膠乳增強免疫比濁法試劑盒測定胰島素的性能評價

安徽省涇縣人民醫院（242500）郭喜

胰島素是由胰島β細胞所分泌的蛋白質類激素，是人體內唯一降低血糖的激素，同時促進糖原、脂肪、蛋白質合成。胰島素測定可以反映胰島素細胞的貯存和分泌情況，臨床常用于作為診斷糖尿病和區分糖尿病類型的最可靠方法[1][2][3]。

目前臨床實驗室常用的胰島素測定方法主要是化學發光法、ELISA法。化學發光法由于設備和試劑成本較高，臨床常作為最后確認使用，而ELISA法由于過程繁瑣，結果一般為定性，臨床使用有限。膠乳增強免疫比濁法測定胰島素是將抗體標記在納米級膠乳的表面，血清中的胰島素與試劑中的抗體在液相中相遇，即結合成抗原-抗體復合物，產生一定濁度，膠乳顆粒可以相應的增大該濁度變化。通過與相應的標準曲線做對照，可以由濁度變化計算得出血清中胰島素的濃度。筆者從準確度、精密度、線性、穩定性、抗干擾能力和相關性對美迪生物的膠乳增強免疫比濁法胰島素測定試劑盒【注冊號：浙食藥監械（準）字2012第2400072號，執行標準：YZB/浙3033-2012】進行了評價。

1 材料與方法

附表1 批內胰島素測定結果（n＝36）

附表2 批間胰島素測定結果（n＝108）

1.1 材料

1.1.1 標本來源 收集本院內分泌科住院病人EDTA抗凝血，共30份，標本在采集后2h內檢測完畢。標本于-80℃保存待用。

1.1.2 儀器、試劑和應用參數 ①檢測系統一：AXSYM雅培全自動化學發光儀及其胰島素配套試劑、校準品和質控品；②檢測系統二：BS400邁瑞全自動生化分析儀，胰島素測定試劑（膠乳增強免疫比濁法，美迪生物）、校準品和質控品；應用參數：試劑一（200μl）、試劑二（40μl）、樣本量（8μl）、主波長（600nm）、測定方法（速率法）、孵育時間（300s）、延遲時間（60s）、反應時間（120s）、反應方向（正反應）、定標方式（兩點線性）。

1.2 方法 統計學分析采用Microsoft Excel2007，SPSS13.0統計軟件。回歸分析采用Passing-Bablok回歸，回歸線性檢測采用Cusum方法檢測，P＜0.05表示線性回歸偏倚有統計學意義。相關性分析采用Pearson相關，P＜0.05表示具有統計學意義。

2 實驗與結果

附圖1 胰島素線性試驗圖

附圖2 美迪生物和雅培化學發光的結果比較

2.1 準確度 采用中國藥品生物制品檢定所人單峰胰島素對照品（批號：0526-9501）配置成四個濃度標準（S12.5μIU/ml、S210μIU/ml、S350μIU/ml、S4100μIU/ml），采用胰島素膠乳增強免疫比濁法測定試劑盒在BS400全自動生化分析儀上測定三次，結果均在標示值的±10%內，符合標準要求。

2.2 精密度 隨機選取胰島素水平為≤3μIU/ml（A1）、3～23μIU/ml（A2）、23～50μIU/ml（A3）、≥100μIU/ml（A4）的4個樣本，分別混勻后分裝于子彈頭，于-80℃保存。測定時重新溶解測定，上、下午各檢驗3次，三批不同試劑連續檢測6d。批內結果見附表1，批間結果見附表2。

2.3 線性 選取兩份足量的濃度分別為0.31、108.62μIU/ml血清樣本，按以下表格比例混合后用以上試劑盒重復測定三次，取平均值為實測值為Y，理論值為X，用SPSS13.0軟件擬合方程，結果Y＝0.9771X-0.2012，R2＝0.9993。見附圖1。

2.4 干擾試驗 取一份胰島素濃度11.2μIU/ml的血清樣本，分別加入高濃度的膽紅素、血紅蛋白脂濁、類風濕因子以獲得干擾樣本，用同樣的方法加入0.9%生理鹽水為對照樣品，每個樣品按照隨機次序測定10次，得出干擾樣品和對照樣品各自的X并計算干擾率。實驗結果表明，在膽紅素≤20mg/dl、血紅蛋白≤450mg/dl、脂濁≤1550、類風濕因子≤450IU/ml時，測定偏差控制在5%，對本檢測方法無明顯干擾。

2.5 回收試驗 在胰島素濃度為11.2μIU/ml和58.6uIU/ml的2份血清樣本中，分別加入47.4μIU/ml的標準品，其回收率為96.6%～98.4%，平均為97.5%。

2.6 方法學比較 隨機取本院內分泌科住院病人20例血清，分別用美迪生物和雅培化學發光axsym的胰島素測定試劑盒同時測定，測定順序1-10，10-1，數據見附圖2。相關方程為Y＝0.982X＋3.2655，相關系數（R2）＝0.991，表明美迪生物和雅培化學發光的結果之間有較高的相關性。

2.7 參考范圍 體檢無肝、膽、胰、腎、肺和心腦血管疾病，血清血糖功能試驗正常的健康成人，空腹采血，置不含添加劑的潔凈玻管內，待血液凝固分離血清，剔除溶血和脂濁血清，2h內完成測定。共獲得血清200份，每份血清測定一次，剔除離群值1份，剩余199份（男101、女98）測定結果用百分位數法求得P2.5～P97.5參考范圍為：血清3.0～23.0μIU/mL。

3 討論

血清胰島素測定方法可以分為兩類：非免疫分析法和免疫分析法。非免疫分析法包括同位素稀釋法、高效液相色譜法等；免疫分析法包括放射免疫法、酶聯免疫法、化學發光免疫法和膠乳增強免疫比濁法。特別是放射免疫法和化學發光免疫法已經應用較為成熟，但都需要較為昂貴的放射免疫和化學發光設備。

美迪生物科技有限公司開發的膠乳增強免疫比濁法血清胰島素測定試劑盒，由于采用高純單克隆抗體作為標記原料，與胰島素原幾乎沒有交叉反應，測定結果更準確，且還適合醫院現有各種全自動生化分析儀，測定過程簡單快捷，只需要10min，重復性好，值得在基層醫院推廣使用。