銀杏葉提取物預防心肌缺血再灌注損傷的研究

程 陽 唐橋斐 趙麗妮

1.沈陽醫學院病理生理學教研室，遼寧沈陽 110034；2.沈陽醫學院沈洲醫院耳鼻喉科，遼寧沈陽 110034；3.沈陽醫學院藥理教研室，遼寧沈陽 110034

心肌缺血再灌注損傷是一種分布廣泛的臨床癥狀，常見于冠狀動脈搭橋術、心肌梗死、再通術及冠狀動脈溶栓治療中，其主要致病機制為機體存在大量的自由基，其中以氧自由基為主[1]。急性心肌梗死是一種冠狀動脈急性閉塞疾病，患者的冠狀動脈供血不足，導致相應的供血區心肌出現嚴重的缺血和缺氧狀況，研究顯示，及早對患者進行有效的抗氧化治療能夠明顯的降低心肌損傷程度，并對心功能狀態起到一定的改善效果[2]。銀杏葉提取物指的是由銀杏葉中提取得到的內脂類及黃酮等物質，研究顯示，該種物質具有一定的抗氧化作用，能夠對脂質過氧化作用起到抑制效果[3]。本次研究于2013年3月—2013年10月期間通過對大鼠心肌缺血再灌注損傷模型進行銀杏葉提取物給藥治療，旨在探討銀杏葉提取物在預防心肌缺血再灌注損傷方面的臨床療效，為臨床治療提供可靠的證據。現將結果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

50只雄性健康SD大鼠，日齡2～3d，由醫學院實驗動物中心提供，體重平均為（254±10.16）g。銀杏葉提取物采用浙江康恩貝制藥股份有限公司提供的藥物。

1.2 方法

1.2.1 動物模型 建立大鼠心肌缺血再灌注模型，采用40mg/kg戊巴比妥鈉對大鼠進行麻醉，行氣管插管人工呼吸，開胸使心臟暴露，將左冠狀靜脈主干作為標致，于左心耳根部下方約2 cm處進針，使用0號線由心肌表層穿入，肺動脈圓錐旁穿出，20min后，將一直徑1.5mm凹槽硅膠管放置于血管和結扎線之間，將結扎線拉近，使硅膠管對冠脈左室支造成壓迫形成閉塞，約30min后將結扎線松解，使之再通。對大鼠行心電圖監測，若缺血期ST段抬高程度在0.2mV以上，且再灌注后ST段下降幅度在50%以上，則說明結扎和再通取得成功。順利再灌注后，取后腹主動脈血樣2mL，離心備用。

1.2.2 動物分組 將50只SD大鼠隨機平均分配為5組：①假手術組：給予常規麻醉劑開胸處理，在對指定部位進行結扎線穿過后，不進行其他操作，于20min平衡后進行觀察；②對照組：手術后平衡20min，在缺血時間達到30min時給予10 min再灌注，缺血20 min時給予靜脈注射生理鹽水；③藥物1組、藥物2組、藥物3組：于對照組缺血再灌注基礎上，分別給予銀杏葉提取物25 mg/kg、50mg/kg、100mg/kg。

1.2.3 觀察指標 采用硫代巴比妥酸法對心肌組織丙二醛水平進行測定，采用Griss法對心肌一氧化氮水平進行測定。

1.3 統計學方法

本次研究采用統計學軟件SPSS 13.0對所有數據進行分析處理，采用平均值±標準差的形式表示計量資料，采用t檢驗對計量資料進行檢驗，采用χ2檢驗對計數資料進行檢驗，P＜0.05表明差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平對比結果

假手術組大鼠心肌一氧化氮及丙二醛水平明顯低于對照組大鼠，差異具有顯著性（P＜0.05），表明心肌缺血再灌注損傷會造成相應指標水平明顯增高；藥物組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平明顯低于對照組，差異具有顯著性（P＜0.05），其中藥物2組下降水平最為明顯，增加藥物劑量后出現一定下降，但差異無顯著性（P＞0.05）。 見表 1。

表1 5組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平對比結果

表1 5組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平對比結果

注：同假手術組比較，*P=0.000，tMDA=11.271，tNO=27.034；同對照組比較，**P=0.000，t MDA-1=9.243，t NO-1=8.951；tMDA-2=9.243，tNO-2=8.951；t MDA-3=9.243，t NO-3=8.951； 同藥物 2 組比 較，#P MDA=0.051，P NO=0.056,t MDA=5.461，t NO=7.015。

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3 討論

銀杏時銀杏科植物的一種，銀杏葉主要為銀杏干燥葉，其主要成分為萜內醋類、黃酮類和少量的生物堿及多酚類化學物質，銀杏葉提取物中的有效成分主要為銀杏內酯和總黃酮類物質，是一種血小板活性因子拮抗劑[4]。臨床試驗顯示，銀杏葉提取物具有一定的抗氧化活性和抗氧自由基活性，能夠起到降低血液黏度，改善微循環的作用。近代臨床研究結果證明，銀杏葉提取物能夠有效的治療心腦血管等多種疾病，近年來，銀杏葉制劑被廣泛應用于冠狀動脈粥樣硬化心臟病的治療中[5]。

心肌缺血再灌注損傷指的是心肌在缺血后得到血液再灌注，發生功能代謝障礙，結構受到破壞導致病情加重的現象。臨床研究證明，造成心肌缺血再灌注損傷的主要原因為機體自由基水平增高，微血管損傷和細胞內發生鈣超載現象等[6]。

當前臨床普遍認為，機體氧自由基水平異常升高是引起心肌缺血再灌注損傷的主要原因，相關資料顯示，銀杏葉提取物能夠有效抑制心肌缺血再灌注時氧自由基的產生，增強心肌對機體自由基的清除功能，降低自由基導致的脂質過氧化反應，從而對心肌細胞起到保護作用。心肌組織丙二醛是直至不飽和酸在氧自由基的作用下的一種過氧化反應產物，本次研究中對照組大鼠心肌組織丙二醛水平較假手術組大鼠明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05），表明缺血再灌注會引起機體心肌丙二醛水平異常增高，表明再灌注會導致氧自由基的水平大幅度增高。本次研究中，通過給予藥物組大鼠不同劑量的銀杏葉提取物藥劑，結果表明，實驗組大鼠心肌組織丙二醛水平較對照組大鼠明顯降低，差異具有顯著性（P＜0.05），有效降低了氧自由基對心肌細胞造成的損傷，對血管內皮細胞的依賴性舒張功能起到一定的改善作用，從而起到心肌缺血再灌注損傷的預防保護效果。

本次研究中，對照組大鼠心肌一氧化氮水平較假手術組大鼠明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05），表明再灌注會導致機體一氧化氮水平異常升高，同相關資料中的結論基本一致。高水平的一氧化氮會加重心肌損傷，一方面高水平一氧化氮會引起組織cGMP分泌過剩，從而對cGMP依賴性蛋白激酶造成刺激，阻礙細胞鈣質外流，造成心肌收縮功能障礙。另一方面，一氧化氮會同再灌注時機體長生的氧自由基結合，造成大量過氧亞硝酸鹽陰離子的生成，分解后形成二氧化氮自由基和氫氧化鈉自由基，加速了細胞膜的脂質過氧化反應，對心肌收縮功能造成嚴重損害。本次研究中，通過給予藥物組大鼠不同劑量的銀杏葉提取物藥劑，結果表明，實驗組大鼠心肌一氧化氮水平較對照組大鼠明顯降低，差異具有顯著性（P＜0.05），有效的抑制了一氧化氮同氧氣結合生成自由基的過程，從而降低對心肌細胞的損害。

本次研究結果表明，藥物1組、藥物2組、藥物3組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平的降低幅度并未同藥劑濃度呈正相關關系，其中以50mg/kg組降低水平最為明顯，明顯高于25mg/kg組，差異具有顯著性（P＜0.05），加大劑量后出現小幅度降低，兩組差異無顯著性（P＞0.05）。其主要原因在于銀杏葉提取物發揮作用主要是通過同心肌細胞膜上的受體進行相互結合，由于受體數量存在限制，因此當達到一定濃度后會發生“飽和現象”，導致加大劑量無法有效的進一步增進療效，這提示我們在臨床用藥時，應充分考慮銀杏葉提取物的這一性質，針對患者的具體情況給予其適當濃度藥物，避免給藥過剩。

相關研究表明，銀杏葉提取物除具有清除氧自由基作用外，還具有一定的拮抗作用及抑制白細胞活化效果。研究顯示，心肌缺血再灌注會引起機體血小板激活因子和白細胞水平異常升高，造成血管的通透性增強，引起心肌收縮力和心輸出流量的下降，造成舒張功能障礙，進一步導致心肌損傷。通過給予實驗對象一定劑量的銀杏葉提取物，機體血小板激活因子及白細胞水平明顯降低，其主要作用機制仍需進行深入研究。

綜上所述，銀杏葉提取物能夠有效的降低心肌缺血再灌注對心肌功能造成的損害，能夠起到預防心肌缺血再灌注損傷的作用，其中發揮主要效果的為銀杏葉提取物的清除氧自由基作用，一方面直接降低心肌組織丙二醛水平，另一方面通過抑制心肌一氧化氮水平來間接抑制氧自由基的產生，但是需要注意的是，銀杏葉提取物的心肌保護作用同藥物劑量之間并無明顯的正相關關系，對于其同心肌細胞的具體作用機制仍需進一步的研究。

[1]朱蓉，冉珂，常業恬，等.銀杏葉提取物后處理對兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].醫學臨床研究，2012,29(1):96-98.

[2]李靜玲，林小鳳，馮鵬，等.銀杏葉提取物保護心肌缺血再灌注損傷的研究進展[J].臨床合理用藥雜志，2013,6(25):180-181.

[3]謝咪雪，蔣琦，陳冬兒，等.銀杏葉提取物對心肌缺血再灌注損傷保護作用的研究進展[J].浙江中醫藥大學學報，2012,36(2):230-232.

[4]鄭曉鑄，劉凱，夏燕飛，等.銀杏葉提取物在體外循環心內直視手術中對心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].中國現代醫生，2010(28):26-27.

[5]秦智剛，艾玲，羅愛林，等.右美托咪定對體外循環下心肌缺血再灌注損傷的保護效應[J].華中科技大學學報：醫學版，2013,42(5):551-554.

[6]簡文亭，簡道林，馬會改.迷走神經刺激在心肌缺血再灌注損傷中的研究進展[J].廣東醫學，2013,34(12):1938-1940.