冠心病合并2型糖尿病患者的小凹蛋白_1表達的變化及其意義

王琳等

[摘要]目的探討小凹蛋白_1（Cav_1）在冠心病（CAD）合并2型糖尿病（T2DM）患者中的表達及其意義。方法選擇148例經冠狀動脈造影及臨床證實的CAD患者，其中合并T2DM患者94例，單純CAD54例，另選取無冠狀動脈病變及糖尿病16例為對照組。用流式細胞技術檢測各組外周血單核細胞Cav_1的表達水平，全自動生化分析儀測定高敏C反應蛋白（hs_CRP）及空腹血糖（FBG）。結果CAD合并T2DM患者外周血單核細胞Cav_1表達水平顯著低于對照組及單純CAD組，差異有統計學意義（P<0.01，<0.05）；CAD合并T2DM組血清hs_CRP的水平顯著高于單純CAD組及對照組，差異有統計學意義（P<0.01）。單核細胞Cav_1的表達水平與hs_CRP及空腹血糖呈負相關（r=-0.47、-0.31，均P<0.01）。多元Logistic回歸分析顯示CAD合并T2DM與Cav_1及FBG密切相關（OR=0.97、3.44，均P<0.05）。結論Cav_1表達低下是發生CAD合并T2DM的一個危險因素，并在一定程度上可預測CAD合并T2DM的發生。

[關鍵詞]小凹蛋白_1；高敏C反應蛋白；冠心病；2型糖尿病；血糖

中圖分類號：R541.4文獻標識碼：A文章編號：1009_816X（2014）04_0290_03

[Abstract] Objective To investigate the expression of Caveolin_1（Cav_1）in coronary artery disease （CAD） complicated with type 2 diabetes mellitus （T2DM）. Methods Cav_1 level was measured in peripheral blood mononuclear cells using flow cytometry among 94 CAD complicated with T2DM patients and 54 CAD patients， which CAD was diagnosed by coronary angiography and clinical manifestation， while 16 patients without CAD and T2DM were enrolled as normal control group. High_sensitivity C reactive protein （hs_CRP） and fasting blood glucose （FBG） level were detected by automatic biochemistry analyzer. Results Compared with normal control and CAD group， the expression of Cav_1 in CAD complicated with T2DM patients was significantly lower（P<0.01，<0.05） and the level of hs_CRP in CAD complicated with T2DM group was extremely higher （P<0.01）. Furthermore， the expression of Cav_1 was negative correlated with hs_CRP and FBG （r=-0.47、-0.31，P<0.01）. The multiple logistic regression indicated that CAD complicated with T2DM and Cav_1、FBG were closely related（OR=0.97、3.44，P<0.05）. Conclusions The lower level of expression of Cav_1 on peripheral blood mononuclear cells is one risk factor for CAD complicated with T2DM， to some extent， may be a possible predicting index for CAD with T2DM.

[Key words] Caveolin_1； High_sensitivity Creactive protein； Coronary artery disease； Type 2 diabetes mellitus； Blood glucose

糖尿病（DM）是一種以血糖代謝紊亂為特點的常見慢性疾病，不僅增加冠心病（CAD）及中風（Stroke）的風險[1]，而且增加急性心肌梗死（AMI）及中風的死亡率。小凹蛋白_1（Caveolin_1，Cav_1）是表達于細胞膜小凹（Caveolae）的重要蛋白，維持著小凹的完整性。Cav_1的異常表達與許多疾病密切相關，包括動脈硬化、腫瘤、肌營養不良、早老性癡呆及糖尿病等。Toshio[2]提出高糖環境下人白血病單核細胞株（THP_1）來源的巨噬細胞Cav_1表達水平下調，小凹數量減少，促進巨噬細胞凋亡及泡沫細胞形成，與動脈粥樣硬化形成有關。位于人類動脈斑塊中的巨噬細胞來自血液單核細胞，本研究觀察冠心病合并2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus，T2DM）患者外周血單核細胞Cav_1表達、血清高敏C反應蛋白及血糖的變化，并探討其臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料：所有受試者均為臺州醫院心內科2009年3月至9月的連續住院患者。分為CAD合并T2DM組、單純CAD組和不典型胸痛組。入選標準：根據1999年WHO糖尿病診斷分型標準將CAD患者分為冠心病合并T2DM組（54例）和單純CAD組（94例），分別經冠脈造影證實左前降支（LAD）、回旋支（LCX）、右冠狀動脈（RCA）中至少有1支血管內徑狹窄≥50%。對照組（16例）：為不典型胸痛患者，經血生化檢查、X線胸片、心電圖、超聲心動圖及冠狀動脈造影檢查排除心臟疾患。排除標準：近1月內服用β受體阻滯藥、調脂藥或利尿藥，肝纖維化、感染或腫瘤、近期重大外傷或手術、腦血管和周圍血管病、自身免疫性疾病、嚴重肝腎疾病、嚴重的全身其他系統疾病、近期服用抗炎藥、心肌炎等。

1.2方法：入院第二天清晨空腹抽取患者肘靜脈血約5ml入EDTA抗凝管，取抗凝全血100μl，加入鼠抗人CD14_APC抗體（美國B_D公司）10ul，加入兔抗人Cav_1多克隆抗體（美國cell signaling公司）1ul，混勻避光15min后加入FITC標記的山羊抗兔多克隆抗體1ul，再次混勻避光15min后加入紅細胞裂解液2ml，混勻避光10min，經800轉/min離心6min后棄去上清液，予PBS液2ml重懸沉淀并振蕩混勻，800轉/min離心6min后棄去上清液，將細胞重懸于PBS液500ul中，以流式細胞儀檢測，用cellquest軟件檢測和分析數據，以CD14/SSC設單核細胞門，分析其Cav_1表達的熒光強度。

如上再取肘靜脈血，以日本奧林巴斯全自動生化分析儀測定高敏C反應蛋白（hs_CRP）、空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）等水平。

1.3統計學處理：使用SPSS12.0版統計軟件。計量資料用（x-±s）表示，兩樣本均數比較采用獨立樣本t檢驗，多樣本均數比較采用方差分析，不連續樣本比較采用Kruskal_wallis檢驗，連續計量資料相關性采用Pearson相關性分析，不連續計量資料采用Spearman秩相關分析，影響CAD合并T2DM發生的變量應用Logistic回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1三組患者一般資料比較：三組患者年齡、性別構成、吸煙人數、高血壓分布、血清總膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸水平等因素比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

本研究發現單純CAD組單核細胞Cav_1表達水平顯著低于正常對照組，而CAD合并T2DM組Cav_1表達顯著低于單純CAD組。提示CAD合并T2DM患者冠狀動脈粥樣斑塊不穩定，容易發生心血管事件。有報道發現，與單純CAD患者比較，在血管內超聲下CAD合并T2DM患者的冠脈病變更嚴重，不穩定斑塊更多[7]。

大量數據表明，當2型糖尿病患者具有高水平的炎癥標志物高敏C反應蛋白（high_sensitivity Creactive protein，hs_CRP）時，其冠心病病死率明顯提高。高血糖是各型糖尿病的共同特征，也是糖尿病血管病變的危險因子，實驗發現高糖能抑制單核細胞來源巨噬細胞Cav_1的表達[2]，能促進大鼠外周血白細胞介素_1、TNF_α升高[8]，后兩種炎癥介質均可導致CRP合成增加，與動脈粥樣硬化形成存在聯系。Cav_1在多種炎癥反應發生發展中起重要調控作用。本研究通過檢測血糖、hs_CRP水平及單核細胞Cav_1的表達，發現血糖水平與Cav_1呈負相關，CAD合并T2DM組單核細胞hs_CRP表達顯著高于單純CAD組及對照組，外周血單核細胞Cav_1水平與hs_CRP呈負相關。提示CAD合并T2DM患者慢性炎癥反應的程度比單純CAD患者更為嚴重，而外周血單核細胞Cav_1也可能參與血糖代謝及炎癥過程，促進糖尿病患者動脈粥樣硬化的發展，其作用機制仍需進一步研究。Logistic回歸分析發現Cav_1是CAD合并T2DM的保護性因素（P=0.03），Cav_1低表達與糖尿病患者冠狀動脈粥樣硬化的發生和發展密切相關。

綜上所述，CAD合并T2DM時，Cav_1表達水平明顯降低，而hs_CRP表達水平明顯增高。Cav_1與血糖水平、hs_CRP可能共同參與了CAD合并T2DM患者動脈粥樣硬化的發生、發展過程。由于本研究樣本量較少，需要更大規模和前瞻性的研究加以驗證。

參考文獻

[1]P McCarron， R Greenwood， P Elwood. The incidence and etiology of stroke in the Caerphilly and Speedwell Collaborative Studies II： risk factors for ischemic stroke[J]. Public Health，2001，115（1）：12-20.

[2]Hoya Shi T， Juliet Par， Mipazaki A， et al. High glucose downregulates the number of caveolae in monocytes through oxidative stress from NADPH oxidase： Implications for atherosclerosis[J]. Biochimicaet Biophysica Acta，2007，1772（3）：364-372.

[3]Jiang W， Li S， Mao W， et al. Effect of Huxin Formula on reverse cholesterol transport in ApoE_gene knockout mice[J]. Chin J Integr Med，2012，18（6）：451-6.

[4]Schwencke C， Schmeisser A， Walter C， et al. Decreased caveolin_1 in atheroma： loss of antiproliferative control of vascular smooth muscle cells in atherosclerosis[J]. Cardiovasc Res，2005，68（1）：128-135.

[5] Rodriguez_Feo JA， Hellings WE， Moll FL， et al. Caveolin_1 influences vascular protease activity and is a potential stabilizing factor in human atherosclerotic disease[J]. PLoS One，2008，3（7）：e2612.

[6]王琳，江建軍，徐莎莎，等.急性冠脈綜合征患者的小凹蛋白_1及白三烯B4表達[J].心腦血管病防治，2010，10（1）：12-14.

[7]Takayama T， Hiro T， Ueda Y， et al. Plaque stabilization by intensive LDL_cholesterol lowering therapy with atorvastatin is delayed in type 2 diabetic patients with coronary artery disease_Serial angioscopic and intravascular ultrasound analysis[J]. J Cardiol，2013，61（6）：381-386.

[8]Tanaka Y， Mochizuki K， Fukaya N， et al. The alpha_glucosidase inhibitor miglitol suppresses postprandial hyperglycaemia and interleukin_1beta and tumour necrosis factor_alpha gene expression in rat peripheral leucocytes induced by intermittent sucrose loading[J]. Br J Nutr，2009，102（2）：221-225.

（收稿日期：2013_12_26）

1.2方法：入院第二天清晨空腹抽取患者肘靜脈血約5ml入EDTA抗凝管，取抗凝全血100μl，加入鼠抗人CD14_APC抗體（美國B_D公司）10ul，加入兔抗人Cav_1多克隆抗體（美國cell signaling公司）1ul，混勻避光15min后加入FITC標記的山羊抗兔多克隆抗體1ul，再次混勻避光15min后加入紅細胞裂解液2ml，混勻避光10min，經800轉/min離心6min后棄去上清液，予PBS液2ml重懸沉淀并振蕩混勻，800轉/min離心6min后棄去上清液，將細胞重懸于PBS液500ul中，以流式細胞儀檢測，用cellquest軟件檢測和分析數據，以CD14/SSC設單核細胞門，分析其Cav_1表達的熒光強度。

如上再取肘靜脈血，以日本奧林巴斯全自動生化分析儀測定高敏C反應蛋白（hs_CRP）、空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）等水平。

1.3統計學處理：使用SPSS12.0版統計軟件。計量資料用（x-±s）表示，兩樣本均數比較采用獨立樣本t檢驗，多樣本均數比較采用方差分析，不連續樣本比較采用Kruskal_wallis檢驗，連續計量資料相關性采用Pearson相關性分析，不連續計量資料采用Spearman秩相關分析，影響CAD合并T2DM發生的變量應用Logistic回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1三組患者一般資料比較：三組患者年齡、性別構成、吸煙人數、高血壓分布、血清總膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸水平等因素比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

本研究發現單純CAD組單核細胞Cav_1表達水平顯著低于正常對照組，而CAD合并T2DM組Cav_1表達顯著低于單純CAD組。提示CAD合并T2DM患者冠狀動脈粥樣斑塊不穩定，容易發生心血管事件。有報道發現，與單純CAD患者比較，在血管內超聲下CAD合并T2DM患者的冠脈病變更嚴重，不穩定斑塊更多[7]。

大量數據表明，當2型糖尿病患者具有高水平的炎癥標志物高敏C反應蛋白（high_sensitivity Creactive protein，hs_CRP）時，其冠心病病死率明顯提高。高血糖是各型糖尿病的共同特征，也是糖尿病血管病變的危險因子，實驗發現高糖能抑制單核細胞來源巨噬細胞Cav_1的表達[2]，能促進大鼠外周血白細胞介素_1、TNF_α升高[8]，后兩種炎癥介質均可導致CRP合成增加，與動脈粥樣硬化形成存在聯系。Cav_1在多種炎癥反應發生發展中起重要調控作用。本研究通過檢測血糖、hs_CRP水平及單核細胞Cav_1的表達，發現血糖水平與Cav_1呈負相關，CAD合并T2DM組單核細胞hs_CRP表達顯著高于單純CAD組及對照組，外周血單核細胞Cav_1水平與hs_CRP呈負相關。提示CAD合并T2DM患者慢性炎癥反應的程度比單純CAD患者更為嚴重，而外周血單核細胞Cav_1也可能參與血糖代謝及炎癥過程，促進糖尿病患者動脈粥樣硬化的發展，其作用機制仍需進一步研究。Logistic回歸分析發現Cav_1是CAD合并T2DM的保護性因素（P=0.03），Cav_1低表達與糖尿病患者冠狀動脈粥樣硬化的發生和發展密切相關。

綜上所述，CAD合并T2DM時，Cav_1表達水平明顯降低，而hs_CRP表達水平明顯增高。Cav_1與血糖水平、hs_CRP可能共同參與了CAD合并T2DM患者動脈粥樣硬化的發生、發展過程。由于本研究樣本量較少，需要更大規模和前瞻性的研究加以驗證。

參考文獻

[1]P McCarron， R Greenwood， P Elwood. The incidence and etiology of stroke in the Caerphilly and Speedwell Collaborative Studies II： risk factors for ischemic stroke[J]. Public Health，2001，115（1）：12-20.

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[3]Jiang W， Li S， Mao W， et al. Effect of Huxin Formula on reverse cholesterol transport in ApoE_gene knockout mice[J]. Chin J Integr Med，2012，18（6）：451-6.

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[7]Takayama T， Hiro T， Ueda Y， et al. Plaque stabilization by intensive LDL_cholesterol lowering therapy with atorvastatin is delayed in type 2 diabetic patients with coronary artery disease_Serial angioscopic and intravascular ultrasound analysis[J]. J Cardiol，2013，61（6）：381-386.

[8]Tanaka Y， Mochizuki K， Fukaya N， et al. The alpha_glucosidase inhibitor miglitol suppresses postprandial hyperglycaemia and interleukin_1beta and tumour necrosis factor_alpha gene expression in rat peripheral leucocytes induced by intermittent sucrose loading[J]. Br J Nutr，2009，102（2）：221-225.

（收稿日期：2013_12_26）

1.2方法：入院第二天清晨空腹抽取患者肘靜脈血約5ml入EDTA抗凝管，取抗凝全血100μl，加入鼠抗人CD14_APC抗體（美國B_D公司）10ul，加入兔抗人Cav_1多克隆抗體（美國cell signaling公司）1ul，混勻避光15min后加入FITC標記的山羊抗兔多克隆抗體1ul，再次混勻避光15min后加入紅細胞裂解液2ml，混勻避光10min，經800轉/min離心6min后棄去上清液，予PBS液2ml重懸沉淀并振蕩混勻，800轉/min離心6min后棄去上清液，將細胞重懸于PBS液500ul中，以流式細胞儀檢測，用cellquest軟件檢測和分析數據，以CD14/SSC設單核細胞門，分析其Cav_1表達的熒光強度。

如上再取肘靜脈血，以日本奧林巴斯全自動生化分析儀測定高敏C反應蛋白（hs_CRP）、空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）等水平。

1.3統計學處理：使用SPSS12.0版統計軟件。計量資料用（x-±s）表示，兩樣本均數比較采用獨立樣本t檢驗，多樣本均數比較采用方差分析，不連續樣本比較采用Kruskal_wallis檢驗，連續計量資料相關性采用Pearson相關性分析，不連續計量資料采用Spearman秩相關分析，影響CAD合并T2DM發生的變量應用Logistic回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1三組患者一般資料比較：三組患者年齡、性別構成、吸煙人數、高血壓分布、血清總膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸水平等因素比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

本研究發現單純CAD組單核細胞Cav_1表達水平顯著低于正常對照組，而CAD合并T2DM組Cav_1表達顯著低于單純CAD組。提示CAD合并T2DM患者冠狀動脈粥樣斑塊不穩定，容易發生心血管事件。有報道發現，與單純CAD患者比較，在血管內超聲下CAD合并T2DM患者的冠脈病變更嚴重，不穩定斑塊更多[7]。

大量數據表明，當2型糖尿病患者具有高水平的炎癥標志物高敏C反應蛋白（high_sensitivity Creactive protein，hs_CRP）時，其冠心病病死率明顯提高。高血糖是各型糖尿病的共同特征，也是糖尿病血管病變的危險因子，實驗發現高糖能抑制單核細胞來源巨噬細胞Cav_1的表達[2]，能促進大鼠外周血白細胞介素_1、TNF_α升高[8]，后兩種炎癥介質均可導致CRP合成增加，與動脈粥樣硬化形成存在聯系。Cav_1在多種炎癥反應發生發展中起重要調控作用。本研究通過檢測血糖、hs_CRP水平及單核細胞Cav_1的表達，發現血糖水平與Cav_1呈負相關，CAD合并T2DM組單核細胞hs_CRP表達顯著高于單純CAD組及對照組，外周血單核細胞Cav_1水平與hs_CRP呈負相關。提示CAD合并T2DM患者慢性炎癥反應的程度比單純CAD患者更為嚴重，而外周血單核細胞Cav_1也可能參與血糖代謝及炎癥過程，促進糖尿病患者動脈粥樣硬化的發展，其作用機制仍需進一步研究。Logistic回歸分析發現Cav_1是CAD合并T2DM的保護性因素（P=0.03），Cav_1低表達與糖尿病患者冠狀動脈粥樣硬化的發生和發展密切相關。

綜上所述，CAD合并T2DM時，Cav_1表達水平明顯降低，而hs_CRP表達水平明顯增高。Cav_1與血糖水平、hs_CRP可能共同參與了CAD合并T2DM患者動脈粥樣硬化的發生、發展過程。由于本研究樣本量較少，需要更大規模和前瞻性的研究加以驗證。

參考文獻

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[2]Hoya Shi T， Juliet Par， Mipazaki A， et al. High glucose downregulates the number of caveolae in monocytes through oxidative stress from NADPH oxidase： Implications for atherosclerosis[J]. Biochimicaet Biophysica Acta，2007，1772（3）：364-372.

[3]Jiang W， Li S， Mao W， et al. Effect of Huxin Formula on reverse cholesterol transport in ApoE_gene knockout mice[J]. Chin J Integr Med，2012，18（6）：451-6.

[4]Schwencke C， Schmeisser A， Walter C， et al. Decreased caveolin_1 in atheroma： loss of antiproliferative control of vascular smooth muscle cells in atherosclerosis[J]. Cardiovasc Res，2005，68（1）：128-135.

[5] Rodriguez_Feo JA， Hellings WE， Moll FL， et al. Caveolin_1 influences vascular protease activity and is a potential stabilizing factor in human atherosclerotic disease[J]. PLoS One，2008，3（7）：e2612.

[6]王琳，江建軍，徐莎莎，等.急性冠脈綜合征患者的小凹蛋白_1及白三烯B4表達[J].心腦血管病防治，2010，10（1）：12-14.

[7]Takayama T， Hiro T， Ueda Y， et al. Plaque stabilization by intensive LDL_cholesterol lowering therapy with atorvastatin is delayed in type 2 diabetic patients with coronary artery disease_Serial angioscopic and intravascular ultrasound analysis[J]. J Cardiol，2013，61（6）：381-386.

[8]Tanaka Y， Mochizuki K， Fukaya N， et al. The alpha_glucosidase inhibitor miglitol suppresses postprandial hyperglycaemia and interleukin_1beta and tumour necrosis factor_alpha gene expression in rat peripheral leucocytes induced by intermittent sucrose loading[J]. Br J Nutr，2009，102（2）：221-225.

（收稿日期：2013_12_26）