Ph染色體在急性淋巴細胞白血病中的診斷

于萌

摘 要：目的 探討Ph染色體在急性淋巴細胞白血病中的診斷意義。方法 選取2013年4月～2014年4月由我院血液科收治的24例成人初治急性淋巴細胞白血病患者和10例慢粒急淋變患者為研究對象。使用改良的染色體顯帶技術對患者的Ph染色體進行檢測，回顧性分析34例患者染色體核型檢測過程和檢測結果。結果 使用改良的染色體顯帶技術對34例急性淋巴細胞白血病患者進行Ph染色體的檢測，檢測出25例患者的ph染色體呈陽性，總檢出率為73.5%，其中初治急性淋巴細胞白血病患者16例，檢出率為66.7%，低于慢粒急淋變患者90%的檢出率，兩者在比較上，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 對急性淋巴細胞白血病患者采用染色體顯帶技術對Ph染色體進行監測，其檢出率高，對ph染色體有一定的靈敏度，可作為臨床急性淋巴細胞白血病的診斷標準。

關鍵詞：ph染色體 急性淋巴細胞白血病 診斷

中圖分類號：R733.71 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）12（a）-0210-01

近年來，Ph陽性急性淋巴細胞白血病在全世界范圍內均有報道，特異性Ph染色體為急性淋巴細胞白血病遺傳學特點，在幼兒階段，急性淋巴細胞白血病出現的概率大約為3%～5%，伴隨著年齡的增長，成年人發病的概率就達到了20%～30%，在50歲以后，其概率高達50%以上。Ph陽性急性淋巴細胞白血病被全世界一致認為是由多種基因聯合參與，并共同作用所致。因此，為探索Ph染色體在急性淋巴細胞白血病中的診斷意義，我院對34例急性淋巴細胞白血病患者的Ph染色體進行染色體顯帶技術檢測，旨在為今后的臨床診斷提供參考資料，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年4月～2014年4月由我院血液科收治的24例成人初治急性淋巴細胞白血?。ˋLL）患者和10例慢粒急淋變（CML-BP）患者為研究對象，其中男性患者19例，女性患者15例；年齡17～58歲，平均年齡（31.5±6.6）歲；急性白血病的FAB分型為L1型20例，L2型14例；其中處于緩解期的患者共15例。

1.2 病例選取標準

所有入選患者均符合全國衛生組織對急性淋巴細胞白血病的診斷標準，排除全身其他部位的惡性腫瘤、急性傳染病等患者。

1.3 檢測方法

對所有患者的Ph染色體使用改良的染色體顯帶技術進行檢測，檢測后進行染色體核型分析。具體實施步驟如下所示。

1.3.1 標本的采集

在無菌的條件下，抽取患者的骨髓或者額外周血后，加入肝素抗凝。采用短期培養法制備樣本中的染色體，時長為24 h。

1.3.2 制作標本

在培養結束前的2.5 h左右，使用7號針頭向樣本中注入2～3滴20 μg/mL的秋水仙堿后，繼續進行培養。將骨髓樣本離心處理10 min，去掉上清液，加入7 mL、0.075 mol/L的kcl溶液，溶液已事先預溫于37 ℃水浴中，吹打均勻后，水浴25 min左右，溫度為37 ℃；加入預溫至37 ℃的冰醋酸固定液，吹打均勻；第一次固定時，去掉上清液，加入7 mL的固定液并離心10 min；第二次和第三次均固定30 min。去掉上清液后，將沉淀使用固定液配制成細胞懸液后，滴片。每個標本制片10張，置于室溫環境中，平放于濾紙上。

1.3.3 熱處理

取三只同容量的立式染缸，加入100 mL的earle鹽溶液，加蓋水浴至87.5 ℃，每個染缸放入4張制片。整體孵育1 h后，隔10 min取出2張，并將制片置于流水下沖洗，孵育時長為60～120 min，不得超過150 min。用姬母薩液對制片進行染色，持續10～15 min后水洗，晾干。放置普通光鏡下進行觀察，分析中期分裂細胞至少20個。

2 結果

2.1 急性淋巴細胞白血病患者的核型分析結果

34例ALL患者中，共檢測出Ph染色體陽性患者25例，總檢出率為73.5%。其中初治ALL患者有16例（檢測結果包括Ph染色體正常核型嵌合體10例、單純Ph染色體核型3例和其他染色體數目異常3例），檢出率為66.7%；CML-BP患者9例，檢出率為90%，全為Ph染色體陽性，Ph染色體在CML-BP患者中的檢出率明顯高于初治ALL患者。見表1。

3 結論

大多數急性淋巴細胞白血病患者的臨床表現特點為血WBC計數高、發病年紀較大、累計中樞神經系統、并伴有肝脾淋巴結腫大等。FAB分型多以L2為主，免疫表型主要為CD10+的B細胞，并且其緩解率相較Ph染色體陰性患者來說，明顯較低，緩解期短，早期就容易復發。急性淋巴細胞白血病發病原因是由于Ph染色體易位，而Ph染色體易位是指9號和22號染色體發生平衡易位，導致位于22號染色體上的BCR基因和來自9號染色體上的C-ABL元癌基因發生異常融合而產生BCR/ABL融合基因。

檢測Ph染色體需要很全面的手段，包括細胞遺傳學、逆轉錄—多聚酶鏈反應（RT-PCR）分析、southerm印記雜交以及FLASH方法。使用逆轉錄方法，在成人普通ALL中發現有BCR/ABL融合的mRNA的人群占比55%。通過其他的研究發現分子生物學的實驗方法比傳統細胞遺傳學實驗方法有更高的陽性率，因為在傳統的細胞遺傳學實驗方法分析中的正常細胞中也包含BCR/ABL基因的重組。

綜上所述，改良的染色體顯帶技術對Ph染色體有一定的靈敏性，其對初治急性淋巴細胞白血病的陽性率相比慢粒急淋變患者要高，具有一定的臨床運用價值。

參考文獻

[1] 王建祥.Ph染色體陽性急性淋巴細胞白血病的診治[J].中華血液學雜志，2014，35（2）：98-99.

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