Hp感染與胃癌中p27基因表達的相關性研究

蘇連明　莊彥華　顏彬

[摘要] 目的 研究幽門螺桿菌（Hp）感染與胃癌組織中p27基因表達的相關性，探討Hp感染引起胃癌發病的可能機制。方法 Hp 感染檢測采用 14碳-尿素酶呼吸試驗（14C-UBT）法，應用免疫組織化學染色快捷法檢測p27蛋白的表達及與胃癌臨床病理指標的關系，比較Hp感染與p27蛋白表達的相關性。 結果 胃癌患者Hp感染率為67.9%；p27蛋白在胃癌組織中的表達率與患者的性別、年齡和腫瘤大小無相關性（P>0.05），而與胃癌組織分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期密切相關；Hp感染與胃癌中p27基因表達呈負相關（r=-0.486，P<0.05）。結論 Hp感染可能通過降低胃黏膜抑癌基因 p27蛋白表達水平引起胃黏膜癌變。

[關鍵詞] Hp感染；胃癌；p27蛋白

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）23-0019-03

[Abstract] Objective To study the relationship between Helicobacter pylori（Hp） infection and expression of p27 gene in gastric carcinoma tissue， to explore the possible mechanism of Hp infection induced gastric cancer. Methods Hp infection was detected by14 carbonandurease breath test（14C-UBT） method，immunohisto Chemical staining was used to detect the expression of p27 protein and quick method， and the relationship with the clinicopathological parameters of gastric cancer， correlation between Hp infection and the expression of p27 protein. Results Astric cancer patients with Hp infection rate was 67.9%； There was no correlation between the expression rate of p27 protein in gastric carcinoma patients and thegender， age and tumor size （P>0.05）， and the degree of differentiation and gastric carcinoma， invasion depth， lymph node metastasis and was closely related to the TNM staging； Is negatively related to p27 gene expression in HPinfection and gastric cancer （r=-0.486， P<0.05）. Conclusion HP infection may be by reducing gastric mucosal expression of tumor suppressor gene p27 protein level sinduced gastric mucosal carcinogenesis.

[Key words] Hp infection； Gastric carcinoma； p27 protein

胃癌約占胃惡性腫瘤95%以上，在每年新增的癌癥病例數中占第4位，其發生過程是一個多步驟、多因素進行性發展的過程[1，2]，在正常情況下胃黏膜上皮細胞的增值和凋亡之間保持動態平衡，這種平衡的維持有賴于癌基因，抑癌基因及一些生長因子的共同調控[3，4]。p27作為細胞周期的負性調控因子，能廣泛抑制多種細胞周期蛋白和激酶的活性，被認為是一種抑癌基因[5]。1994年WHO宣布Hp是人類胃癌的Ⅰ類致癌原[6]，但Hp引起胃癌的機制尚未十分明確，本文研究胃癌組織中Hp感染與抑癌基因p27的表達及相關性，進一步探討Hp感染引起胃癌發病的可能機制。

1 材料與方法

1.1胃癌組織標本

56例胃癌標本來均來自2012年12月～2013年12月牡丹江醫學院紅旗醫院普外科手術切除標本，其中男30例，女26例；年齡32～72 歲，平均 54歲；胃癌組織分化程度：中-高分化腺癌31例，低分化腺癌 25 例，所有患者術前均未接受化療，且有完整的臨床資料。

1.2 試劑

碳14-尿素酶呼吸試驗儀購自北京華恒安邦科技有限公司，鼠抗人p27單克隆抗體、快捷法通用型二抗、氨基聯苯胺（DAB）顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發公司。

1.3 方法

1.3.1 Hp檢測 所有試驗病例行胃鏡檢查時疑為胃癌取病理者，胃鏡術后均行碳14呼氣試驗檢測。

1.3.2 p27蛋白表達檢測 采用免疫組化快捷法，按試劑盒說明書由病理科專人負責逐項進行（福洲邁新生物技術開發有限公司）。

1.3.3 結果判定 免疫組化染色評分，根據以下3個方面判定[7] ①染色密度評分：0，無染色；1，弱染色；2，中染色；3，強染色；②陽性細胞百分比評分：0，0%；1，<10%；2，10%～50%；3，51%～90%；4，>90%；③染色方式評分：0，無染色；1，散在染色；2，局灶染色；3，彌漫染色。每例標本染色積分=①×②×③。陰性為0分，陽性為1～36分。endprint

1.4 統計學處理

實驗數據采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman等級相關分析，以相關系數-1

2 結果

2.1 Hp檢測結果

56例胃癌患者均行14C-UBT檢測，儀器見封三圖1。結果顯示，Hp感染38例，感染率為67.9%。

2.2 p27蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

p27蛋白在胃癌組織中主要以細胞漿和（或）細胞核出現棕黃色染色為主同，見封三圖2。其表達率與患者的性別、年齡和腫瘤大小無相關性（P>0.05），而與胃癌組織分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期密切相關（P<0.05），見表 1。

2.3 Hp感染與p27蛋白表達的相關性研究

統計學分析表明，Hp感染與胃癌組織中p27蛋白表達的相關性研究呈負相關（r=-0.486，P<0.05），見表2。

3 討論

Hp感染是胃癌發生發展的Ⅰ類致病原，Hp具有黏附性，分泌的毒素有致病性，導致胃黏膜病變，Hp還是一種硝酸鹽還原劑，具有催化亞硝化作用而引起致癌作用，發生癌變的順序為：慢性炎癥——萎縮性胃炎——萎縮性胃炎伴腸化——異型增生——癌變[8]，但Hp感染引起胃癌發生并非單一機制所致，與人體內癌基因的激活和突變及抑癌基因的失活有關，與胃癌發生相關的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年發現的新的CKI基因[10] （細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包含兩個有編碼功能的外顯子和一個無功能的外顯子及一個內含子，定位于人體12p13交界處，研究發現[11]，p27蛋白具有多種生物學功能，可直接抑制Cyclin-CDK（細胞周期素-細胞周期蛋白依賴性激酶）復合物的生物學活性從而阻止細胞通過G1/S期轉換的“關卡”[12]，同時還可以作為細胞外刺激信號的潛在媒介來調控細胞周期[13]，p27作為細胞周期的負性調控因子，被認為是一種抑癌基因，具有抑制腫瘤的發生、發展的作用。在對乳腺癌、肺癌、和內分泌腫瘤的研究中發現p27蛋白表達與腫瘤的生長、分化、轉移及預后等密切相關[14]。本實驗結果顯示：Hp陽性表達率呈遞減時，而p27蛋白表達呈升高趨勢，統計學分析表明，Hp感染與胃癌組織中p27蛋白表達呈負相關，這一結果說明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表達降低或缺失，從而導致胃黏膜癌變的發生，其機制可能為，Hp感染可能使p27在胃癌的進展過程中逐漸喪失了作為細胞周期負調控因子的抑癌作用，導致胃癌發生，同時p27下降可引起細胞外基質和細胞黏附性下降[15]，從而導致腫瘤浸潤、轉移。這也可能是Hp感染引起胃癌發生的機制之一。

[參考文獻]

[1] 鄒小農，孫喜斌，陳萬青，等. 2003～2007 年中國胃癌發病與死亡情況分析[J]. 腫瘤，2012，32（2）：109-114.

[2] 陳清波，王洪波，徐明垚，等. 慢性胃病伴腸上皮化生、胃癌與幽門螺旋桿菌感染的關系[J]. 實用癌癥雜志，2010， 25（2） ： 169-171.

[3] 杜中紅，魏曉萍，惠起源，等. 胃癌前病變癌變機制及篩查研究進展[J].現代腫瘤醫學，2010，18（4）：814-816.

[4] 陸再英，鐘南山. 內科學[M]. 第7版.北京：人民衛生出版社，2008：396.

[5] Coqueret O. New roles for p21 and p27 cell cycle inhibition：A fuction for each cell compartment[J]. Trenda Cell Bid， 2003，13（2）： 65-70.

[6] 王建馗，馮義朝. 幽門螺桿菌感染與胃癌局部浸潤的相關性[J]. 世界華人消化雜志，2010，18（3） ： 268-271.

[7] 蘇連明，艾 江，孔祥紅. 結直腸癌PTEN基因表達及與P-ERK相關性研究，中國組織化學與細胞化學雜志[J].2012，21（3）：300-303.

[8] 趙紅燕，張鳳榮，單恩忠. 萎縮性胃炎 Hp 感染陽性率和Ki -67增殖的相關性研究[J]. 中國醫療前沿，2010，5（8） ： 1-2.

[9] Yu XW，Xu Y，Gong YH，et al. Helicobacter pylori induces malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro[J]. APMIS，2011，119（3）：187-197.

[10] 張廣建，寇有為，王強. 胃癌組織中p27表達與cyclinD1，cyclinE表達的相關性[J]. 世界華人消化雜志，2007，15（36）：3809-3814.

[11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938.

[12] 李勝水，許華，楊晶. p27和ILK在胃癌及癌前病變中的表達及意義[J]. 現代腫瘤醫學，2010，18（1）：128-130.

[13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227.

[14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698.

[15] 王立輝，楊靜玉，崔巍，等. 幽門螺桿菌感染與胃癌中p21和p27表達的關系[J]. 微生物學雜志，2008，28（2）： 40-43.

（收稿日期：2014-03-13）

1.4 統計學處理

實驗數據采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman等級相關分析，以相關系數-1

2 結果

2.1 Hp檢測結果

56例胃癌患者均行14C-UBT檢測，儀器見封三圖1。結果顯示，Hp感染38例，感染率為67.9%。

2.2 p27蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

p27蛋白在胃癌組織中主要以細胞漿和（或）細胞核出現棕黃色染色為主同，見封三圖2。其表達率與患者的性別、年齡和腫瘤大小無相關性（P>0.05），而與胃癌組織分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期密切相關（P<0.05），見表 1。

2.3 Hp感染與p27蛋白表達的相關性研究

統計學分析表明，Hp感染與胃癌組織中p27蛋白表達的相關性研究呈負相關（r=-0.486，P<0.05），見表2。

3 討論

Hp感染是胃癌發生發展的Ⅰ類致病原，Hp具有黏附性，分泌的毒素有致病性，導致胃黏膜病變，Hp還是一種硝酸鹽還原劑，具有催化亞硝化作用而引起致癌作用，發生癌變的順序為：慢性炎癥——萎縮性胃炎——萎縮性胃炎伴腸化——異型增生——癌變[8]，但Hp感染引起胃癌發生并非單一機制所致，與人體內癌基因的激活和突變及抑癌基因的失活有關，與胃癌發生相關的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年發現的新的CKI基因[10] （細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包含兩個有編碼功能的外顯子和一個無功能的外顯子及一個內含子，定位于人體12p13交界處，研究發現[11]，p27蛋白具有多種生物學功能，可直接抑制Cyclin-CDK（細胞周期素-細胞周期蛋白依賴性激酶）復合物的生物學活性從而阻止細胞通過G1/S期轉換的“關卡”[12]，同時還可以作為細胞外刺激信號的潛在媒介來調控細胞周期[13]，p27作為細胞周期的負性調控因子，被認為是一種抑癌基因，具有抑制腫瘤的發生、發展的作用。在對乳腺癌、肺癌、和內分泌腫瘤的研究中發現p27蛋白表達與腫瘤的生長、分化、轉移及預后等密切相關[14]。本實驗結果顯示：Hp陽性表達率呈遞減時，而p27蛋白表達呈升高趨勢，統計學分析表明，Hp感染與胃癌組織中p27蛋白表達呈負相關，這一結果說明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表達降低或缺失，從而導致胃黏膜癌變的發生，其機制可能為，Hp感染可能使p27在胃癌的進展過程中逐漸喪失了作為細胞周期負調控因子的抑癌作用，導致胃癌發生，同時p27下降可引起細胞外基質和細胞黏附性下降[15]，從而導致腫瘤浸潤、轉移。這也可能是Hp感染引起胃癌發生的機制之一。

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[10] 張廣建，寇有為，王強. 胃癌組織中p27表達與cyclinD1，cyclinE表達的相關性[J]. 世界華人消化雜志，2007，15（36）：3809-3814.

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[12] 李勝水，許華，楊晶. p27和ILK在胃癌及癌前病變中的表達及意義[J]. 現代腫瘤醫學，2010，18（1）：128-130.

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[14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698.

[15] 王立輝，楊靜玉，崔巍，等. 幽門螺桿菌感染與胃癌中p21和p27表達的關系[J]. 微生物學雜志，2008，28（2）： 40-43.

（收稿日期：2014-03-13）

1.4 統計學處理

實驗數據采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman等級相關分析，以相關系數-1

2 結果

2.1 Hp檢測結果

56例胃癌患者均行14C-UBT檢測，儀器見封三圖1。結果顯示，Hp感染38例，感染率為67.9%。

2.2 p27蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

p27蛋白在胃癌組織中主要以細胞漿和（或）細胞核出現棕黃色染色為主同，見封三圖2。其表達率與患者的性別、年齡和腫瘤大小無相關性（P>0.05），而與胃癌組織分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期密切相關（P<0.05），見表 1。

2.3 Hp感染與p27蛋白表達的相關性研究

統計學分析表明，Hp感染與胃癌組織中p27蛋白表達的相關性研究呈負相關（r=-0.486，P<0.05），見表2。

3 討論

Hp感染是胃癌發生發展的Ⅰ類致病原，Hp具有黏附性，分泌的毒素有致病性，導致胃黏膜病變，Hp還是一種硝酸鹽還原劑，具有催化亞硝化作用而引起致癌作用，發生癌變的順序為：慢性炎癥——萎縮性胃炎——萎縮性胃炎伴腸化——異型增生——癌變[8]，但Hp感染引起胃癌發生并非單一機制所致，與人體內癌基因的激活和突變及抑癌基因的失活有關，與胃癌發生相關的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年發現的新的CKI基因[10] （細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包含兩個有編碼功能的外顯子和一個無功能的外顯子及一個內含子，定位于人體12p13交界處，研究發現[11]，p27蛋白具有多種生物學功能，可直接抑制Cyclin-CDK（細胞周期素-細胞周期蛋白依賴性激酶）復合物的生物學活性從而阻止細胞通過G1/S期轉換的“關卡”[12]，同時還可以作為細胞外刺激信號的潛在媒介來調控細胞周期[13]，p27作為細胞周期的負性調控因子，被認為是一種抑癌基因，具有抑制腫瘤的發生、發展的作用。在對乳腺癌、肺癌、和內分泌腫瘤的研究中發現p27蛋白表達與腫瘤的生長、分化、轉移及預后等密切相關[14]。本實驗結果顯示：Hp陽性表達率呈遞減時，而p27蛋白表達呈升高趨勢，統計學分析表明，Hp感染與胃癌組織中p27蛋白表達呈負相關，這一結果說明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表達降低或缺失，從而導致胃黏膜癌變的發生，其機制可能為，Hp感染可能使p27在胃癌的進展過程中逐漸喪失了作為細胞周期負調控因子的抑癌作用，導致胃癌發生，同時p27下降可引起細胞外基質和細胞黏附性下降[15]，從而導致腫瘤浸潤、轉移。這也可能是Hp感染引起胃癌發生的機制之一。

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[3] 杜中紅，魏曉萍，惠起源，等. 胃癌前病變癌變機制及篩查研究進展[J].現代腫瘤醫學，2010，18（4）：814-816.

[4] 陸再英，鐘南山. 內科學[M]. 第7版.北京：人民衛生出版社，2008：396.

[5] Coqueret O. New roles for p21 and p27 cell cycle inhibition：A fuction for each cell compartment[J]. Trenda Cell Bid， 2003，13（2）： 65-70.

[6] 王建馗，馮義朝. 幽門螺桿菌感染與胃癌局部浸潤的相關性[J]. 世界華人消化雜志，2010，18（3） ： 268-271.

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[8] 趙紅燕，張鳳榮，單恩忠. 萎縮性胃炎 Hp 感染陽性率和Ki -67增殖的相關性研究[J]. 中國醫療前沿，2010，5（8） ： 1-2.

[9] Yu XW，Xu Y，Gong YH，et al. Helicobacter pylori induces malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro[J]. APMIS，2011，119（3）：187-197.

[10] 張廣建，寇有為，王強. 胃癌組織中p27表達與cyclinD1，cyclinE表達的相關性[J]. 世界華人消化雜志，2007，15（36）：3809-3814.

[11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938.

[12] 李勝水，許華，楊晶. p27和ILK在胃癌及癌前病變中的表達及意義[J]. 現代腫瘤醫學，2010，18（1）：128-130.

[13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227.

[14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698.

[15] 王立輝，楊靜玉，崔巍，等. 幽門螺桿菌感染與胃癌中p21和p27表達的關系[J]. 微生物學雜志，2008，28（2）： 40-43.

（收稿日期：2014-03-13）