生血寶合劑中二苯乙烯苷的含量測定

高艷彬

(陜西省康復醫院，陜西 西安 710038)

貧血屬祖國醫學的“血虛”“血枯”“血證”“虛勞”“虛損”等范疇[1]。生血寶是我國著名中醫經驗方，臨床應用30余年。生血寶合劑由制何首烏、黃芪、女貞子、狗脊、白芍、桑葚、墨旱蓮7味藥材組方，功能養肝腎、益氣血，用于惡性腫瘤放射治療及化學治療所致白細胞減少及神疲乏力、腰膝酸軟、頭暈耳鳴、心悸、氣短、失眠、咽干、納差食少等癥。生血寶可促進鐵的吸收利用、提高全血鐵的含量，適用于治療缺鐵性貧血以及放射治療、化學治療所致白細胞減少[2－4]。何首烏為蓼科植物何首烏 Polygonum multiflorum Thumb．的干燥塊根[5]，秋、冬二季葉枯萎時采挖，削去兩端，洗凈，個大的切成塊，干燥。制何首烏為何首烏的炮制加工品[6]，性味苦、甘、澀，溫，歸肝、心、腎經，功能補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨[7]，用于血虛萎黃、眩暈耳鳴、須發早白、腰膝酸軟、肢體麻木、崩漏帶下、久瘧體虛，以及高血脂。本試驗中，針對生血寶合劑中君藥制何首烏的主要成分二苯乙烯苷(2，3，5，4’－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷)進行含量測定，為制訂其相應的質量標準提供實驗室依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters alliance高效液相色譜儀;紫外檢測器。2，3，5，4’－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷(二苯乙烯苷)對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110825－200578);乙腈(色譜純)，乙醇(分析純);生血寶合劑(清華德人西安幸福制藥有限公司)。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Suntek Kromasil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 水(20 ∶80)，流速:1．0 mL/min;檢測波長:320 nm;進樣量:10 μL。理論板數不低于2 000。

2．2 溶液制備

由于樣品為合劑，是由7味藥材加水煎煮制成，考慮其制法，故對直接定容和超聲提取時間進行了考察，結果表明超聲提取時間與直接定容對含量影響不大(見表1)，考慮含量值及試驗操作的簡便性確定提取方法。精密量取樣品2 mL，加稀乙醇定容至50 mL，搖勻，上清液濾過，取續濾液，即得供試品溶液。精密稱取二苯乙烯苷對照品5．46 mg和6．25 mg，分別置100 mL容量瓶中，加稀乙醇使溶解質，定容，作為對照品溶液(質量濃度分別為54．6和62．5 μg/mL)。取陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

表1 樣品提取方法考察結果

2．3 方法學考察

專屬性試驗:取2．2項下3種溶液，依法進樣測定。結果陰性對照品溶液色譜中，在與對照品及供試品溶液色譜二苯乙烯苷相同保留時間處無相應色譜峰，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:分別精密吸取對照品溶液(54．6 μg/mL)1，2，5，10，15，20 μL，按擬訂的色譜條件進樣測定，以對照品進樣量(μg)為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為 Y=3 702 020．797 8 X －10 403．714 1，R2=0．999 9(n=6)。結果表明，二苯乙烯苷進樣量在 0．054 60～1．092 00 μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗:取對照品溶液和供試品溶液，分別精密吸取10 μL，連續進樣6次，按擬訂色譜條件進行測定。結果對照品溶液和供試品溶液中二苯乙烯苷色譜峰峰面積的 RSD分別為0．41%和1．06%(n=6)，表明對照品溶液和供試品溶液進樣精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品(批號為110303)溶液，分別在制備 0，2，4，8，12，24 h 時依法進樣測定。結果樣品峰面積分別為1 999 463，1 991 690，1 983 917，1 977 021，1 990 763，1 994 202，RSD=0．8%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

重復性試驗:對同一批樣品(批號為110303)取樣6份，依法制備供試品溶液并進樣測定。結果二苯乙烯苷平均含量為1．38 g/L，RSD=0．8%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的同一批樣品(批號為110303)1 mL共6份，分別精密加入質量濃度為0．254 8 g/L的對照品溶液各5 mL，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，并按擬訂的色譜條件進樣測定含量，計算回收率。結果見表2。

2．4 樣品含量測定

取10批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定含量。結果見表3。

3 討論

取以流動相配制的對照品溶液，以流動相為空白，在200～400 nm波長范圍內紫外掃描，結果二苯乙烯苷在318．4 nm波長處有最大吸收，故確定檢測波長為320 nm[8]。

表2 二苯乙烯苷加樣回收試驗結果(n=6)

表3 樣品中何首烏苷含量測定結果(n=10)

采用2010年版《中國藥典(一部)》中二苯乙烯苷的流動相為乙腈－水(25∶75)[9]進行試驗，結果在5 min之內出峰。由于出峰時間過早，故增大流動相的極性、減小乙腈的比例，最終將流動相定為乙腈－水(20∶80)。

生血寶合劑中制何首烏為君藥，具有補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨[10]等功效。因此選擇何首烏中具有特征性的成分何首烏苷作為檢測指標，同時采用具有較高專屬性的高效液相色譜法作為檢測方法，對該產品的質量控制具有很好現實意義。

采用高效液相色譜法測生血寶合劑中二苯乙烯苷的含量，方法簡便、準確、干擾性小、重復性好，回收率也較高，所得結果比較準確，可作為藥品標準提高的檢測方法。

[1]張登本．中醫學基礎[M]．北京:中國中醫藥出版社，2003:48．

[2]高順國，張俊偉，邱賽紅，等．生血寶顆粒對缺鐵性貧血大鼠模型鐵吸收利用影響的實驗研究[J]．上海中醫藥雜志，2005(8):56－58．

[3]羅 珊，漆蘭萍，李若平．生血寶顆粒劑治療放療、化療所致白細胞減少癥[J]．湖南中醫雜志，1994(8):23－24．

[4]吳青和．中藥藥理學[M]．北京:高等教育出版社，2007:177．

[5]康廷國．中藥鑒定學[M]．第2版．北京:中國中醫藥出版社，2007:73．

[6]龔千鋒．中藥炮制學[M]．第2版．北京:中國中醫藥出版社，2007:275．

[7]高雪敏．中藥學[M]．北京:中國中醫藥出版社，2007:225．

[8]蔡寶昌．中藥制劑分析[M]．北京:高等教育出版社，2007:90．

[9]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:164．

[10]孫晉苓，黃曉蘭，吳惠勤，等．何首烏中順式和反式－二苯乙烯苷的HPLC/DAD/MS測定及其光穩定性考察[J]．中國藥學雜志，2009，44(7):541－544．