視網膜光損傷中TIMP-1、ERK-1的表達及促紅細胞生成素對其影響△

王穎立 牛膺筠

近年的研究發(fā)現年齡相關性黃斑變性(age-related macular degeneration，AMD)的病理改變［1］與脈絡膜和玻璃膜上的基質金屬蛋白酶(metrix metalloproteinases，MMPs)和基質金屬蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)水平的改變密切相關［2］。

眾所周知，視網膜光損傷是研究視網膜變性類疾病(例如AMD)的良好動物模型［3］。因此本研究通過建立小鼠光損傷動物模型，著重觀察視網膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)細胞中金屬蛋白酶組織抑制劑-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)及細胞外信號調節(jié)激酶蛋白1(extracellular regulated proteinkinase-1，ERK-1)表達的變化，同時應用重組人促紅細胞生成素(recombination human erythropoietin，rhEPO)進行小鼠腹腔注射，檢測其產生的影響，以進一步完善我們對EPO視網膜神經保護作用的認識，從而為AMD的治療尋求新的思路和方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物與分組 健康成年近交系 BALB/c小鼠52只(104眼)，4周齡，體質量18 g左右，購自山東醫(yī)科大學動物實驗中心，雄性，動物基因背景為Rpe65 450Leu450，對光損傷具有高度敏感性。嚴格遵守SPF級小鼠喂養(yǎng)條件。實驗動物及實驗使用條件符合國家科學技術委員會的《實驗動物管理條例》。將動物隨機分為單純光照組(24只)、EPO處理組(24只)和正常對照組(4只)。其中前兩組按光照后處死時間的不同又分為6 h、12 h、36 h、72 h、96 h和7 d 6個亞組，每個亞組各4只8眼。

1.1.2 主要試劑 TIMP-1兔 IgG多抗、ERK-1羊IgG多抗(美國 Santa Cruz公司)，封閉血清、復合消化液、PV6001免疫組織化學試劑盒、DAB顯色試劑盒、APES黏片劑(北京中山生物技術有限公司)，生物素化兔抗山羊抗體(武漢博士德生物技術有限公司)，3000 U·mL－1rhEPO(沈陽三生制藥公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗前準備 將單純光照組和EPO處理組小鼠在12 h明/12 h暗的循環(huán)光照環(huán)境中喂養(yǎng)10 d，暗適應10 h。

1.2.2 動……