)胞的功能下降， 使RA中的成骨細(xì)胞數(shù)量不足， 功能不佳；在加上過(guò)度活化的破骨細(xì)胞系統(tǒng)， 這就使得骨重建的平衡大大偏向骨丟失的一端。而治療RA過(guò)程中， 大量使用糖皮質(zhì)激素藥物， 會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松， 因此糖皮質(zhì)激素治療RA受到一定的限制。目前國(guó)內(nèi)約有400萬(wàn)RA患者， 如能尋找到一種低毒有效的藥物將大有市場(chǎng)[5]。因此， 將丹參酚酸開發(fā)成防治RA性骨質(zhì)疏松的新藥， 將造福于廣大RA患者， 具有良好的市場(chǎng)前景和具有廣闊的發(fā)展前景。丹參是著名抗衰老中藥， 為唇形科植物丹參（salvia miltiorrhiza bge） 的干燥根， 是著名的傳統(tǒng)中藥， 具有抗氧化、改善微循環(huán)防止血栓形成等多種功能[6]。丹參可促進(jìn)骨愈合， 預(yù)防股骨頭壞死， 有效降低絕經(jīng)期婦女骨質(zhì)疏松血中骨吸收生物指標(biāo)， 還具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用[7]。近代已從中分離得多種化學(xué)成分， 包括脂溶性成分和水溶性成分， 水溶性成分有原兒茶醛、丹參素（丹參酸甲）、丹參酸乙等。丹參富含丹參素， 丹參酚酸等具有抗脂質(zhì)氧化、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)作用， 也具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用的活性成分[8]。但丹參酚酸是否對(duì)RA性骨質(zhì)疏松有預(yù)防作用未見有相關(guān)報(bào)道， 本研究通過(guò)成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結(jié)果：丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組， 提示丹參酚酸可以有效的改善風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎并骨質(zhì)疏松的各項(xiàng)因子陽(yáng)性率和因子水平。

綜上所述， 丹參酚酸開發(fā)成治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的相關(guān)藥品或食品具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 周晟芳，李艷，劉梅潔.無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠脛骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的影響.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志， 2012，18（11）：1211-1212.

[2] 陳健，黃禮群，胡裕君，等.低頻脈沖電磁場(chǎng)對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松大鼠腰椎骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響.中國(guó)修復(fù)重建外科雜志， 2011， 25（12）：1455-1458.

[3] 陳海嘯，梁軍波，伍海昭.骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)去卵巢大鼠腰椎松質(zhì)骨骨形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)的影響.中醫(yī)正骨， 2011，23（4）：18-20.

[4] 劉易軍，孟廣偉，宮赫，等.人工加載對(duì)懸吊大鼠骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào)， 2008， 27（6）： 838-841.

[5] 史曉林，吳連國(guó)，徐建春.強(qiáng)骨飲對(duì)去卵巢大鼠腰椎骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響.中國(guó)骨傷， 2008，21（4）：287-288.

[6] 薛冬英，陳一奕，葉軍.丹參酚酸B山楂黃酮聯(lián)用對(duì)大鼠非酒精性脂肪性肝病相關(guān)因素的干預(yù)作用.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志， 2012，20（6）：245-248.

[7] 羅朵生，何偉，郭姣，等.大孔吸附樹脂純化丹參酚酸的研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2010，16（6）：14-16.

[8] 黃繼漢，王鯤，許羚，等.丹參酚酸B在健康人群個(gè)體內(nèi)暴露程度的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn).中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)， 2011， 16（5）：510-517.

[收稿日期：2014-04-14]endprint

【摘要】 目的 探討丹參酚酸抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA） 致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)情況。方法 成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結(jié)果 丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（抗CCP抗體）、骨保護(hù)素（OPG）、核因子κβ受體活化因子配體（RNAKL）均優(yōu)于生理鹽水組， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 丹參酚酸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的效果明顯， 值得進(jìn)一步探討和應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 丹參酚酸；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；骨質(zhì)疏松

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）在疾病發(fā)展和治療過(guò)程中會(huì)并發(fā)骨質(zhì)疏松， 骨關(guān)節(jié)的破壞和骨質(zhì)疏松是其致殘的主要原因。新的研究表明[1]， 骨礦密度減少在RA病程早期就已經(jīng)出現(xiàn)， 抗骨質(zhì)疏松的治療在疾病早期即應(yīng)考慮。此外， RA引起骨質(zhì)疏松跟激素療法有關(guān)， 糖皮質(zhì)激素治療RA過(guò)程中會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松。選擇有效的治療方法， 治療RA致骨質(zhì)疏松成為臨床科室研究的重點(diǎn)問(wèn)題[2]。本研究通過(guò)對(duì)丹參酚酸抗RA致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行觀察和分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 首先建立RA的大鼠模型， 1月齡雌性SD大鼠每只于左后足跖皮內(nèi)注射濃度為2.5 mg/ml的Ⅱ型膠原蛋白（collagen Ⅱ， CⅡ） 0.1 ml（將酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐劑配成于CⅡ濃度為2.5 mg/ml乳劑）。1周后以相同劑量于每只大鼠尾部及左后足跖部加強(qiáng)注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組、丹參骨寶高劑量組、丹參骨寶中劑量組、丹參骨寶低劑量組， 每組10支。灌胃1次/d， 連續(xù)給藥12周。給藥12周后處死取材。

1. 2 方法

1. 2. 1 制備丹參總酚酸 稱取干燥至恒質(zhì)量的丹參飲片適量， 以80% 的乙醇溶液為溶劑， 按體積比1：5加入， 置錐形瓶中， 混勻， 放入超聲清洗器中超聲提取30 min， 冷卻至室溫， 過(guò)濾取濾液， 濾渣再進(jìn)行二次超聲振蕩提取， 合并濾液， 密閉冷藏保存， 備用。采用Folin-Ciocalteu 法測(cè)定總酚酸含量。

1. 2. 2 通過(guò)ELISA法對(duì)三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體和OPG、RNAKL進(jìn)行測(cè)定。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察研究對(duì)象三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（抗CCP抗體）、骨保護(hù)素（OPG）、核因子κB受體激活配體（RNAKL）指標(biāo)變化情況：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率判定標(biāo)準(zhǔn)是≥20 RU/ml。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究對(duì)象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL情況， 見表1。丹參骨寶高、中、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性素、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）及RA性骨質(zhì)疏松是一種老年性、疑難性重癥疾病， 對(duì)人類和社會(huì)危害極大[3]。RA患者的骨丟失有三種類型：關(guān)節(jié)軟骨下骨和關(guān)節(jié)邊緣骨丟失、受累關(guān)節(jié)周圍骨丟失、軀干和四肢骨骼廣泛骨丟失。研究證實(shí)[4]， 在各關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞的環(huán)境中， 破骨細(xì)胞是骨侵蝕和骨質(zhì)疏松的主要因素。此外， 炎癥因子作用下的成骨細(xì)胞加速凋亡和成骨細(xì)胞的功能下降， 使RA中的成骨細(xì)胞數(shù)量不足， 功能不佳；在加上過(guò)度活化的破骨細(xì)胞系統(tǒng)， 這就使得骨重建的平衡大大偏向骨丟失的一端。而治療RA過(guò)程中， 大量使用糖皮質(zhì)激素藥物， 會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松， 因此糖皮質(zhì)激素治療RA受到一定的限制。目前國(guó)內(nèi)約有400萬(wàn)RA患者， 如能尋找到一種低毒有效的藥物將大有市場(chǎng)[5]。因此， 將丹參酚酸開發(fā)成防治RA性骨質(zhì)疏松的新藥， 將造福于廣大RA患者， 具有良好的市場(chǎng)前景和具有廣闊的發(fā)展前景。丹參是著名抗衰老中藥， 為唇形科植物丹參（salvia miltiorrhiza bge） 的干燥根， 是著名的傳統(tǒng)中藥， 具有抗氧化、改善微循環(huán)防止血栓形成等多種功能[6]。丹參可促進(jìn)骨愈合， 預(yù)防股骨頭壞死， 有效降低絕經(jīng)期婦女骨質(zhì)疏松血中骨吸收生物指標(biāo)， 還具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用[7]。近代已從中分離得多種化學(xué)成分， 包括脂溶性成分和水溶性成分， 水溶性成分有原兒茶醛、丹參素（丹參酸甲）、丹參酸乙等。丹參富含丹參素， 丹參酚酸等具有抗脂質(zhì)氧化、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)作用， 也具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用的活性成分[8]。但丹參酚酸是否對(duì)RA性骨質(zhì)疏松有預(yù)防作用未見有相關(guān)報(bào)道， 本研究通過(guò)成功建立RA模型的大鼠篩選出40只， 隨機(jī)分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結(jié)果：丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽(yáng)性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組， 提示丹參酚酸可以有效的改善風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎并骨質(zhì)疏松的各項(xiàng)因子陽(yáng)性率和因子水平。

綜上所述， 丹參酚酸開發(fā)成治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的相關(guān)藥品或食品具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

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[收稿日期：2014-04-14]endprint