建立“二腎一夾”腎性高血壓大鼠(2K1C-RHR)模型的體會(huì)

陳俊毅 周平安 張智鋒 王楠楠 陳翱 鄭嘉琪

作者簡(jiǎn)介：陳俊毅（1993—），男，漢族，湖南永州人，2011級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科在校生，【摘要】目的：探討建立“二腎一夾”腎性高血壓大鼠（2K1C-RHR）模型制作過(guò)程中的經(jīng)驗(yàn)體會(huì)與技巧。方法：采用銀夾夾閉一側(cè)腎動(dòng)脈造成其狹窄，導(dǎo)致該側(cè)腎臟缺血，另一側(cè)腎臟不觸及，其血壓升高主要原因是腎臟缺血而造成腎素增多，腎素—血管緊張素系統(tǒng)激活所致。結(jié)論：“二腎一夾”高血壓模型具有造模較為便捷有效，成功率高，同一性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，與人類高血壓病理過(guò)程具有可比性。掌握注意事項(xiàng)及其相關(guān)技巧有助于高血壓相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步更好的開展。

【關(guān)鍵詞】二腎一夾；高血壓；模型；大鼠

【中圖分類號(hào)】R722.12 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949(2014)07-0030-01

基金項(xiàng)目：長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院2014年校級(jí)大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目，長(zhǎng)醫(yī)教〔2014〕10號(hào)-91號(hào)；2014年湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目，湘教通〔2014〕248號(hào)-537號(hào)；

高血壓為我國(guó)最常見的心血管疾病, 不僅發(fā)病因素復(fù)雜眾多, 且常有諸多并發(fā)癥,為了更好的研究高血壓的發(fā)病機(jī)制, 闡明各種藥物的作用機(jī)理, 并且開發(fā)出更多有效的藥物, 眾多醫(yī)學(xué)工作者成功的建立了多種高血壓的動(dòng)物模型,，這對(duì)人類高血壓病的發(fā)病機(jī)制、并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展規(guī)律及防治措施起了重要的作用［1］。所建立的高血壓大鼠模型亦可分為二大類：自發(fā)性高血壓和繼發(fā)性大鼠模型，其中又以“二腎一夾”法較為經(jīng)典、應(yīng)用較為廣泛。本文即闡述了“二腎一夾”腎性高血壓大鼠（2K1C-RHR）模型建立過(guò)程中的些體會(huì)感悟。

1.器材

乙醚,七氟醚，蒸餾水，75%酒精，碘酒，青霉素G，不銹鋼U型夾，大鼠固定器，BP-6動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量?jī)x

2.方法

2.1手術(shù)過(guò)程

取體重在180~220g的健康雄性SD大鼠，術(shù)前12h禁食不禁水，在七氟醚誘導(dǎo)、乙醚麻醉下，仰臥位固定手術(shù)臺(tái)上，頭部及四肢固定，充分暴露腹部，棉花紗布及手術(shù)器械經(jīng)煮沸消毒。于大鼠左側(cè)腹部腎臟位置備皮減去毛發(fā)，先后用碘酒及75%酒精消毒皮膚，行縱向切口，長(zhǎng)2.5~3cm，用止血鉗鈍性分離暴露腎臟，在靠近腹主動(dòng)脈端用沙氏鑷分離出腎動(dòng)脈（其標(biāo)志為牽拉腎動(dòng)脈腎臟會(huì)缺血顏色變白，腎臟皺縮)，用浸有生理鹽水紗布包住腎臟，用玻璃分針小心分離動(dòng)脈，用一不銹鋼U型夾（內(nèi)徑0.2mm，厚0.5mm）環(huán)繞左腎動(dòng)脈，夾緊，造成左腎動(dòng)脈狹窄，右腎不觸及，復(fù)位腎臟，檢查有無(wú)完全缺血。關(guān)閉切口，依次縫合肌肉和皮膚，用碘酒棉球消毒并用消毒紗布進(jìn)行包扎。

2.2術(shù)后處理

術(shù)后給予相應(yīng)保溫措施，手術(shù)燈35cm照射未蘇醒麻醉大鼠30min以上，術(shù)后腹腔注射青霉素2~3萬(wàn)單位/只，此后連續(xù)三天每天一次，以避免感染。手術(shù)后動(dòng)物以1%鹽水飼喂，持續(xù)三周，再以0.5%鹽水飼喂約一周緩沖后停喂鹽水，術(shù)后禁食12h后正常飼養(yǎng)。

2.3 相關(guān)指標(biāo)測(cè)量

術(shù)后3~5天即可測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓，每周測(cè)量二次，每次測(cè)壓三次，取其平均值，≥160mmHg（21.28KPa）者可認(rèn)為是確定為兩腎一夾高血壓大鼠(2KIC—RHR)模型成功，否則為造模淘汰。

3.討論與體會(huì)

關(guān)于“二腎一夾”（2K1C-RHR）腎性高血壓大鼠模型的幾個(gè)值得注意的細(xì)節(jié)，直接關(guān)系到模型建造成功與否。

3.1 手術(shù)需嚴(yán)格消毒，否則易造成動(dòng)物感染和死亡

3.2 該模型不是很穩(wěn)定，維持時(shí)間周期不是很長(zhǎng)，血壓測(cè)量有一定波動(dòng)［2］

3.3.在分離腎動(dòng)脈操作過(guò)程中應(yīng)注意避免、保護(hù)其分支，如僅造成腎動(dòng)脈分支狹窄則不能形成預(yù)期高血壓模型效果

3.4一般采用成年大鼠，因?yàn)橛啄甏笫笊L(zhǎng)相對(duì)較為迅速，腎臟對(duì)血液需要量增加過(guò)快，容易導(dǎo)致腎動(dòng)脈狹窄后腎壞死［3］，且幼年動(dòng)物自身動(dòng)脈就細(xì)，血壓不容易升高上去達(dá)不到預(yù)期效果

3.5手術(shù)操作要求較高，手術(shù)時(shí)分離腎動(dòng)脈要靠近主動(dòng)脈端，不然會(huì)有分支、撕裂等情況導(dǎo)致造模失敗。

3.7“二腎一夾”高血壓大鼠模型造模采用乙醚吸入麻醉方法，可能出現(xiàn)并發(fā)癥，麻醉過(guò)深、呼吸暫停。搶救方法：給行人工呼吸，左手扶大鼠頭部使其后仰，左手拇指壓住大鼠左鼻孔，右手用洗耳球或20ml注射器給另一側(cè)鼻孔進(jìn)行通氣處理。

3.8腎動(dòng)脈的狹窄程度要引起相應(yīng)重視。在一定范圍內(nèi)，腎動(dòng)脈的狹窄水平與動(dòng)物血壓升高速率和程度成正比例關(guān)系。但如果腎動(dòng)脈狹窄不夠，則動(dòng)物不能形成高血壓；如果腎動(dòng)脈狹窄過(guò)度，則引起腎壞死，亦可導(dǎo)致嚴(yán)重腎功能不全造成動(dòng)物死亡。故夾閉動(dòng)脈時(shí)的程度不好把控。現(xiàn)在有諸多改良的方法多但大都不穩(wěn)定，比如腹主動(dòng)脈結(jié)扎，一腎一夾，雙腎雙夾，，要加用參附湯或糖皮質(zhì)激素等，在手術(shù)后飲食上也要給予鹽水和高脂。

參考文獻(xiàn)

［1］ 王東,蔣湘蓮,聶亞雄等.高血壓大鼠模型的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2006,14(3):271-273,276.

［2］蘇定馮. 血壓波動(dòng)性在高血壓藥物治療中的意義［J］. 世界臨床藥物,2005,10:21-23+26.

［3］ 劉守鉀.毛茛總苷對(duì)大鼠腎性高血壓的影響及有效部位研究［D］.廣東藥學(xué)院,2011.DOI:10.7666/d.d155228.