MicroR NA?218?1?3p在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

欒嵐，韓斌，王翠芳，白陽，滕猛，宦大為，徐洪濤，王恩華

（1.沈陽醫學院附屬中心醫院病理科，沈陽 110023；2.中國醫科大學附屬盛京醫院泌尿外科，沈陽 110004；3.中國醫科大學附屬第一醫院病理科，沈陽 110001）

肺癌是全球范圍內癌癥死亡的主要原因，其中非小細胞肺癌（non?small cell lung cancer，NSCLC）占80%～85%，盡管醫療水平已有長足的進展，可以通過手術、放化療等治療手段治療NSCLC，其患者的預后生存率依然不盡人意。生命科學的不斷發展使人們認識到新的腫瘤標記物和分子治療靶點，其中在基因調控網絡中起重要作用的miRNA引起了廣泛的關注。miRNA是一類小分子非編碼RNA，通過與靶基因3′UTR區結合降解或抑制其翻譯。最新的研究表明miRNA的表達異常與肺癌關系密切［1，2］，作為miRNA的重要成員，miR?218家族參與多種生物學行為［3～5］，并在多種腫瘤中低表達［6，7］，而家族成員miR?218?1?3p的相關報道非常有限。本研究通過檢測miR?218?1?3p在NSCLC組織和相應癌旁組織中的表達，探討了miR?218?1?3p表達水平與臨床病理特征的關系，為NSCLC的診斷和治療提供了新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

42例NSCLC和癌旁肺組織（癌旁組織距癌組織達3 cm以上）來自于沈陽醫學院附屬中心醫院病理科2002?2008年搜集的病理標本，本研究所有患者術前均未接受任何放化療治療。患者臨床病理資料包括性別、年齡、發病部位、組織學類型、組織學分級、淋巴結轉移和病理分期均摘自患者病歷資料。根據WHO標準由兩位病理診斷醫師確定病理診斷、組織學分級、臨床病理分期、淋巴結轉移。

1.2 RT?qPCR

按照操作說明使用Am1975 RecoverAllTM（Ambion）提取組織中的總RNA。按操作說明使用RT引物探針，在ABI 7900HT（Applied Biosystems，美國）中運行檢測miR?218?1?3p（RiboBio，中國）的表達，RNU6B作為內參對照。通過3次獨立實驗使用公式RQ=2-ΔΔCt的方法進行數據分析。

1.3 統計學分析

使用SPSS 16.0軟件用于統計學分析。實時定量結果數據經過lg2轉換，使用平均值和標準差進行描述。配對t檢驗用于分析miR?218?1?3p在NSCLC和癌旁肺組織中的差異。Chi?square檢驗用于分析miR?218?1?3p的表達水平與臨床病理因素的關系。

2 結果

2.1 miR?218?1?3p在NSCLC中的表達

實時定量方法檢測miR?218?1?3p在42例NSCLC及配對癌旁中的表達情況，使用RNU6B作為內參對照，42例非小細胞肺癌中miR?218?1?3p表達低于癌旁組織者有33例，配對t檢驗檢驗結果顯示非小細胞肺癌中miR?218?1?3p表達明顯低于癌旁組織（P=0.011，圖1，圖2），差異有統計學意義。

2.2 miR?218?1?3p與臨床病理因素的關系

為探討miR?218?1?3p在NSCLC發生發展中所起的作用，按照miR?218?1?3p在42例NSCLC組織的中位表達水平分為高、低表達2組，采用Chi?square Test分析了miR?218?1?3p表達水平與42例NSCLC患者臨床病理因素的關系。統計學分析顯示，miR?218?1?3p的表達水平與淋巴結轉移負相關（P=0.030，chi?square test，圖3A），差異具有統計學意義。值得注意的是miR?218?1?3p的表達水平雖然與病理分期無統計學意義，但如圖3B處于Ⅱ和Ⅲ的患者miR?218?1?3p的表達水平低于Ⅰ期患者，而其他臨床病理因素如性別、年齡、發病部位、腫瘤體積、病理分型、分化等與miR?218?1?3p的表達水平均無相關性。

圖1 miR?218?1?3p在42例NSCLC中的表達情況

圖2 miR?218?1?3p在NSCLC組織與癌旁組織中的平均表達情況

圖3 miR?218?1?3p與臨床病理特征的關系

3 討論

近年來，miRNA作為基因網絡中重要的一環引起了越來越多的關注，miRNA有力的調節了基因表達并引起物種間序列的保守性為遺傳的穩定性做出了極大的貢獻。研究表明miRNA的表達具有組織特異性，并與腫瘤的發生發展密切相關。一些miRNA已被證明參與肺癌的發生和發展過程，并與肺癌的診斷，預后和治療等相關，其中let?7在肺癌中低表達并與肺癌預后及臨床病理因素相關，并通過抑制KRAS、HMGA2等癌基因發揮抑癌作用［8，9］。miR?205在鑒別肺癌亞型特別是鱗癌分型準確度很高［10］，miR?488，miR?503，miR?647被發現是與I期肺癌的復發有關［11］。

miR?218家族已被證明為多功能的miRNA，存在于多種組織中如肌肉、皮膚、脂肪等，其在骨骼形成，組織分化中發揮重要的作用［12～14］，在多種腫瘤中miR?218表現出促癌的潛質［15，16］。miR?218在染色體上的位置是肺癌中經常出現異常的片段，其中miR?218?1?3p和miR?218?1?5p位于4號染色體短臂上Slit2第15個內含子上，miR?218?2位于5號染色體長臂上Slit3的第14個內含子上［16］。miR?218?1?5p（miR?218）是影響NSCLC生存和無復發預后的獨立因素，miR?218低表達且樁蛋白（PXN）陽性的患者預后不良，細胞中miR?218通過靶定PXN抑制細胞增殖、侵襲，甲基化特異性PCR（MSP）結果顯示在肺癌細胞中存在啟動子甲基化，細胞經過5?aza?dC的處理，miR?218和宿主基因Slit2恢復表達［4］。miR?218?1?3p與miR?218?1?5p共享同一個前體，在染色體上處于相同的位置，由此推斷我們檢測到的miR?218?1?3p在肺癌中的低表達很可能也是甲基化作用的結果。而經過統計學分析我們發現在42例NSCLC中miR?218?1?3p的表達水平與淋巴結轉移相關，提示miR?218?1?3p可能在腫瘤轉移中發揮作用。盡管miR?218的功能及在疾病中的作用逐漸被人所熟知，但miR?218?1?3p的相關文獻還非常有限，我們的研究首次報道了miR?218?1?3p在NSCLC中的表達情況及和臨床病理因素的關系，miR?218?1?3p如何在NSCLC中發揮作用的具體分子機制還需要進一步的深入研究，我們的報道為明確miR?218家族在肺癌中的作用提供了新的線索。

綜上，miR?218?1?3p在42例NSCLC中低表達，并與淋巴結轉移相關。鑒于miRNA通過調控靶基因調節細胞生物學行為，參與腫瘤的發生發展，NSCLC中miR?218?1?3p的功能和調控機制仍需進一步的研究。

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