抗感解毒泡騰片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

柳瑩　蔡喜生

摘 要：目的 建立抗感解毒泡騰片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高藥品的質(zhì)量控制 方法 采用反相高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷的含量，選用依利特C18（4.6×250mm，5?m）色譜柱，流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（42：58：0.3）為流動(dòng)相，流速：1.0ml﹒min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：276nm。結(jié)果 黃芩苷在0.1044～0.9396μg﹒mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性，r=1.0000，方法的平均回收率為98.93%，RSD為0.32%。同時(shí)用薄層色譜法對(duì)梔子和板藍(lán)根進(jìn)行定性鑒別。結(jié)論 本法準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，為藥品的質(zhì)量控制提供更有效的措施。

關(guān)鍵詞：抗感解毒泡騰片 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R92 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)：1674-098X（2014）04（c）-0225-02

抗感解毒泡騰片是由葛根、梔子、黃芩、菊花、板藍(lán)根、茵陳等組成的復(fù)方中藥制劑，同時(shí)也是一款新型的劑型（遇水可產(chǎn)生氣體而呈泡騰狀的片劑）。黃芩為該處方中的君藥。黃芩為唇形科植物黃芩的干燥根，具有清熱燥濕，瀉火解毒之功效。與本品的功能主治密切相關(guān)，因此，以黃芩苷作為指標(biāo)性成分，控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，具有合理性。同時(shí)梔子和板藍(lán)根具有清熱解毒，涼血利咽、瀉火除煩等功效，在此處方中有著不可忽視的作用，所以我們參考有關(guān)資料[1～4]對(duì)梔子、板藍(lán)根擬定了薄層色譜鑒別方法；經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，表明所建立的方法專屬性強(qiáng)、結(jié)果穩(wěn)定可靠，操作簡(jiǎn)便可行，重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀，黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110842-201106，規(guī)格：供含量測(cè)定用）、梔子苷對(duì)照品（批號(hào)：110752-200912）、板藍(lán)根對(duì)照品藥材 （批號(hào)：110842-201106，）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；抗感解毒泡騰片（吉林俊宏藥業(yè)有限公司）；陰性藥品自制。甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 梔子的薄層色譜鑒別

取本品適量，研細(xì)，稱取8 g，加甲醇30 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，加于中性氧化鋁柱（100～200目，3g內(nèi)徑1 cm）上，用甲醇20mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取除梔子外的全部樣品成分，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5：5：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾。（見圖1）

2.2 板藍(lán)根的薄層色譜鑒別

取本品適量，研細(xì)，稱取12 g，加75%乙醇50 mL，加熱回流30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?%氫氧化鈉溶液10 mL使溶解，濾過(guò)，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用醋酸乙酯振搖提取3次，每次10 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取板藍(lán)根對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取除板藍(lán)根外的全部樣品成分，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液2 μL，對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照溶液各5～10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40：1：0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾。（見圖2）

3 含量測(cè)定的方法學(xué)考察

3.1 色譜條件

色譜柱：依利特C18（4.6×250 mm，5 ?m）；甲醇-水-磷酸（42：58：0.3）為流動(dòng)相；流速：1.0 mL﹒min-1柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；進(jìn)樣量：10 ?L。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。

3.2.2 供試品溶液的制備

取本品適量，研碎，精密稱取0.65 g，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理30 min，取出，放冷，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，取上清液，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾夜，即得。

3.2.3 陰性對(duì)照的制備

按處方比例配成不含黃芩的全部藥材，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

3.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 ?L，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在相同的色譜條件下，供試品中黃芩苷峰與各相鄰成分的峰能有較好的分離效果，且陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾。（見圖3）

3.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液2、6、10、14、18μL測(cè)定，注入液相色譜儀，平行進(jìn)樣2次，以對(duì)照品溶液進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：Y=-3618.3+2128518.678X （r=1.0000），結(jié)果表明黃芩苷0.1044～0.9396 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)endprint

精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)5次，測(cè)定其色譜峰面積值RSD為0.2%結(jié)果表明儀器本身的精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h，同法測(cè)定含量，RSD為0.2% 結(jié)果表明12 h內(nèi)供試品溶液中黃芩苷成分基本穩(wěn)定不變。

3.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品，取樣5份，依“3.2.2”項(xiàng)下方操作，制備供試品溶液用外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷含量（mg/片），測(cè)得平均含量為20.0 mg/片，RSD為1.0%，結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性。

3.8 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品（批號(hào)：20050401含量20.0 mg/片）0.34g 6份，分別精密加入一定量的對(duì)照品溶液（52.2 μg/ml）5 ml，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

3.9 樣品測(cè)定結(jié)果及限度

依3.2.2 項(xiàng)下方法測(cè)定三批樣品，結(jié)果見表2。

4 結(jié)語(yǔ)

（1）茵陳為菊科植物濱蒿或茵陳蒿的干燥地上部分，主要含有綠原酸和咖啡酸等，我們對(duì)茵陳擬定了薄層色譜鑒別方法，以茵陳對(duì)照藥材、綠原酸對(duì)照品作對(duì)照，效果均不理想，試驗(yàn)方法還有待進(jìn)一步研究，故暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

（2）對(duì)展開劑的選擇：板藍(lán)根的薄層色譜鑒別中，我們參考文獻(xiàn)[4]對(duì)兩種展開劑進(jìn)行考察，①苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）②苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40∶1∶0.5）結(jié)果顯示，后者分離清晰且顯而易見，故展開劑②納入正文。

（3）試驗(yàn)研究中，參考相關(guān)文獻(xiàn)[5]，①提取試劑的選擇：用甲醇、50%甲醇為溶媒制備供試品溶液，結(jié)果表明，用50%甲醇提取黃芩苷測(cè)定結(jié)果偏高，且重現(xiàn)性好，故溶媒選用50%甲醇；②提取方法的選擇：供試品測(cè)定中，同時(shí)選用超聲提取30 min和回流30 min，結(jié)果顯示無(wú)明顯差別，故選用超聲提取簡(jiǎn)便易行；③流動(dòng)相的選擇：我們對(duì)甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3），甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.3）進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果，以甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3）為流動(dòng)相分離效果較好，保留時(shí)間適度，因此，確定其為本法的流動(dòng)相。

（4）此外，本試驗(yàn)還按照2010年版《中國(guó)藥典》（一部） 附錄片劑項(xiàng)下規(guī)定，進(jìn)行了重量差異、崩解時(shí)限、發(fā)泡量及微生物限度等檢測(cè)，均符合規(guī)定。

（5）以TLC、HPLC對(duì)抗感解毒泡騰片進(jìn)行質(zhì)量控制，能更有效的保證產(chǎn)品的安全性、有效性和可控性。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典[M].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 肖飛，陳樺，李其鳳，等.抗病毒分散片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21（21）.

[3] WS-056（Z-056）-2001（Z）抗感解毒膠囊[S].國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn).

[4] 李亞玲，葉云，余德智.蒲地蘭消炎口服液中板藍(lán)根等4味藥材薄層色譜鑒別[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（6）.

[5] 陳珂，宋嵐，鄺明，等.高效液相色譜法測(cè)定杏杷止咳顆粒中黃芩苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20（1）.endprint

精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)5次，測(cè)定其色譜峰面積值RSD為0.2%結(jié)果表明儀器本身的精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h，同法測(cè)定含量，RSD為0.2% 結(jié)果表明12 h內(nèi)供試品溶液中黃芩苷成分基本穩(wěn)定不變。

3.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品，取樣5份，依“3.2.2”項(xiàng)下方操作，制備供試品溶液用外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷含量（mg/片），測(cè)得平均含量為20.0 mg/片，RSD為1.0%，結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性。

3.8 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品（批號(hào)：20050401含量20.0 mg/片）0.34g 6份，分別精密加入一定量的對(duì)照品溶液（52.2 μg/ml）5 ml，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

3.9 樣品測(cè)定結(jié)果及限度

依3.2.2 項(xiàng)下方法測(cè)定三批樣品，結(jié)果見表2。

4 結(jié)語(yǔ)

（1）茵陳為菊科植物濱蒿或茵陳蒿的干燥地上部分，主要含有綠原酸和咖啡酸等，我們對(duì)茵陳擬定了薄層色譜鑒別方法，以茵陳對(duì)照藥材、綠原酸對(duì)照品作對(duì)照，效果均不理想，試驗(yàn)方法還有待進(jìn)一步研究，故暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

（2）對(duì)展開劑的選擇：板藍(lán)根的薄層色譜鑒別中，我們參考文獻(xiàn)[4]對(duì)兩種展開劑進(jìn)行考察，①苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）②苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40∶1∶0.5）結(jié)果顯示，后者分離清晰且顯而易見，故展開劑②納入正文。

（3）試驗(yàn)研究中，參考相關(guān)文獻(xiàn)[5]，①提取試劑的選擇：用甲醇、50%甲醇為溶媒制備供試品溶液，結(jié)果表明，用50%甲醇提取黃芩苷測(cè)定結(jié)果偏高，且重現(xiàn)性好，故溶媒選用50%甲醇；②提取方法的選擇：供試品測(cè)定中，同時(shí)選用超聲提取30 min和回流30 min，結(jié)果顯示無(wú)明顯差別，故選用超聲提取簡(jiǎn)便易行；③流動(dòng)相的選擇：我們對(duì)甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3），甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.3）進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果，以甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3）為流動(dòng)相分離效果較好，保留時(shí)間適度，因此，確定其為本法的流動(dòng)相。

（4）此外，本試驗(yàn)還按照2010年版《中國(guó)藥典》（一部） 附錄片劑項(xiàng)下規(guī)定，進(jìn)行了重量差異、崩解時(shí)限、發(fā)泡量及微生物限度等檢測(cè)，均符合規(guī)定。

（5）以TLC、HPLC對(duì)抗感解毒泡騰片進(jìn)行質(zhì)量控制，能更有效的保證產(chǎn)品的安全性、有效性和可控性。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典[M].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 肖飛，陳樺，李其鳳，等.抗病毒分散片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21（21）.

[3] WS-056（Z-056）-2001（Z）抗感解毒膠囊[S].國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn).

[4] 李亞玲，葉云，余德智.蒲地蘭消炎口服液中板藍(lán)根等4味藥材薄層色譜鑒別[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（6）.

[5] 陳珂，宋嵐，鄺明，等.高效液相色譜法測(cè)定杏杷止咳顆粒中黃芩苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20（1）.endprint

精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)5次，測(cè)定其色譜峰面積值RSD為0.2%結(jié)果表明儀器本身的精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h，同法測(cè)定含量，RSD為0.2% 結(jié)果表明12 h內(nèi)供試品溶液中黃芩苷成分基本穩(wěn)定不變。

3.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品，取樣5份，依“3.2.2”項(xiàng)下方操作，制備供試品溶液用外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷含量（mg/片），測(cè)得平均含量為20.0 mg/片，RSD為1.0%，結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性。

3.8 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品（批號(hào)：20050401含量20.0 mg/片）0.34g 6份，分別精密加入一定量的對(duì)照品溶液（52.2 μg/ml）5 ml，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

3.9 樣品測(cè)定結(jié)果及限度

依3.2.2 項(xiàng)下方法測(cè)定三批樣品，結(jié)果見表2。

4 結(jié)語(yǔ)

（1）茵陳為菊科植物濱蒿或茵陳蒿的干燥地上部分，主要含有綠原酸和咖啡酸等，我們對(duì)茵陳擬定了薄層色譜鑒別方法，以茵陳對(duì)照藥材、綠原酸對(duì)照品作對(duì)照，效果均不理想，試驗(yàn)方法還有待進(jìn)一步研究，故暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

（2）對(duì)展開劑的選擇：板藍(lán)根的薄層色譜鑒別中，我們參考文獻(xiàn)[4]對(duì)兩種展開劑進(jìn)行考察，①苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）②苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40∶1∶0.5）結(jié)果顯示，后者分離清晰且顯而易見，故展開劑②納入正文。

（3）試驗(yàn)研究中，參考相關(guān)文獻(xiàn)[5]，①提取試劑的選擇：用甲醇、50%甲醇為溶媒制備供試品溶液，結(jié)果表明，用50%甲醇提取黃芩苷測(cè)定結(jié)果偏高，且重現(xiàn)性好，故溶媒選用50%甲醇；②提取方法的選擇：供試品測(cè)定中，同時(shí)選用超聲提取30 min和回流30 min，結(jié)果顯示無(wú)明顯差別，故選用超聲提取簡(jiǎn)便易行；③流動(dòng)相的選擇：我們對(duì)甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3），甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.3）進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果，以甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3）為流動(dòng)相分離效果較好，保留時(shí)間適度，因此，確定其為本法的流動(dòng)相。

（4）此外，本試驗(yàn)還按照2010年版《中國(guó)藥典》（一部） 附錄片劑項(xiàng)下規(guī)定，進(jìn)行了重量差異、崩解時(shí)限、發(fā)泡量及微生物限度等檢測(cè)，均符合規(guī)定。

（5）以TLC、HPLC對(duì)抗感解毒泡騰片進(jìn)行質(zhì)量控制，能更有效的保證產(chǎn)品的安全性、有效性和可控性。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典[M].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 肖飛，陳樺，李其鳳，等.抗病毒分散片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21（21）.

[3] WS-056（Z-056）-2001（Z）抗感解毒膠囊[S].國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn).

[4] 李亞玲，葉云，余德智.蒲地蘭消炎口服液中板藍(lán)根等4味藥材薄層色譜鑒別[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（6）.

[5] 陳珂，宋嵐，鄺明，等.高效液相色譜法測(cè)定杏杷止咳顆粒中黃芩苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20（1）.endprint