S100A9蛋白在子宮內膜腺癌中的表達及臨床意義

武愛芳，尹格平，陳 銘，李 娟，韓 燕，季美玲，王美玲

子宮內膜癌是起源于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤［1-4］，以來源于子宮內膜腺體的腺癌最多見，占所有組織學類型的80%［5］，占女性生殖系統腫瘤的20%～30%［5-9］。近年來，子宮內膜癌發病有年輕化趨勢，在發達國家，＜40歲的患者由2/10萬增長為40/10萬～50/10萬［10］，因此進行早期診斷和治療具有十分重要的意義。S100A9是一組EF-手型鈣結合蛋白。鈣結合蛋白是鈣離子在體內發揮其黏附性、突觸遷移、肌肉細胞收縮、細胞分化等生理作用的關鍵部分。研究發現，在多種腫瘤組織中鈣結合蛋白中的多個成員均有異常的表達，這種表達與腫瘤的浸潤和轉移表現出一定的相關性，因此可以推斷，S100蛋白家族與腫瘤的生長有密切關系［11］。本文旨在探討S100A9蛋白在子宮內膜腺癌發生、發展及預后中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2010年1月—2013年1月在濟南軍區總醫院婦科就診并經組織病理學明確診斷的子宮內膜腺癌組織標本60例和子宮內膜上皮內瘤變(EIN)組織標本16例，子宮內膜腺癌患者年齡40～77歲，平均54．5歲;根據2009年國際婦產科聯盟手術－病理分期標準(FIGO)，其中Ⅰ期26例，Ⅱ期16例，Ⅲ～IV期18例;根據WHO病理分級，高分化20例，中分化25例，低分化15例;轉移情況:有淋巴轉移12例，無淋巴轉移48例。EIN患者年齡38～55歲，平均46．5歲;其中Ⅰ級9例，Ⅱ級5例，Ⅲ級2例。選擇同期正常子宮內膜組織14例，年齡41～56歲，平均48歲;其中分泌期9例，增殖期5例。

1.2 主要試劑 兔抗人S100A9單克隆抗體(工作濃度1∶2500)購自北京博奧森有限公司，Sp-9000免疫組化染色試劑盒及ZLI-9033濃縮型DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物測定組織中技術有限公司。

1.3 實驗方法及步驟 石蠟標本均由濟南軍區總醫院病理科提供。免疫組化法測定組織中S100A9蛋白的表達，常規染色，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。染色設立用試劑公司提供的已知陽性組織玻片作為陽性對照。免疫組化染色強度參照Formwitz評分進行半定量分級，根據陽性細胞的百分率(每片隨機觀察5個40×10倍視野，對其中的陽性細胞進行計數)及顯色情況分級。按內膜組織的顯色比例評分，＜25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分;按內膜細胞的顯色深淺評分，無顯色為0分，淺黃色或黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。免疫反應的得分即每個標本的加權分數(Bax weighted core，BaxWS)為二者的乘積。免疫反應得分＞4分為S100A9陽性表達，≤4分為S100A9陰性表達。免疫組化結果均由2或3名高級職稱病理科醫師協助判定。

1.4 統計學方法 使用SPSS 17．0軟件包進行統計學分析，計數資料以率(%)表示，采用χ2檢驗、χ2校正檢驗、Fisher精確檢驗，多樣本率之間的多重比較采用χ2分割法，α=0．05為檢驗水準。

2 結果

2.1 S100A9蛋白表達 S100A9蛋白在正常子宮內膜組織、EIN組織和子宮內膜腺癌組織中均表達(圖1、2、3)，陽性表達率分別為 28．57%(4/14)、75．00%(12/16)、80．00%(48/60)。S100A9 蛋白在EIN和子宮內膜腺癌中的陽性表達率均高于正常子宮內膜，差異有統計學意義(χ2=6．467，P=0．026;χ2=14．371，P=0．000)，但 EIN 中的陽性表達率與子宮內膜腺癌比較差異無統計學意義(χ2=0．190，P=0．548)。

圖1 S100A9蛋白在正常子宮內膜組織中的表達(SP×100)

圖2 S100A9蛋白在子宮內膜上皮內瘤變中的表達(SP×100)

圖3 S100A9蛋白在子宮內膜腺癌中的表達

2.2 S100A9蛋白的表達與子宮內膜腺癌臨床參數的關系 在子宮內膜腺癌組織中，S100A9的表達強度與組織學分化程度和手術－病理分期相關(P＜0．05)，而與絕經情況、肌層浸潤深度和有無淋巴轉移無明顯相關性(P＞0．05)，見表1。

表1 S100A9蛋白表達與子宮內膜腺癌臨床參數的關系(例)

3 討論

子宮內膜癌是癌基因激活、抑癌基因失活及細胞信號傳導途徑異常表達、細胞增殖過度而凋亡的結果［12］，S100蛋白生物學功能涉及多方面，其中包括激活信號傳導通路、細胞骨架建立，調節鈣離子穩態、蛋白質的磷酸化、作為轉錄因子、調控細胞生長分化、加強分子間的黏附作用、參與炎性應激反應等。綜合國內外文獻資料我們認為S100A9蛋白參與了核轉錄因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信號通路，通過此途徑來調控基因及調整腫瘤發展過程中的相關基因，包括細胞的生長、細胞分化、基因擴增、血管生成、分子黏附等［13］。研究發現在轉移性腫瘤組織中，S100A8和S100A9可以誘導血清淀粉樣蛋白A3的生成，而血清淀粉樣蛋白A3通過TLR4 可以激活 NF-κB 信號系統［14］，在 NF-κB 通路的參與下，可以引起腫瘤基因的克隆擴增，導致腫瘤的發生及侵襲，同時激活的NF-κB信號系統又可引起S100A8、S100A9蛋白過表達，這種正反饋的調節機制又加速了腫瘤的侵襲及轉移。表明S100A8、S100A9參與了腫瘤的發生及發展。另外，還有些信號蛋白調節也需要S100A9蛋白的參與，如STAT3、casepase，其在信號傳導通路中發揮了極其重要的作用，并且與腫瘤發生、發展也均有密切相關性［15-16］。同樣在對子宮內膜癌的研究中發現，通過NF-κB信號傳導通路能調節基因的表達及增強酶的活性，促進腫瘤細胞的增殖及腫瘤的侵襲［17-18］，因此S100A9蛋白可能通過NF-κB信號傳導通路促進了子宮內膜癌的發生、發展、侵襲及轉移。

本研究結果顯示，S100A9蛋白在正常子宮內膜組織、EIN組織和子宮內膜腺癌組織中均有表達，但其陽性表達率在子宮內膜腺癌中最高，提示S100A9蛋白參與了子宮內膜癌的發生發展，并且可以作為早期診斷的一項檢測指標。本研究還顯示，S100A9蛋白陽性表達率隨組織分化程度的降低而升高，隨手術－病理分期的升高而升高，這充分說明S100A9蛋白的表達在子宮內膜癌的發生發展中有重要作用，且其表達上調對子宮內膜癌的浸潤、轉移及判斷預后有一定的指導作用。由于組織分化程度和臨床分期與惡性腫瘤的轉移、預后有關，推測S100A9蛋白可能反映了子宮內膜癌的生物學行為，并提示子宮內膜癌患者的預后。Chiba 等［10］、杜雪梅等［18］及Sharma等［19］報道在腺細胞來源的腫瘤中S100A9蛋白均為高表達，且與腫瘤組織的分化程度呈負相關。本研究結果與文獻報道一致。在相關血清方面的研究，Grebhardt等［20］和 Miao 等［21］報道前列腺癌患者的血清中S100A9蛋白陽性表達率顯著高于正常人和良性前列腺增生者，但研究發現S100A9蛋白的特異性不能取代前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)的測定。Kim 等［22］研究發現在大腸腺瘤和早期大腸癌中S100A8和S100A9較腺苷高半胱氨酸酶和轉移抑制基因(Nm23-H1)顯著高表達，且免疫組化結果顯示大腸癌中腫瘤浸潤的免疫細胞在細胞質中也呈高表達。提示S100A9蛋白可能在腺細胞癌變的發病機制中擔任重要角色。而Fan等［23］研究顯示，S100A9在中國人食管鱗狀細胞癌患者中表達降低，Roesch等［24］研究發現S100A9、S100A8在頭頸部鱗狀細胞癌中表達明顯下調。提示S100A9蛋白可能在鱗狀上皮癌變的發病機制中發揮重要作用。由此可以推測，對于來源于不同的組織類型的腫瘤，在其發生過程中，S100A9蛋白可能發揮著不同的調控作用。

本研究發現S100A9蛋白在子宮內膜腺癌中呈高表達，在正常子宮內膜組織中低表達，這種組織的特異性可為子宮內膜癌生物學分子靶向治療提供臨床指導作用。另外，S100A9蛋白在手術－病理分期越晚、組織分化越差的患者中陽性表達率越高，因此通過檢測S100A9蛋白表達水平可以在一定程度反映腫瘤的組織分化程度，分化程度越低，惡性可能越大，提示患者預后越差，對子宮內膜癌患者的預后有一定的指導作用。

綜上所述，應不斷深入研究S100A9蛋白的基因功能及其在腫瘤發生發展中的作用機制，為子宮內膜癌的早期篩查、病情監測、預后判斷提供重要的理論依據。

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