MIF-173G／C多態(tài)性與恩施地區(qū)土家族胃潰瘍的關(guān)聯(lián)性研究

鄧銀芝 吳明珠 羅和生 賀建華

胃潰瘍是一種消化系統(tǒng)較為常見(jiàn)的疾病，其臨床特征表現(xiàn)為多數(shù)患者與幽門螺桿菌（Hp）感染有關(guān)，病情易反復(fù)發(fā)作，甚至發(fā)生上消化道大出血、幽門梗阻、穿孔等并發(fā)癥。近年來(lái)隨著根除Hp、抑制胃酸及胃黏膜保護(hù)藥物的綜合利用，胃潰瘍治療取得令人滿意的臨床效果；然而少數(shù)患者的臨床療效較差，患者胃黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生腸上皮化生和非典型增生，最終演變?yōu)槲赴?］。目前已明確胃潰瘍的發(fā)病與機(jī)體免疫紊亂、遺傳、感染等因素密切相關(guān)。臨床上胃潰瘍呈現(xiàn)出一定的家族聚集性，提示它是一種與遺傳因素密切相關(guān)的疾病［2-4］。鑒于炎性反應(yīng)和遺傳因素在胃潰瘍發(fā)病中的作用，本文探討恩施地區(qū)土家族胃潰瘍患者的巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（MIF）表達(dá)水平，分析 MIF173-G／C多態(tài)性與胃潰瘍易感性的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2013年2月至2014年2月本院消化內(nèi)科收治的胃潰瘍患者145例，男71例，女74例，年齡19～85歲，平均年齡（45.6±12.6）歲。選擇120名健康體檢者為對(duì)照組，男55例，女65例，年齡20～80歲，平均年齡（47.1±10.9）歲。所有納入對(duì)象均為恩施地區(qū)土家族，對(duì)本研究均已知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：有明顯免疫風(fēng)濕性疾病、高血壓、糖尿病、嚴(yán)重肝腎疾病、惡性腫瘤、慢性消耗性疾病以及嚴(yán)重感染性疾病，近3個(gè)月內(nèi)有服用免疫抑制劑及激素史，有其他胃鏡檢查禁忌證。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 胃潰瘍的診斷和Hp檢測(cè) 電子胃鏡夾取胃竇黏膜，病理檢查診斷胃潰瘍；Hp感染通過(guò)胃黏膜組織快速尿素酶試驗(yàn)、13C或14C尿素呼氣試驗(yàn)檢測(cè)，任一項(xiàng)陽(yáng)性為Hp感染陽(yáng)性。1.2.2 MIF-173位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè) 取患者肘靜脈血2 mL，采用DNA提取試劑盒（上海泛柯生化試劑公司）提取DNA，并置于-2 0℃保存。按照文獻(xiàn)設(shè)計(jì) MIF-1 7 3 G／C引物 及 基 因 型 分 析［5-6］：PCR 上 游 引 物 5′-ACTAAGAAAGACCCGAGG-3′，下 游 引 物 5′-TGGCAGAAGGACCAGGAGAC-3′，PCR 產(chǎn) 物 為330 bp。擴(kuò)增條件為變性95℃5 min、變性95℃30 s、退火54℃40 s、延伸72℃45 s，共34個(gè)循環(huán)。利用Snapshot單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型技術(shù)對(duì)MIF-173G／C位點(diǎn)進(jìn)行分型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

基因型與等位基因型頻率采用頻率計(jì)數(shù)法計(jì)算，研究對(duì)象基因型與Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)、組間基因型與等位基因頻率的比較均采用χ2檢驗(yàn)。并以比數(shù)比（OR）及其95%可信區(qū)間（CI）表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度。logistic回歸分析MIF-173G／C多態(tài)性位點(diǎn)和胃潰瘍之間的相關(guān)性，MIF血清水平作為計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MIF-173G／C多態(tài)性的分布與比較

經(jīng)過(guò)預(yù)擴(kuò)增、預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物純化，最終延伸反應(yīng)及延伸產(chǎn)物純化，胃潰瘍組GG、GC、CC基因型頻率分別為42.75%、40.00%、17.24%，對(duì)照組基因型頻率為61.67%、31.67%、6.54%；兩組之間對(duì)應(yīng)基因型比較發(fā)現(xiàn)，GG、GC、CC基因型在對(duì)照組和胃潰瘍組分布的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組之間對(duì)應(yīng)等位基因比較發(fā)現(xiàn)，G、C在對(duì)照組和胃潰瘍組分布的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表1）。Hardy-Weinberg平衡定律的吻合度檢驗(yàn)結(jié)果顯示，胃潰瘍組（χ2＝3.02，P＝0.08），對(duì)照組（χ2＝1.02，P＝0.31），提示基因檢測(cè)結(jié)果可靠。以GG基因型為對(duì)照，暴露于CG、CC基因型的OR分別2.46（95%CI：2.01～3.10，P＝0.002）和5.19（95%CI：1.69～15.89，P＝0.000）。

表1 MIF-173G／C多態(tài)性頻率在胃潰瘍組與對(duì)照組的分布比較

2.2 胃潰瘍組不同臨床特征的基因型分析

采用logistic回歸分析胃潰瘍組145例患者M(jìn)IF-173G／C多態(tài)性位點(diǎn)與臨床資料之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)男女患者的基因型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.888，P＞0.05）；是否有胃潰瘍家族史（χ2＝26.798，P＜0.01）、是否為尋常型胃潰瘍（χ2＝0.786，P＞0.05）、是否處于活動(dòng)期（χ2＝12.426，P＜0.05）的基因型分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床特征胃潰瘍患者的MIF-173G／C基因分型情況（n＝145）

3 討論

研究表明，炎性介質(zhì)相關(guān)基因及其表達(dá)的蛋白在炎性疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。MIF是一個(gè)關(guān)鍵的前炎性反應(yīng)因子，一級(jí)結(jié)構(gòu)為115個(gè)氨基酸殘基，其相對(duì)分子質(zhì)量約為125 000，其編碼基因位于22號(hào)染色體長(zhǎng)臂的保守區(qū)（22q11.2）［7］。正常情況下垂體及單核巨噬細(xì)胞也會(huì)分泌少量的MIF［8-9］。MIF具有許多生物學(xué)效應(yīng)，其主要效應(yīng)為免疫調(diào)節(jié)功能、促進(jìn)血管新生及酶學(xué)活性［10］。近年來(lái)隨著對(duì) MIF研究的深入，國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)MIF在細(xì)胞增殖及分化調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著重要的作用，它還參與惡性腫瘤的發(fā)生［11-12］。

基于MIF分子的主要生物學(xué)效應(yīng)可能在胃潰瘍的發(fā)生發(fā)展中起著潛在的作用，本研究旨在探討恩施地區(qū)土家族胃潰瘍患者的MIF-173G／C多態(tài)性與胃潰瘍發(fā)病的相關(guān)性。MIF-173G／C基因型和等位基因頻率在兩組間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，胃潰瘍組CC基因型和C等位基因頻率均顯著高于對(duì)照組（P＝0.012）；相對(duì)于GG基因型，暴露于CG、CC基因型的OR分別為2.46（95%CI：2.01～3.10，P＝0.002）和5.19（95%CI：1.69～15.89，P＝0.000），這一結(jié)果提示 MIF-173G／C可能是恩施地區(qū)土家族胃潰瘍的易感基因。迄今為止尚不明確MIF-173G／C多態(tài)性影響胃潰瘍等疾病發(fā)病的分子機(jī)制，可能與影響其表達(dá)水平有關(guān)［13-14］。基因多態(tài)性與疾病的相關(guān)性近年來(lái)成為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)，MIF基因存在多個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性，其中MIF的cDNA序列中第173位堿基SNP的研究較為廣泛。國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)MIF-173G／C多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性反應(yīng)性腸道疾病等免疫系統(tǒng)疾病有關(guān)［15-16］。

目前已明確Hp感染和遺傳因素是引起胃潰瘍發(fā)病的重要因素之一，本研究對(duì)MIF-173G／C多態(tài)性3種基因型GG、GC、CC的胃潰瘍患者進(jìn)行比較時(shí)發(fā)現(xiàn)，Hp感染與其多態(tài)性密切相關(guān)。張雙霞等［17］研究慢性胃炎和胃潰瘍組織中MIF蛋白表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)慢性胃炎和胃潰瘍組織中MIF陽(yáng)性率明顯高于正常組織，且Hp感染陽(yáng)性患者在Hp根除后MIF陽(yáng)性表達(dá)率明顯下降，這一結(jié)果提示MIF在胃潰瘍發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，且Hp感染是導(dǎo)致MIF表達(dá)升高的重要因素。

本研究結(jié)果提示，MIF基因變異可能參與了胃潰瘍的發(fā)生發(fā)展，其對(duì)胃潰瘍的早期篩查、基因型診斷、早期治療可能會(huì)有一定的輔助作用，但確切的分子機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)病年齡、職業(yè)與環(huán)境因子是影響胃潰瘍發(fā)病的相關(guān)因素，本研究的對(duì)象在發(fā)病年齡、環(huán)境因子及職業(yè)等方面的資料不全，且樣本量較小，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，完善相關(guān)背景資料，以進(jìn)一步深入探討MIF基因的遺傳多態(tài)性在胃潰瘍發(fā)生發(fā)展過(guò)程中作用機(jī)制。

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