榕樹須總黃酮的抗血栓作用

陳敬民等

摘要：目的評價榕樹須總黃酮的抗血栓作用。方法采用小鼠腦偏癱、電刺激致大鼠血栓模型等試驗方法，測定榕樹須總黃酮對小鼠腦血栓的保護率、大鼠血栓形成時間；采用腎上腺素加冰浴致小鼠血瘀模型觀察榕樹須總黃酮對凝血酶時間及纖維蛋白原時間的影響。結(jié)果榕樹須總黃酮227 g生藥/kg能明顯促進偏癱小鼠恢復(fù)（P<005），113、227 g/kg顯著減緩電刺激大鼠的血管栓塞（P<0001），并延長寒凝血瘀小鼠的凝血酶時間（P<0001、P<001）及纖維蛋白原時間（P<001、P<005）。結(jié)論榕樹須總黃酮具有較好的抗血栓及改善血瘀小鼠凝血功能的作用。

關(guān)鍵詞：榕樹須；抗血栓；凝血酶時間；纖維蛋白原時間

中圖分類號：R2855文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）10-0069-02

【Abstract】Objective：To evaluate the antithrombotic effect of Ficus Microcarpa total flavonoids. Methods：Brain paralysis model and electrical stimulation-induced rat thrombosis models were used to measure the protection rate of Ficus Microcarpa total flavonoids against the cerebral thrombosis of mice and the thrombosis time of rats. Adrenaline plus ice bath-induced mice stasis model was used to observe the effect of Ficus Microcarpa total flavonoids on their thromboplastin time and fibrinogen time. Results：22.7g crude drug/kg of Ficus Microcarpa total flavonoids could significantly improve the recovery of hemiplegia mice（P<0.05）and 11.3 and 22.7g/kg significantly slowed rat vascular thrombosis caused by electrical stimulation（P<0.001），and extend the thrombin time（P<0.001，P<0.01）and the fibrinogen time（P<0.01，P<0.05）of long cold coagulation and blood stasis mice. Conclusion：Ficus Microcarpa total flavonoids have better antithrombotic effect and can improve the blood stasis function of rats.

【Key words】Ficus Microcarpa，antithrombus，thrombin time，fibrinogen time

榕樹須是?？崎艑僦参镄∪~榕（Ficus microarpa Linnf）的氣根，具澀腸止瀉、止咳化痰、清熱解毒、活血止痛之功效；主要產(chǎn)于廣西、廣東、云南等地，是廣西壯族民間習用藥材，民間廣泛用于咳嗽、哮喘、支氣管炎、流行性感冒、急性腸炎、跌打損傷等疾病預(yù)防和治療。本課題組研究發(fā)現(xiàn)榕樹須水提、醇提[1]或水提物經(jīng)乙酸乙酯水洗脫部位均有抗腦血栓作用；總黃酮是榕樹須含量較多成分之一，其抗腦血栓作用尚未見報道，現(xiàn)報道如下。

1材料

11藥物榕樹須總黃酮由廣西中醫(yī)藥研究院中藥室提供。阿斯匹林腸溶片為桂林南藥股份有限公司產(chǎn)品，批號：120501。鹽酸腎上腺素注射液為遠大醫(yī)藥（中國）有限公司產(chǎn)品，批號：130209。

12動物昆明種小鼠，體重18～22 g；Wistar大鼠，體重200～250 g；雌雄各半，SPF級，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK桂2009-0002。

13試劑膠原蛋白為Worthington biochemical corporation產(chǎn)品。水合氯醛為國藥集團化學試劑有限公司產(chǎn)品，批號：20090407。血清纖維蛋白原、凝血酶試劑盒均為上海太陽生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

14儀器YLS-14B小動物血栓生成儀，安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)。KHB202血凝儀，濟南金浩峰技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

2方法

21對小鼠體內(nèi)腦血栓的影響（膠原蛋白法）[1]取小鼠50只，隨機分為對照組、阿斯匹林組和各劑量組，每組10只。各藥物組每天灌胃給藥1次，對照組給予等體積水，連續(xù)5d。于末次給藥后1h，小鼠尾靜脈注射膠原蛋白與腎上腺素混合誘導(dǎo)劑（膠原蛋白90μg/只，腎上腺素9μg/只）。注射后觀察15min內(nèi)小鼠偏癱未恢復(fù)數(shù)，計算各組小鼠的腦血栓保護率。

22對大鼠體內(nèi)血栓的影響（電刺激法）[2]取合格大鼠若干，10%水合氯醛325 mL/kg腹腔麻醉，剝離其右側(cè)頸總動脈15 mm，用YLS-14B小動物血栓生成儀（參數(shù)：電流強度08 mA，刺激時間3 min）進行電刺激生成血栓，記錄95%栓塞時間。輕揉頸動脈血栓使其復(fù)通，縫合手術(shù)窗口。手術(shù)次日隨機分組，分別給予各藥物，連續(xù)給藥5 d，于第5天給藥后1 h再次麻醉進行其左右頸動脈血栓測試，記錄血栓形成時間，計算各鼠前后血栓變化值，統(tǒng)計各組藥物對電刺激大鼠血栓的影響。endprint

23對寒凝血瘀小鼠凝血功能的影響[3]取小鼠60只，隨機分為對照組、模型組、阿斯匹林組和各劑量組，每組10只。各藥物組每天灌胃給藥1次，對照及模型組給予等體積水，連續(xù)5 d。于第4天給藥后1h，除對照組外其余各組動物皮下注射腎上腺素08 mg/kg，給藥后2 h于5度冰水中冰浴4 min，同時皮下再注射腎上腺素08 mg/kg進行寒凝血瘀造模。第5天給藥后1h眼眶靜脈叢取血，測定血清凝血酶及纖維蛋白原時間，統(tǒng)計各組動物對凝血功能的影響。

24統(tǒng)計學處理膠原蛋白法腦血栓試驗采用百分率表示，組間用EXCEL的χ2分析；其余試驗采用（x±s）表示，組間采用EXCEL的t檢驗。

4討論

腦血栓的發(fā)生是在血液黏度增高、血流緩慢或血管內(nèi)膜損傷條件下，血小板黏附于受損的內(nèi)皮下膠原組織；同時發(fā)生花生四烯酸代謝釋放出細胞內(nèi)顆粒，并通過與纖維蛋白原結(jié)合使血小板之間相互黏附、聚集成團而形成。應(yīng)用膠原蛋白與腎上腺激素或直接電刺激頸總動脈可激活凝血因子和血小板，最終導(dǎo)致血栓形成[4]。本實驗發(fā)現(xiàn)，榕樹須總黃酮可促進因膠原蛋白栓塞引起的偏癱小鼠恢復(fù)、延遲電刺激大鼠頸動脈引起的栓塞發(fā)生。腎上腺素合冷刺激的寒凝血瘀模型可引起血小板及紅細胞的聚集及纖維蛋白原的增高[5]，榕樹須總黃酮能顯著延長血瘀小鼠的凝血酶時間、降低血瘀小鼠的纖維蛋白原含量，提示其通過干擾內(nèi)源性凝血系統(tǒng)因子的活性，使纖維蛋白生成受到抑制，從而減少血栓的發(fā)生。

參考文獻：

[1]鐘正賢，陳學芬，陳敬民，等抗血栓藥材有效部位的篩選研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2007，28（2）：34-35

[2]張君利，賈乘，苑博，等三七復(fù)方納米顆粒劑抑制血栓形成作用及機制初探[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16（2）：81-83

[3]王輝，劉剛，羅順德蓮心堿對血小板聚集、凝血功能和血栓形成的影響[J].中國藥理學通報，2010，26（6）：768-772

[4]包玉龍，杜佳林，張宏，等大鼠腦血栓動物模型研究進展[J].實驗動物科學，2009，26（6）：50-52

[5]谷萬里，張俏，史載祥寒凝血瘀證動物模型的研究述評[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14（6）：89-91

（收稿日期：2014-06-16）endprint

23對寒凝血瘀小鼠凝血功能的影響[3]取小鼠60只，隨機分為對照組、模型組、阿斯匹林組和各劑量組，每組10只。各藥物組每天灌胃給藥1次，對照及模型組給予等體積水，連續(xù)5 d。于第4天給藥后1h，除對照組外其余各組動物皮下注射腎上腺素08 mg/kg，給藥后2 h于5度冰水中冰浴4 min，同時皮下再注射腎上腺素08 mg/kg進行寒凝血瘀造模。第5天給藥后1h眼眶靜脈叢取血，測定血清凝血酶及纖維蛋白原時間，統(tǒng)計各組動物對凝血功能的影響。

24統(tǒng)計學處理膠原蛋白法腦血栓試驗采用百分率表示，組間用EXCEL的χ2分析；其余試驗采用（x±s）表示，組間采用EXCEL的t檢驗。

4討論

腦血栓的發(fā)生是在血液黏度增高、血流緩慢或血管內(nèi)膜損傷條件下，血小板黏附于受損的內(nèi)皮下膠原組織；同時發(fā)生花生四烯酸代謝釋放出細胞內(nèi)顆粒，并通過與纖維蛋白原結(jié)合使血小板之間相互黏附、聚集成團而形成。應(yīng)用膠原蛋白與腎上腺激素或直接電刺激頸總動脈可激活凝血因子和血小板，最終導(dǎo)致血栓形成[4]。本實驗發(fā)現(xiàn)，榕樹須總黃酮可促進因膠原蛋白栓塞引起的偏癱小鼠恢復(fù)、延遲電刺激大鼠頸動脈引起的栓塞發(fā)生。腎上腺素合冷刺激的寒凝血瘀模型可引起血小板及紅細胞的聚集及纖維蛋白原的增高[5]，榕樹須總黃酮能顯著延長血瘀小鼠的凝血酶時間、降低血瘀小鼠的纖維蛋白原含量，提示其通過干擾內(nèi)源性凝血系統(tǒng)因子的活性，使纖維蛋白生成受到抑制，從而減少血栓的發(fā)生。

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[5]谷萬里，張俏，史載祥寒凝血瘀證動物模型的研究述評[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14（6）：89-91

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23對寒凝血瘀小鼠凝血功能的影響[3]取小鼠60只，隨機分為對照組、模型組、阿斯匹林組和各劑量組，每組10只。各藥物組每天灌胃給藥1次，對照及模型組給予等體積水，連續(xù)5 d。于第4天給藥后1h，除對照組外其余各組動物皮下注射腎上腺素08 mg/kg，給藥后2 h于5度冰水中冰浴4 min，同時皮下再注射腎上腺素08 mg/kg進行寒凝血瘀造模。第5天給藥后1h眼眶靜脈叢取血，測定血清凝血酶及纖維蛋白原時間，統(tǒng)計各組動物對凝血功能的影響。

24統(tǒng)計學處理膠原蛋白法腦血栓試驗采用百分率表示，組間用EXCEL的χ2分析；其余試驗采用（x±s）表示，組間采用EXCEL的t檢驗。

4討論

腦血栓的發(fā)生是在血液黏度增高、血流緩慢或血管內(nèi)膜損傷條件下，血小板黏附于受損的內(nèi)皮下膠原組織；同時發(fā)生花生四烯酸代謝釋放出細胞內(nèi)顆粒，并通過與纖維蛋白原結(jié)合使血小板之間相互黏附、聚集成團而形成。應(yīng)用膠原蛋白與腎上腺激素或直接電刺激頸總動脈可激活凝血因子和血小板，最終導(dǎo)致血栓形成[4]。本實驗發(fā)現(xiàn)，榕樹須總黃酮可促進因膠原蛋白栓塞引起的偏癱小鼠恢復(fù)、延遲電刺激大鼠頸動脈引起的栓塞發(fā)生。腎上腺素合冷刺激的寒凝血瘀模型可引起血小板及紅細胞的聚集及纖維蛋白原的增高[5]，榕樹須總黃酮能顯著延長血瘀小鼠的凝血酶時間、降低血瘀小鼠的纖維蛋白原含量，提示其通過干擾內(nèi)源性凝血系統(tǒng)因子的活性，使纖維蛋白生成受到抑制，從而減少血栓的發(fā)生。

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[4]包玉龍，杜佳林，張宏，等大鼠腦血栓動物模型研究進展[J].實驗動物科學，2009，26（6）：50-52

[5]谷萬里，張俏，史載祥寒凝血瘀證動物模型的研究述評[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14（6）：89-91

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