極差法比對驗證方案在尿沉渣分析儀檢測紅細胞比對中的應用

王柏山，劉鐵峰，那軒與，劉珊珊（.遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院臨床檢驗中心，沈陽003；沈陽醫(yī)學院醫(yī)學檢驗系，沈陽 0000）

同一實驗室內(nèi)不同分析儀器檢測相同項目的結(jié)果應具有可比性是實驗室質(zhì)量管理的重要內(nèi)容，《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》（ISO15189：2012）對此也有明確要求。UF－1000i尿沉渣分析儀（簡稱UF－1000i分析儀）檢測尿液中的紅細胞具有應用頻率高、結(jié)果變化大等特點，因此確保儀器間檢測結(jié)果的可比性尤為重要。傳統(tǒng)的可比性驗證試驗方案通常參照美國臨床和實驗室標準化協(xié)會（CLSI）制訂的《用患者樣本進行方法學對比及偏倚評估》（EP9－A2指南）。采用該方案進行可比性驗證，需要大量的標本，且操作繁瑣，在實際工作中難以開展。本研究根據(jù)CLSI制訂的C54－A 方案［1］和中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《WS／T407－2012醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)定量檢驗結(jié)果的可比性驗證指南》［2］，結(jié)合尿沉渣分析的特點，以檢測尿液中的紅細胞為例，通過極差法比對驗證方案對3臺UF－1000i分析儀進行了比對驗證。現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑3臺UF－1000i分析儀（日本Sysmex 公司），包括分析儀A、B、C，儀器序列號分別為14828、13243和13255。分析儀原裝配套試劑和質(zhì)控品（批號YS3023）。分析儀A 參加了遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院與中國醫(yī)科大學附屬一院相同品牌尿沉渣分析儀的實驗室室間比對分析，并且比對通過。

1.2 方法

1.2.1 確定檢測結(jié)果的不精密度對3臺分析儀連續(xù)6個月內(nèi)檢測室內(nèi)質(zhì)控品紅細胞項目的累積不精密度（以變異系數(shù)表示，CV）進行比較，計算最大CV 與最小CV 的比值，若比值小于2，則計算分析儀的合成CV（CV合成），CV合成＝［（CVA2＋CVB2＋CVC2）／3］1／2，并繼續(xù)本驗證試驗；若比值大于或等于2，則采用EP9－A2方案。

1.2.2 臨床標本的選擇計算3臺分析儀連續(xù)6個月檢測質(zhì)控品紅細胞項目的結(jié)果總均值（m質(zhì)控總），m質(zhì)控總＝（m質(zhì)控A＋m質(zhì)控B＋m質(zhì)控C）／3，m質(zhì)控A、m質(zhì)控B、m質(zhì)控C分別為分析儀A、B、C 連續(xù)6個月檢測質(zhì)控品紅細胞項目的結(jié)果均值。檢測以m質(zhì)控總×（1±20%）作為比對試驗標本的濃度范圍。從遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院臨床檢驗中心尿常規(guī)分析標本中選擇符合濃度范圍要求的標本。排除存在下列情況之一的標本：外觀混濁，pH值小于5.5或大于7.0，尿比密檢測結(jié)果小于1.015或大于1.025，顯微鏡鏡檢可見結(jié)晶和精子等可能影響紅細胞檢測的成分。

1.2.3 可接受判斷標準根據(jù)儀器、試劑說明書，結(jié)合相關(guān)文獻報道，以比對偏差范圍－10%～＋10%作為比對結(jié)果是否可接受的判斷標準［3］。比對偏差＝極差／比對標本檢測結(jié)果總均值（m標本總）×100%，m標本總＝（m標本A＋m標本B＋m標本C）／3，m標本A、m標本B、m標本C分別為分析儀A、B、C 檢測比對試驗標本紅細胞項目的結(jié)果均值，極差＝3臺分析儀檢測比對試驗標本結(jié)果均值最高值－3臺分析儀檢測比對試驗標本結(jié)果均值最低值。

1.3 統(tǒng)計學處理采用Microsoft Excel 2010軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果

2.1 不精密度估計3臺分析儀連續(xù)6個月室內(nèi)質(zhì)控品紅細胞項目檢測結(jié)果的最大CV 和最小CV 比值小于2，計算2個水平質(zhì)控品的CV合成和m質(zhì)控總，結(jié)果見表1。

表1 6個月室內(nèi)質(zhì)控品紅細胞項目檢測結(jié)果均值及CV

2.2 比對試驗標本的選擇3臺分析儀連續(xù)6個月檢測低值質(zhì)控品紅細胞項目的m質(zhì)控總為41.17個／微升，故低值比對試驗標本（標本1）選擇的濃度范圍為（32.94～49.40）個／微升。3臺分析儀連續(xù)6個月檢測高值質(zhì)控品紅細胞項目的m質(zhì)控總為189.42個／微升，故高值比對試驗標本（標本2）選擇的濃度范圍為（151.54～227.30）個／微升。本研究比對試驗當天選擇的標本1紅細胞濃度為33.5個／微升，標本2紅細胞濃度為180.5個／微升。

2.3 對試驗標本重復檢測次數(shù)的確定3臺分析儀連續(xù)6個月檢測低值質(zhì)控品紅細胞項目的CV合成為4.26%，介于臨界值表（見表2）CV合成范圍4%～5%，比對結(jié)果可接受判斷標準，即10%位于重復次數(shù)范圍3～4，即7.90%～10.02%，故本研究將標本1的重復檢測數(shù)定為4次。采用相同方法確定標本2重復次數(shù)為3次。

2.4 比對驗證數(shù)據(jù)根據(jù)所確定的比對試驗標本檢測次數(shù)，按照實驗室標準操作規(guī)程，對標本1、標本2進行檢測，結(jié)果見表3。

2.5 比對數(shù)據(jù)分析標本1及標本2檢測結(jié)果的比對偏差均小于10%，3臺尿沉渣分析儀比對驗證結(jié)果通過。見表4。

表2 確定比對試驗標本重復檢測次數(shù)的臨界值（%）

表3 比對試驗標本紅細胞檢測結(jié)果（個／微升）

表4 3臺尿沉渣分析儀比對數(shù)據(jù)分析結(jié)果

3 討論

以往進行實驗室內(nèi)不同分析系統(tǒng)檢測同一項目比對驗證通常采用EP9－A2方案。根據(jù)EP9－A2方案的要求，進行多個分析系統(tǒng)間的比對，需首先確定一個標準系統(tǒng)，然后采用試驗系統(tǒng)與標準系統(tǒng)對同一批標本進行檢測，并以結(jié)果偏倚程度評價試驗系統(tǒng)與標準系統(tǒng)檢測結(jié)果是否具有可比性。在采用EP9－A2方案進行分析系統(tǒng)比對時，需要選擇至少8例符合條件的標本，并采用不同分析系統(tǒng)每天檢測16次，連續(xù)檢測5d。在實際操作過程中，同時找到符合條件的8例標本通常較為困難，且比對試驗過程中的檢測次數(shù)較多、操作繁瑣。本研究則采用中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《WS／T407－2012醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)定量檢驗結(jié)果的可比性驗證指南》方案進行不同尿沉渣分析儀的比對研究。采用該方案進行分析系統(tǒng)比對，需要的標本數(shù)量少，操作簡單。在本次比對試驗涉及的3臺尿沉渣分析儀中，分析儀A 參與了遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院與中國醫(yī)科大學附屬一院開展的實驗室室間比對分析，并且比對通過，保證了比對驗證結(jié)果的準確性。因此，本研究采用的比對驗證方案適用于尿沉渣分析儀的比對驗證工作。尿沉渣分析儀檢測紅細胞、白細胞、管型、上皮細胞和細菌等項目時，受到的影響因素較多，檢測結(jié)果波動較大，因此需要做好不同分析系統(tǒng)間的比對工作。采用這種比對方案可適當增加比對頻率。中國合格評定國家認可委員會文件《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在體液學檢驗領(lǐng)域的應用說明》規(guī)定至少6個月比對1次［4］，采用本研究比對方案則可將比對頻率增加至每個月比對1次。比對頻率的增加有助于及時發(fā)現(xiàn)不同分析系統(tǒng)間檢測結(jié)果的差異，提高檢驗質(zhì)量整體管理水平。

本研究采用的尿沉渣分析儀比對驗證方案與其他文獻報道的生化檢驗項目或全血細胞分析定量檢測項目比對驗證方案存在一定的差異［5－6］，主要體現(xiàn)在確定標本選擇標準和比對結(jié)果可接受標準方面。在尿沉渣分析儀紅細胞檢測結(jié)果比對驗證試驗過程中應注意如下幾點：（1）由于影響尿沉渣分析儀檢測紅細胞的因素較多，因此在比對試驗標本的選擇方面，應排除外觀混濁、pH值小于5.5或大于7.0、尿比密小于1.015或大于1.025，以及顯微鏡檢查可見結(jié)晶、精子等成分的標本［7］。（2）在確定比對試驗標本后，應在1h內(nèi)完成檢測，標本放置時間過長極易導致檢測結(jié)果誤差。（3）通常可根據(jù)比對試驗標本重復檢測次數(shù)臨界值表確定比對試驗標本檢測次數(shù)，但本著重復次數(shù)越多，越能反映尿沉渣分析儀總體水平的原則，應采用重復次數(shù)較多的數(shù)值。（4）不建議對不同品牌尿沉渣分析儀進行比對驗證，特別是采用不同檢測原理的尿沉渣分析儀。

［1］Clinical and Laboratory Standards Institute.C54－A Verification of comparability of patient results within one health care system.Approved Guideline［S］.Wayne，PA USA：CLSI，2008.

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部.WS／T407－2012醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)定量檢驗結(jié)果的可比性驗證指南［S］.北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2013.

［3］潘瑩，田瑤.Sysmes UF－1000i在尿液檢測中的性能評價［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2011，26（6）：130－132.

［4］中國合格評定國家認可委員會.醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在體液學檢驗領(lǐng)域的應用說明［S］.北京：中國合格評定國家認可委員會，2012.

［5］趙海建，王萌，張傳寶，等.同一醫(yī)院內(nèi)血清葡萄糖在兩臺不同檢測系統(tǒng)上可比性驗證［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2013，28（3）：158－162.

［6］楊葉子，李俊立.用極差檢驗方案驗證3臺血細胞分析系統(tǒng)血小板計數(shù)的可比性［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2013，34（20）：2741－2742.

［7］孟艷平，張生，曹興華.UF1000尿沉渣全自動流式細胞儀誤差研究［J］.中國實用醫(yī)藥，2013，8（23）：253－254.