VEGF、COX-2、MMP-9在乳腺癌組織中的表達對乳腺鉬靶X線征象的影響

張 勇，李同飛，張 蕾，楊 帆

(1.泰山醫學院校醫院，山東 泰安271000;2.泰山醫學院附屬醫院腫瘤科，山東 泰安271000;3.泰山醫學院附屬醫院病理科，山東 泰安271000)

乳腺癌是一種嚴重危害女性身心健康的惡性腫瘤，發病年齡也呈逐漸年輕化的趨勢［1］。乳腺鉬靶X線檢查是目前診斷乳腺疾病的首選，且分辨率高，簡便易行，不受年齡、體形的限制。隨著現代分子醫學的發展和應用，人們對乳腺癌的研究已從傳統的病理形態學研究發展到了分子生物學水平，而分子生物學因素決定了腫瘤的生物學行為和組織病理學改變，進而決定腫瘤的影像學表現［2］。乳腺癌患者乳腺鉬靶X 線重要征象與血管及淋巴管生成存在著密切關系，而血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、環氧化酶-2(cycloxygenase-2，COX-2)、基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9，MMP-9)在腫瘤血管及淋巴管的生成中起著重要作用，因此探討乳腺癌組織中這3 種生物學指標與乳腺鉬靶X 線征象的關系具有一定的生物學意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 病例資料 收集泰山醫學院附屬醫院2008年1月至2011年12月接受乳腺鉬靶X 線檢查并手術切除的69 例乳腺浸潤性導管癌患者，均為女性，年齡31～65 歲，平均(43.5 ±7.9)歲。

1.1.2 儀器設備 采用德國西門子公司全數字化乳腺鉬鈀X 線攝影機，69 例患者均行雙側乳腺鉬靶X 線檢查，所有病例常規拍攝雙乳軸位(CC 位)片和內外側斜位(MLO 位)片。

1.2 分析方法

1.2.1 影像學分析方法 全部X 線片均進行雙盲法影像學診斷，并參照美國放射學會創立并推薦的乳腺影像報告及數據系統［3］進行X 線讀片及描述，按乳腺鉬靶X 線特征性表現分為有無毛刺征組、有無鈣化征組、有無異常血管征組及有無淋巴結轉移征組分別進行統計分析。見表1。

1.2.2 結果判定標準 顯微鏡下觀察:VEGF、COX-2、MMP-9 陽性信號均定位于細胞漿，呈棕黃色顆粒型表達，不著色為陰性。計數腫瘤細胞中陽性細胞所占比例，參照Miyake 等［4］的方法，陽性細胞≤30%為陰性，＞30%為陽性。

1.3 統計學處理 應用SAS 8.1 進行數據分析，計數資料通過χ2檢驗分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線毛刺征影像的關系 見表2。

表2 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線毛刺征影像的關系 %

2.2 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線鈣化征影像的關系 見表3。

表3 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線鈣化征影像的關系 %

2.3 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線異常血管征影像的關系 見表4。

2.4 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線淋巴結轉移征影像的關系 見表5。

表4 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線異常血管征影像的關系 %

表5 VEGF、COX-2、MMP-9 表達與乳腺鉬靶X 線淋巴結轉移征影像的關系 %

3 討論

3.1 VEGF、COX-2、MMP-9 的表達對乳腺鉬靶X 線毛刺征的影響 毛刺征是乳腺鉬靶X 線診斷乳腺癌的重要征象之一，惡性可能性為81% ～97%，主要是以腫塊為中心，向周圍呈放射狀分布的條索狀致密影。可分為以下幾類:腫瘤組織浸潤毛刺由腫瘤組織直接向外擴散形成，有根粗尖細的特點;淋巴管型毛刺是以腫塊為中心從周圍淋巴管向外浸潤形成放射狀細條狀毛刺;乳腺導管型毛刺是由腫塊周圍導管受腫瘤細胞浸潤所致，毛刺既粗又長，且易合并導管內鈣化;血管型毛刺是由腫塊供血血管、部分新生血管及擴張毛細血管組成的以腫瘤為中心向周圍放射的血管群。2008年史春穎等［5］也研究發現乳腺癌腫塊邊緣毛刺征與腫瘤細胞中VEGF 表達密切相關。本組研究結果顯示，乳腺癌腫塊有毛刺的VEGF、COX-2、MMP-9 的陽性表達率明顯高于無毛刺組。有毛刺征的腫塊，MMP-9 表達最高，其溶解Ⅳ型膠原，破壞各層基底膜，使腫瘤向周圍組織浸潤，這是毛刺征產生的病理基礎，而VEGF、COX-2 的升高，促使更多的腫瘤微血管形成，使腫瘤向周圍組織的浸潤性生長成為可能，說明腫瘤組織的增殖能力旺盛，使毛刺征的出現也成為可能。本組研究表明，VEGF、COX-2、MMP-9 的高表達對乳腺癌在乳腺鉬靶X 線征象中毛刺征的產生有著一定的影響，并存在著一定的關系，共同提示了乳腺腫塊增殖較活躍及向周圍組織生長較快，預示了有此類乳鉬靶X線征象的乳腺癌患者預后較差。

3.2 VEGF、COX-2、MMP-9 的表達對乳腺鉬靶X 線鈣化征的影響 鈣化在乳腺疾病的診斷中也占據特別重要的位置，作為乳腺癌的一個重要征象，可以幫助確診乳腺癌。通常可從鈣化的形態特點、鈣化的密度及大小差異、鈣化分布的差異、鈣化與并發病變的關系進行分析和鑒別，而乳腺鉬靶X 線對鈣化檢出有著明顯優勢。出現鈣化的原因很復雜，而且目前關于乳腺癌微小鈣化的發生機制，尚不十分清楚，主要存在2 種觀點［6-7］:一種是細胞活躍分泌鈣化論，認為生長旺盛腫瘤細胞鈣質新陳代謝增強，分泌大量鈣質，導致超飽和，引起鈣質沉著，逐漸形成大小不同、分布不均和密度不等的鈣化點;另一種是細胞壞死鈣化論，認為腫瘤細胞代謝旺盛，腫瘤組織局部缺血壞死，細胞裂解為碎屑，同時分解出大量磷酸根，與局部鈣離子結合，從而形成磷酸鈣鹽沉積。病理上60% ～83%的乳腺癌可見到鈣化，與病理對照也顯示，乳腺鉬靶X 線上群集鈣化的數量越多，惡性的可能性越大。有時腫塊不明顯，鈣化可能是惡性的惟一征象［8］，但本組研究表明，雖然鈣化可作為惡性診斷的重要特征之一，但其與VEGF、COX-2、MMP-9 的表達無明顯關系。我們分析原因可能有以下幾方面:首先，鈣化產生的部位不同，其產生的機制不同，位于腫塊中央的鈣化的產生可能是由于腫瘤代謝旺盛，血液供應不足，產生壞死鈣鹽沉積，形成鈣化。而位于腫塊周圍組織的鈣化可能是由于細胞分泌產生，其與腫塊生長是否旺盛無明確關系。其次，鈣化的數目不同，其反映的腫塊生長速度是否存在差異，目前無明確理論依據。關于乳腺癌腫塊鈣化與VEGF、COX-2、MMP-9 的關系有待于進一步研究。

3.3 VEGF、COX-2、MMP-9 的表達對乳腺鉬靶X 線異常血管征的影響 異常血管征也是乳腺癌的乳腺鉬靶X 線間接征象的一項特征。而在乳腺癌演變的過程中，血管生成已經成為腫瘤生長和轉移的先決條件，血管生長在原發腫瘤生長與侵襲中至關重要。其中VEGF 又是血管的形成過程中最重要的血管刺激因子［9］，VEGF 的表達程度已被認為在一些腫瘤中是影響患者生存的獨立預后指標。本組研究結果顯示，異常血管征組的VEGF、COX-2、MMP-9 的陽性表達率明顯高于無異常血管征組。VEGF 與COX-2、MMP-9 同時表達，使新生內皮細胞重排和吻合形成新生血管，使腫瘤代謝旺盛，出現乳腺鉬靶X 線血管影增多增粗。因而在乳腺鉬靶X 線攝影中腫塊周圍異常血管征象自然成為乳腺癌的特征之一，表現為腫瘤病灶周圍的迂曲擴張、密集形成網狀分布血管或沿腫塊周圍呈毛刺狀、放射狀或排筆狀密集排列。本組研究表明，VEGF、COX-2、MMP-9 的高表達反映乳腺癌組織的增生、增殖活躍，對乳腺癌在乳腺鉬靶X 線中異常血管征的產生有著一定的影響，并存在著一定的關系，預示了有此類乳腺鉬靶X 線特征的乳腺癌患者預后較差［10］。

3.4 VEGF、COX-2、MMP-9 的表達對鉬靶X 線淋巴結轉移征的影響 乳腺癌準確的術前分期是治療成敗的關鍵，而乳腺癌的淋巴結轉移是判斷術前分期的重要依據。臨床判斷淋巴結轉移誤差較大，最終確診依靠淋巴結穿刺和手術病理結果。乳腺腋窩轉移性淋巴結主要表現為淋巴結密度的改變，與其大小相關性較低。乳腺鉬靶X 線能較好地區分脂肪、腺體、肌肉、淋巴結和皮膚的密度，觀察到淋巴結形態、密度及全貌，對判斷乳腺腋窩淋巴結轉移有明顯的優勢。本組研究結果顯示，有淋巴轉移征組的VEGF、COX-2、MMP-9的陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移征組。而觀察已經發現，VEGF、COX-2、MMP-9 在血管和淋巴管新生中起著相同的介導作用，其中COX-2 能直接刺激內皮細胞的遷移、上調MMP-9、刺激腫瘤細胞增殖、抑制腫瘤細胞調亡，在適當的部位形成管樣結構，完成淋巴管的重塑，實現乳腺癌淋巴管的轉移。血管和淋巴管除了具有相似的重塑過程之外，在諸多體內的研究中，血管叢又經常與淋巴管叢相伴，雖然淋巴管與血管的比例依賴于組織類型和功能而有所不同，但鄰近豐富的血供為淋巴管提供了必不可少的營養，這也是淋巴管產生足夠的功能、維持淋巴管內皮細胞內在的收縮性以及產生快速應答所需要的，并成為在有機體內維持液體平衡不可缺少的過程。因此本研究也表明了，VEGF、COX-2、MMP-9 的高表達對乳腺癌在乳腺鉬靶X 線中淋巴結轉移征的出現有著一定的影響，并存在著一定的關系，共同提示了乳腺癌的淋巴及遠處轉移，預示了有此類乳腺鉬靶X 線特征的乳腺癌患者預后較差。

乳腺鉬靶X 線檢查是臨床篩查和診斷乳腺癌的首選方法，把乳腺鉬靶X 線檢查作為預測乳腺癌患者VEGF、COX-2、MMP-9 表達情況的無創手段，為間接判斷腫瘤生物學行為、評價患者預后及指導治療提供輔助理論依據。

［1］畢曄，邊莉，黃槧，等. 我國乳腺癌熱點問題研究的現狀分析［J］.中華腫瘤防治雜志，2006，13(16):1205 -1211.

［2］Greenlee RT，Hill-Harmon MB，Murray T，et al. Cancer statistics，2001.CA Cancer J Clin，2001，51(1):15 -36.

［3］陳圓圓，李智賢，劉軍杰.常規超聲結合超聲彈性成像對乳腺癌的鑒別診斷價值［J］.廣東醫學，2012，33(23):3560 -3562.

［4］Miyake M，Taki T，Hitomi S，et al.Correlation of expression of H/Le(y)/Le(b)antigens with survival in patients with carcinoma of the lung［J］.N Engl J Med，1992，327(1):14 -18.

［5］史春穎，陳穎.乳腺癌X 線特征與VEGF-C 表達及腫瘤腋窩淋巴結轉移的相關性研究［J］.臨床放射學雜志，2008，27(6):792-795.

［6］林玉斌. 乳腺腫瘤的鉬靶X 線診斷［J］. 實用放射學雜志，2003，19(4):356 -358.

［7］彭慶鎣，胡大章.全數字化乳腺X 線引導下鈣化灶導絲定位活檢對早期乳腺癌診斷的意義［J］. 腫瘤基礎與臨床，2012，25(1):63 -64.

［8］Stomper PC，Connolly JL. Ductal carcinoma in situ of the breast:correlation between mammographic calcification and tumor subtype［J］.AJR Am J Roentgenol，1992，159(3):483 -485.

［9］Weidner N. Tumoural vascularity as a prognostic factor in cancer patients:the evidence continues to grow［J］. J Pathol，1998，184(2):119 -122.