HPSE2在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

張珉+黃波+張玲+呂威力

【摘要】目的檢測乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中的表達(dá)情況, 并探討其與NSCLC的臨床病理因素的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)(S-P法)檢測82例NSCLC患者及10例癌旁正常肺組織中HPSE2的表達(dá)。結(jié)果HPSE2主要定位于細(xì)胞漿, 在82例NSCLC組織中, 30例(37%)為高表達(dá), 在非癌肺組織中弱表達(dá)或無明顯表達(dá)。HPSE2高表達(dá)同局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移減少(P=0.012), 患者預(yù)后生存時(shí)間延長相關(guān)(P=0.027)。結(jié)論HPSE2的表達(dá)與NSCLC局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移減少及患者預(yù)后生存時(shí)間延長相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】乙酰肝素酶-2；非小細(xì)胞肺癌；腫瘤標(biāo)志物；免疫組織化學(xué)肺癌一直都是全球范圍內(nèi)高死亡率的惡性腫瘤, 并且死者中80%為非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)患者, 由于腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中大量具有調(diào)控作用的細(xì)胞因子活性發(fā)生變化, 尋找上述活性分子。乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)屬于乙酰肝素酶家族 ［1］, 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)HPSE2在頭頸部腫瘤、卵巢腫瘤、宮頸腫瘤、直腸癌、胃癌組織中高表達(dá)并與腫瘤進(jìn)展存在關(guān)聯(lián)［2-6］, 但HPSE2在NSCLC組織中的表達(dá)情況目前尚無報(bào)道, 本實(shí)驗(yàn)將探討HPSE2在NSCLC組織中的表達(dá)水平及其與肺癌臨床病理因素之間的關(guān)系。

1材料與方法

1. 1材料選取2002年1月~2006年12月遼寧省腫瘤醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理確診的NSCLC標(biāo)本82例, 其中49例具有完整隨訪資料。10例對照標(biāo)本取自同期距離癌灶邊緣5 cm以上并經(jīng)HE染色證實(shí)的正常肺組織。所有患者術(shù)前均未接受放化療。

1. 2方法

1. 2. 1免疫組織化學(xué)所有標(biāo)本均用10%中性福爾馬林固定, 石蠟包埋, 制成4 μm切片, 采用S-P法檢測HPSE2蛋白表達(dá)情況。HPSE2單克隆抗體購自美國Santa cruz公司, S-P法試劑盒及DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)公司。切片滴加HPSE2一抗(1:100)4℃濕盒內(nèi)孵育過夜, 次日按照SP試劑盒說明書進(jìn)行染色, DAB顯色, 蘇木素復(fù)染。以PBS代替一抗作為空白對照。細(xì)胞染色強(qiáng)度以胞漿著色陰性、淡黃色、黃棕色、深棕褐色分別記0、1、2、3分；染色范圍以著色細(xì)胞量占腫瘤細(xì)胞<5%、5%~25%、26%~75%及>75%分別記0、1、2、3分, 兩項(xiàng)計(jì)分相乘為最終得分(0~9分), 得分≤4分為低表達(dá), >4分為高表達(dá)。

1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理, 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果各組間的比較采用χ2檢驗(yàn)及 Fisher 確切概率法, 生存數(shù)據(jù)分析采用 Kaplan-Maier 法, 采用 log-rank 法判斷差異性, P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2. 1免疫組化結(jié)果免疫組織化學(xué)染色顯示, HPSE2主要定位于細(xì)胞漿, 82例NSCLC組織中, 30例(37%)為高表達(dá), 在非癌性肺組織中弱表達(dá)或無明顯表達(dá)。HPSE2高表達(dá)同局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移減少(P=0.012)相關(guān), 與患者年齡(P=0.658)、性別(P=0.96)、腫瘤組織類型(P=0.654)、pTNM分期(P=0.266)、腫瘤體積(P=0.105)、腫瘤分化水平(P=0.174)等均無相關(guān)性。.

2. 2HPSE2表達(dá)水平與NSCLC患者預(yù)后生存率之間的關(guān)系對49例有完整的術(shù)后隨訪記錄的患者進(jìn)行Kaplan-Meier生存時(shí)間分析顯示: NSCLC組織中HPSE2高表達(dá)組患者生存時(shí)間高于低表達(dá)組生存時(shí)間［(61±4.31) VS (50±8.92)］；Log-Rank, P=0.027)。

3討論

乙酰肝素酶家族包括兩個(gè)成員：乙酰肝素酶-1 (hepara-nase-1, HPSE1), 乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)；HPSE1是一種β-D-內(nèi)切葡糖醛酸酶, 在人腫瘤組織中常高表達(dá)并同腫瘤進(jìn)展密切相關(guān), HPSE1可通過水解細(xì)胞外基質(zhì)、釋放活性細(xì)胞因子及激活信號通路等方式調(diào)控腫瘤進(jìn)展。HPSE2蛋白結(jié)構(gòu)同HPSE1有大約59%的同源性, 在腦、乳腺等組織中常有較高表達(dá)［1］, 在頭頸部腫瘤、卵巢腫瘤、宮頸腫瘤、直腸癌、胃癌組織中高表達(dá)［2］, 但其所發(fā)揮的具體生物學(xué)作用及機(jī)制尚不十分明確。

HPSE2在NSCLC組織中表達(dá)情況及臨床病理意義目前尚無報(bào)道, 通過免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)HPSE2在NSCLC組織的表達(dá)強(qiáng)度高于癌旁組織及正常肺組織, 這與其他腫瘤的研究結(jié)果相一致。經(jīng)進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn), HPSE2高表達(dá)與NSCLC局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移減少及患者預(yù)后生存時(shí)間延長相關(guān), HPSE2在頭頸部腫瘤高表達(dá)同局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移負(fù)減少及預(yù)后生存時(shí)間延長相關(guān)［2］, 胃癌組織中HPSE2高表達(dá)同患者生存時(shí)間延長相關(guān), 這些結(jié)果提示HPSE2對腫瘤的發(fā)展可以發(fā)揮抑制作用, 可能的機(jī)制有：①HPSE2可以與HPSE1競爭底物進(jìn)而抑制其活性抑制腫瘤進(jìn)展［2］；②.多蜂房蛋白EZH2可以抑制靶基因轉(zhuǎn)錄, EZH2在多種惡性腫瘤中高表達(dá)并被視為腫瘤進(jìn)展的標(biāo)志物, 因此被EZH2抑制的基因可能發(fā)揮抑癌的作用, 而HPSE2正是EZH2抑制的靶基因, 這提示HPSE2抑制腫瘤進(jìn)展的作用可能與EZH2有關(guān), 而在NSCLC組織中HPSE2同HPSE1及EZH2的相互作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究?，F(xiàn)有研究均發(fā)現(xiàn)HPSE2在腫瘤組織中表達(dá)強(qiáng)度高于癌旁及正常組織, 同時(shí), 在宮頸病變組織中HPSE2表達(dá)強(qiáng)度隨惡變程度增加逐級增高, 在胃癌組織中HPSE2高表達(dá)與腫瘤體積增加相關(guān)。

綜上所述, HPSE2在腫瘤發(fā)展過程中所起的作用較為復(fù)雜, 尚需進(jìn)一步研究, 在NSCLC組織中, HPSE2表達(dá)與腫瘤局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移減少及患者預(yù)后生存時(shí)間延長相關(guān), HPSE2有可能成為NSCLC篩查、診斷及預(yù)后結(jié)果判定的新靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

［1］ McKenzie E, Tyson K, Stamps A, et al. Cloning and expression profiling of Hpa2, a novel mammalian heparanase family member. Biochem Biophys Res Commun, 2000, 276(3):1170-1177.

［2］ Levy-Adam F, Feld S, Cohen-Kaplan V, et al. Heparanase 2 interacts with heparan sulfate with high affinity and inhibits heparanase activity. J Biol Chem, 2010, 285(36):2801-2809.

［收稿日期：2014-03-12］

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