二種中藥水提取物對荷瘤小鼠免疫功能的影響

敖亮+潘正剛+何昌棟+楊松濤

摘要：目的探討中藥生地及菟絲子水提物對S180荷瘤小鼠腫瘤細胞免疫及體液免疫的影響。方法選取接種S180腫瘤7d的荷瘤小鼠，抽取乳白色腹水并用無菌生理鹽水稀釋成1×10個/L細胞懸液（活細胞比率>95%），在小鼠右前肢腋窩皮下注射0.2 mL腫瘤細胞懸液，制成實體瘤動物模型。設空白對照組，腫瘤對照組，菟絲子低劑量組、高劑量組，生地低劑量組、高劑量組，每組10只，按0.02 mL/g給予灌胃12天后，將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，進行C3、C4、IgG、CD4、CD8檢測并分析。結果在 C3（1∶5）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低劑量組P<0.01，菟絲子高劑量組及生地低、高劑量組P>0.05；在C4（1∶10）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低、高劑量組P值均<0.01，生地高劑量組P<0.05；但生地高劑量組，菟絲子低、高劑量組間比較，P>0.05，無明顯差異。在IgG（1∶5000）中，與腫瘤對照組比較，生地低、高劑量組P<0.01，在CD4（1∶5）中，與腫瘤對照組比較，生地高劑量P<0.05；在 CD8（1∶1）中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低劑量組P<0.05。結論生地及菟絲子水提物可增強小鼠體液免疫及細胞免疫，以增強體液免疫為主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

關鍵詞：S180荷瘤小鼠；中藥影響；細胞免疫；體液免疫

中圖分類號：R285.5文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）03-0056-02

中醫理論認為，腫瘤病的特點是“正虛邪實”。《醫宗必讀》說：“積之成也，正氣不足，而后邪氣踞之。”現代醫學證實機體免疫力低下是腫瘤形成的主要原因之一。[1]研究中藥提高機體的功能狀況，改善免疫功能而非直接去殺癌細胞。調節機體免疫功能狀態，使機體的抗腫瘤免疫功能得以加強.是中藥抗腫瘤重要機制之一。本實驗研究生地及菟絲對S180荷瘤小鼠腫瘤生長對細胞免疫及體液免疫的影響。

1材料與方法

1.1主要材料健康km小鼠，雌性（20±2）g。購于四川省簡陽達碩動物有限公司。S180肉瘤細胞株由成都中醫藥大學實驗室提供。生地及菟絲，購于成都中醫藥大學附屬醫院，經鑒定符合藥典標準。

1.2實驗方法

1.2.1制取藥物根據中國藥典2000年版（按成人60 kg體重計算用量（地黃9～15 g，菟絲6～12 g）及臨床用藥量的藥效，菟絲子100 g，生地黃300 g粉碎后常規以10、8、6倍水煮沸后溫火煮90、60、45 min去渣取汁，合并3次藥液，進一步經水浴鍋水浴濃縮為1.0 g/mL的濃縮液，菟絲子100 mL、地黃300 mL入冰箱2度冷藏。

1.2.2動物造模、分組及給藥選取接種S180腫瘤7d的荷瘤腹水小鼠，抽取乳白色腹水并用無菌生理鹽水稀釋成1×10個/L細胞懸液（活細胞比率﹥95%），在小鼠右腋皮下注射0.2 mL腫瘤細胞懸液，制成實體瘤動物模型[2]。將荷瘤小鼠隨機分為6組，每組10只，分別設計空白對照組，腫瘤對照組，菟絲子低倍組（5倍劑），菟絲子高倍組（10倍劑），生地低倍組（5倍劑），生地高倍組（10倍劑）。陰性對照組灌服生理鹽水0.2 mL，陽性對照組分別按5倍、10倍劑量灌服中藥0.2 mL，灌胃量為0.025 g/mL，0.2 mL/d，連續用藥12 d后，將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，進行C3、C4、IgG、CD4、CD8檢測并分析。

1.2.3取材將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，取血后用ELISAS試劑盒檢測C3、C4、IGG、CD4、CD8的值。

1.3統計學分析數據用SPSS17.0統計軟件處理，組間比較采用t檢驗，數據以（x±s）表示，P<0.05為差異，具有統計學意義。

2實驗結果

3討論

根據每天觀察小鼠毛發，精神狀態，活動量及排尿量對照，空白對照組，健康小鼠皮毛潔白，有光澤，精神狀態好，活動量大，排尿少，墊料干燥。腫瘤對照組，荷瘤小鼠皮毛稀疏，無光澤，精神萎靡，活動少，外力刺激，緩慢移動，排尿多，墊料較濕，中藥灌服組在兩者之間。在體液免疫中，C3（1∶5）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低倍劑量P<0.01，證明菟絲子低倍劑量對體液免疫中的C3有影響作用，菟絲子高倍組及生地A、B與腫瘤對照組比較，P>0.05，說明對C3濃度無免疫作用。在C4（1∶10）OD值濃度中，生地高倍劑量P<0.05，對體液免疫中的C4有響作用，菟絲子低倍劑量及菟絲子高倍劑量均P<0.01，對體液免疫中的C4有明顯影響作用，但在生地高倍劑量，菟絲子低倍劑量及菟絲子高倍劑量中組間比較，P>0.05，無明顯差異。在IgG（1∶5000）中，生地低劑量與生地高劑量組均P<0.01，對IgG免疫有顯著影響作用。在細胞免疫中，CD4（1∶5）中生地高劑量P<0.05，對細胞免疫有影響作用，CD8（1∶1）中菟絲子低劑量P<0.05，對細胞免疫有影響作用。在解剖小鼠過程中，腫瘤組肝臟明顯腫大，充血明顯，中藥灌服組肝臟腫大及充血沒有腫瘤組明顯，懷疑是肝臟靜脈回流受阻，出現肝臟腫大，中藥對肝臟腫大有一定抑制作用。根據觀察肝臟及ELISAS試劑盒檢測C3、C4、IGG、CD4、CD8值結果顯示，可以推斷生地及菟絲可增強小鼠體液免疫及細胞免疫，以增強體液免疫位為主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

參考文獻：

[1]周潔，李竹庭 中藥與腫瘤免疫[J].天津中醫藥 2004，21（3）.

[2]楊悅，姬宏飛，王波，安巍巍紅松松塔加壓熱提取物對S180荷瘤小鼠腫瘤生長及胸腺、脾指數的影響[J].實用腫瘤學雜志 2011，25（3）：37.endprint

摘要：目的探討中藥生地及菟絲子水提物對S180荷瘤小鼠腫瘤細胞免疫及體液免疫的影響。方法選取接種S180腫瘤7d的荷瘤小鼠，抽取乳白色腹水并用無菌生理鹽水稀釋成1×10個/L細胞懸液（活細胞比率>95%），在小鼠右前肢腋窩皮下注射0.2 mL腫瘤細胞懸液，制成實體瘤動物模型。設空白對照組，腫瘤對照組，菟絲子低劑量組、高劑量組，生地低劑量組、高劑量組，每組10只，按0.02 mL/g給予灌胃12天后，將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，進行C3、C4、IgG、CD4、CD8檢測并分析。結果在 C3（1∶5）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低劑量組P<0.01，菟絲子高劑量組及生地低、高劑量組P>0.05；在C4（1∶10）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低、高劑量組P值均<0.01，生地高劑量組P<0.05；但生地高劑量組，菟絲子低、高劑量組間比較，P>0.05，無明顯差異。在IgG（1∶5000）中，與腫瘤對照組比較，生地低、高劑量組P<0.01，在CD4（1∶5）中，與腫瘤對照組比較，生地高劑量P<0.05；在 CD8（1∶1）中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低劑量組P<0.05。結論生地及菟絲子水提物可增強小鼠體液免疫及細胞免疫，以增強體液免疫為主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

關鍵詞：S180荷瘤小鼠；中藥影響；細胞免疫；體液免疫

中圖分類號：R285.5文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）03-0056-02

中醫理論認為，腫瘤病的特點是“正虛邪實”。《醫宗必讀》說：“積之成也，正氣不足，而后邪氣踞之。”現代醫學證實機體免疫力低下是腫瘤形成的主要原因之一。[1]研究中藥提高機體的功能狀況，改善免疫功能而非直接去殺癌細胞。調節機體免疫功能狀態，使機體的抗腫瘤免疫功能得以加強.是中藥抗腫瘤重要機制之一。本實驗研究生地及菟絲對S180荷瘤小鼠腫瘤生長對細胞免疫及體液免疫的影響。

1材料與方法

1.1主要材料健康km小鼠，雌性（20±2）g。購于四川省簡陽達碩動物有限公司。S180肉瘤細胞株由成都中醫藥大學實驗室提供。生地及菟絲，購于成都中醫藥大學附屬醫院，經鑒定符合藥典標準。

1.2實驗方法

1.2.1制取藥物根據中國藥典2000年版（按成人60 kg體重計算用量（地黃9～15 g，菟絲6～12 g）及臨床用藥量的藥效，菟絲子100 g，生地黃300 g粉碎后常規以10、8、6倍水煮沸后溫火煮90、60、45 min去渣取汁，合并3次藥液，進一步經水浴鍋水浴濃縮為1.0 g/mL的濃縮液，菟絲子100 mL、地黃300 mL入冰箱2度冷藏。

1.2.2動物造模、分組及給藥選取接種S180腫瘤7d的荷瘤腹水小鼠，抽取乳白色腹水并用無菌生理鹽水稀釋成1×10個/L細胞懸液（活細胞比率﹥95%），在小鼠右腋皮下注射0.2 mL腫瘤細胞懸液，制成實體瘤動物模型[2]。將荷瘤小鼠隨機分為6組，每組10只，分別設計空白對照組，腫瘤對照組，菟絲子低倍組（5倍劑），菟絲子高倍組（10倍劑），生地低倍組（5倍劑），生地高倍組（10倍劑）。陰性對照組灌服生理鹽水0.2 mL，陽性對照組分別按5倍、10倍劑量灌服中藥0.2 mL，灌胃量為0.025 g/mL，0.2 mL/d，連續用藥12 d后，將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，進行C3、C4、IgG、CD4、CD8檢測并分析。

1.2.3取材將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，取血后用ELISAS試劑盒檢測C3、C4、IGG、CD4、CD8的值。

1.3統計學分析數據用SPSS17.0統計軟件處理，組間比較采用t檢驗，數據以（x±s）表示，P<0.05為差異，具有統計學意義。

2實驗結果

3討論

根據每天觀察小鼠毛發，精神狀態，活動量及排尿量對照，空白對照組，健康小鼠皮毛潔白，有光澤，精神狀態好，活動量大，排尿少，墊料干燥。腫瘤對照組，荷瘤小鼠皮毛稀疏，無光澤，精神萎靡，活動少，外力刺激，緩慢移動，排尿多，墊料較濕，中藥灌服組在兩者之間。在體液免疫中，C3（1∶5）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低倍劑量P<0.01，證明菟絲子低倍劑量對體液免疫中的C3有影響作用，菟絲子高倍組及生地A、B與腫瘤對照組比較，P>0.05，說明對C3濃度無免疫作用。在C4（1∶10）OD值濃度中，生地高倍劑量P<0.05，對體液免疫中的C4有響作用，菟絲子低倍劑量及菟絲子高倍劑量均P<0.01，對體液免疫中的C4有明顯影響作用，但在生地高倍劑量，菟絲子低倍劑量及菟絲子高倍劑量中組間比較，P>0.05，無明顯差異。在IgG（1∶5000）中，生地低劑量與生地高劑量組均P<0.01，對IgG免疫有顯著影響作用。在細胞免疫中，CD4（1∶5）中生地高劑量P<0.05，對細胞免疫有影響作用，CD8（1∶1）中菟絲子低劑量P<0.05，對細胞免疫有影響作用。在解剖小鼠過程中，腫瘤組肝臟明顯腫大，充血明顯，中藥灌服組肝臟腫大及充血沒有腫瘤組明顯，懷疑是肝臟靜脈回流受阻，出現肝臟腫大，中藥對肝臟腫大有一定抑制作用。根據觀察肝臟及ELISAS試劑盒檢測C3、C4、IGG、CD4、CD8值結果顯示，可以推斷生地及菟絲可增強小鼠體液免疫及細胞免疫，以增強體液免疫位為主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

參考文獻：

[1]周潔，李竹庭 中藥與腫瘤免疫[J].天津中醫藥 2004，21（3）.

[2]楊悅，姬宏飛，王波，安巍巍紅松松塔加壓熱提取物對S180荷瘤小鼠腫瘤生長及胸腺、脾指數的影響[J].實用腫瘤學雜志 2011，25（3）：37.endprint

摘要：目的探討中藥生地及菟絲子水提物對S180荷瘤小鼠腫瘤細胞免疫及體液免疫的影響。方法選取接種S180腫瘤7d的荷瘤小鼠，抽取乳白色腹水并用無菌生理鹽水稀釋成1×10個/L細胞懸液（活細胞比率>95%），在小鼠右前肢腋窩皮下注射0.2 mL腫瘤細胞懸液，制成實體瘤動物模型。設空白對照組，腫瘤對照組，菟絲子低劑量組、高劑量組，生地低劑量組、高劑量組，每組10只，按0.02 mL/g給予灌胃12天后，將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，進行C3、C4、IgG、CD4、CD8檢測并分析。結果在 C3（1∶5）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低劑量組P<0.01，菟絲子高劑量組及生地低、高劑量組P>0.05；在C4（1∶10）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低、高劑量組P值均<0.01，生地高劑量組P<0.05；但生地高劑量組，菟絲子低、高劑量組間比較，P>0.05，無明顯差異。在IgG（1∶5000）中，與腫瘤對照組比較，生地低、高劑量組P<0.01，在CD4（1∶5）中，與腫瘤對照組比較，生地高劑量P<0.05；在 CD8（1∶1）中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低劑量組P<0.05。結論生地及菟絲子水提物可增強小鼠體液免疫及細胞免疫，以增強體液免疫為主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

關鍵詞：S180荷瘤小鼠；中藥影響；細胞免疫；體液免疫

中圖分類號：R285.5文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）03-0056-02

中醫理論認為，腫瘤病的特點是“正虛邪實”。《醫宗必讀》說：“積之成也，正氣不足，而后邪氣踞之。”現代醫學證實機體免疫力低下是腫瘤形成的主要原因之一。[1]研究中藥提高機體的功能狀況，改善免疫功能而非直接去殺癌細胞。調節機體免疫功能狀態，使機體的抗腫瘤免疫功能得以加強.是中藥抗腫瘤重要機制之一。本實驗研究生地及菟絲對S180荷瘤小鼠腫瘤生長對細胞免疫及體液免疫的影響。

1材料與方法

1.1主要材料健康km小鼠，雌性（20±2）g。購于四川省簡陽達碩動物有限公司。S180肉瘤細胞株由成都中醫藥大學實驗室提供。生地及菟絲，購于成都中醫藥大學附屬醫院，經鑒定符合藥典標準。

1.2實驗方法

1.2.1制取藥物根據中國藥典2000年版（按成人60 kg體重計算用量（地黃9～15 g，菟絲6～12 g）及臨床用藥量的藥效，菟絲子100 g，生地黃300 g粉碎后常規以10、8、6倍水煮沸后溫火煮90、60、45 min去渣取汁，合并3次藥液，進一步經水浴鍋水浴濃縮為1.0 g/mL的濃縮液，菟絲子100 mL、地黃300 mL入冰箱2度冷藏。

1.2.2動物造模、分組及給藥選取接種S180腫瘤7d的荷瘤腹水小鼠，抽取乳白色腹水并用無菌生理鹽水稀釋成1×10個/L細胞懸液（活細胞比率﹥95%），在小鼠右腋皮下注射0.2 mL腫瘤細胞懸液，制成實體瘤動物模型[2]。將荷瘤小鼠隨機分為6組，每組10只，分別設計空白對照組，腫瘤對照組，菟絲子低倍組（5倍劑），菟絲子高倍組（10倍劑），生地低倍組（5倍劑），生地高倍組（10倍劑）。陰性對照組灌服生理鹽水0.2 mL，陽性對照組分別按5倍、10倍劑量灌服中藥0.2 mL，灌胃量為0.025 g/mL，0.2 mL/d，連續用藥12 d后，將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，進行C3、C4、IgG、CD4、CD8檢測并分析。

1.2.3取材將小鼠摘除眼球靜脈取血1～2 mL，取血后用ELISAS試劑盒檢測C3、C4、IGG、CD4、CD8的值。

1.3統計學分析數據用SPSS17.0統計軟件處理，組間比較采用t檢驗，數據以（x±s）表示，P<0.05為差異，具有統計學意義。

2實驗結果

3討論

根據每天觀察小鼠毛發，精神狀態，活動量及排尿量對照，空白對照組，健康小鼠皮毛潔白，有光澤，精神狀態好，活動量大，排尿少，墊料干燥。腫瘤對照組，荷瘤小鼠皮毛稀疏，無光澤，精神萎靡，活動少，外力刺激，緩慢移動，排尿多，墊料較濕，中藥灌服組在兩者之間。在體液免疫中，C3（1∶5）OD值濃度中，與腫瘤對照組比較，菟絲子低倍劑量P<0.01，證明菟絲子低倍劑量對體液免疫中的C3有影響作用，菟絲子高倍組及生地A、B與腫瘤對照組比較，P>0.05，說明對C3濃度無免疫作用。在C4（1∶10）OD值濃度中，生地高倍劑量P<0.05，對體液免疫中的C4有響作用，菟絲子低倍劑量及菟絲子高倍劑量均P<0.01，對體液免疫中的C4有明顯影響作用，但在生地高倍劑量，菟絲子低倍劑量及菟絲子高倍劑量中組間比較，P>0.05，無明顯差異。在IgG（1∶5000）中，生地低劑量與生地高劑量組均P<0.01，對IgG免疫有顯著影響作用。在細胞免疫中，CD4（1∶5）中生地高劑量P<0.05，對細胞免疫有影響作用，CD8（1∶1）中菟絲子低劑量P<0.05，對細胞免疫有影響作用。在解剖小鼠過程中，腫瘤組肝臟明顯腫大，充血明顯，中藥灌服組肝臟腫大及充血沒有腫瘤組明顯，懷疑是肝臟靜脈回流受阻，出現肝臟腫大，中藥對肝臟腫大有一定抑制作用。根據觀察肝臟及ELISAS試劑盒檢測C3、C4、IGG、CD4、CD8值結果顯示，可以推斷生地及菟絲可增強小鼠體液免疫及細胞免疫，以增強體液免疫位為主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

參考文獻：

[1]周潔，李竹庭 中藥與腫瘤免疫[J].天津中醫藥 2004，21（3）.

[2]楊悅，姬宏飛，王波，安巍巍紅松松塔加壓熱提取物對S180荷瘤小鼠腫瘤生長及胸腺、脾指數的影響[J].實用腫瘤學雜志 2011，25（3）：37.endprint