二苯乙烯苷促進糖尿病大鼠心肌A k t蛋白的表達

董林

江蘇省泰興市人民醫院內分泌科，江蘇泰興 225400

二苯乙烯苷促進糖尿病大鼠心肌A k t蛋白的表達

董林

江蘇省泰興市人民醫院內分泌科，江蘇泰興 225400

目的 研究二苯乙烯苷治療糖尿病的作用機制。 方法SD大鼠隨機分為對照組、模型組、二苯乙烯苷低中高劑量組（30、60、120 mg/kg），每組10只。觀察大鼠的一般情況，檢測空腹血糖，檢測心肌Akt蛋白的表達。 結果 與對照組比較，模型組空腹血糖升高，心肌Akt蛋白表達降低，差異有統計學意義（P<0.05），經過二苯乙烯苷干預后，空腹血糖降低，心肌Akt蛋白表達增高，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 二苯乙烯苷可能通過調節Akt表達治療糖尿病。

糖尿病；二苯乙烯苷；Akt

糖尿病（DM）和心血管疾病、癌癥、呼吸道疾病一起構成四大非傳染性疾病。糖尿病心肌病（DCM）屬于糖尿病微血管慢性并發癥，是導致糖尿病患者死亡的主要原因[1]。目前，常用的DCM造模方法為腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）[2]。

二苯乙烯苷（TSG）提取于廖科植物何首烏，具有改善內皮依賴性血管舒張、抗氧化、抗炎、神經保護和抗衰老等作用[3]。Akt作為重要的激酶分子，與DCM關系密切[4]。該文旨在探討TSG防治DCM的作用和機制，為糖尿病防治提供理論基礎和實驗依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

50只成年雄性SD大鼠[體重（200±20）g，購自南通大學實驗動物中心，實驗動物許可證號:SYXK9(蘇)200220022]隨機分為，對照組（10 只）、模型組（10 只）、TSG 低劑量組（TSG-L，10只）、中劑量組（TSG-M，10 只）和高劑量組（TSG-H，10 只）。

1.2 試劑與儀器

STZ （Sigma,美國）；TSG（南通偉康醫藥研究院）；兔源 Akt抗體 （武漢博士德生物工程有限公司）；Cy3標記山羊抗兔 IgG（海門市碧云天生物技術研究所）；血糖儀（Johnson&Johnson，美國）；Olympus BX51 熒光顯微鏡（Olympus，日本）。

1.3 造模方法

SD大鼠高能量飲食（20 KJ/g）飼養4周，造模前禁食12 h，腹腔注射STZ 30 mg/kg，一周后測空腹血糖(FBG)≥11.1 mmol/L為造模成功；對照組注射等體積的緩沖液。

1.4 給藥方法

對照組和模型組不給予任何治療；TSG-L組、TSG-M組和TSG-H組，分別給予TSG 30、60和120 mg/kg，共6周。

1.5 觀察指標

1.5.1 一般情況 觀察并記錄各組大鼠的毛色、精神狀態、活動、進食、進水和體重等一般情況。

1.5.2 FBG測定 各組大鼠禁食不禁水12 h后尾靜脈取血，使用血糖儀檢測。

1.5.3 Akt蛋白表達 大鼠處死取心臟，4%多聚甲醛固定48 h，30%蔗糖脫水平衡24 h后切片，5%山羊血清封閉1 h，加入一抗37oC孵育2 h，加入二抗孵育2 h，熒光顯微鏡觀察，綠色熒光為Akt陽性細胞。

1.6 統計方法

2 結果

2.1 一般情況

注射STZ后大鼠出現多食、多飲以及多尿，精神萎靡、毛色暗黃粗糙、活動減少，對外界的刺激反應遲鈍，體重下降；對照組生長良好，毛色光亮順滑，精神狀態良好。

2.2 TSG對糖尿病大鼠FBG的影響

5組FBG水平相比，差異有統計學意義（F=12.32,P<0.05），與對照組相比，模型組FBG升高（P<0.05）；與DM組相比，TSGM組和TSG-H組FBG降低 (P<0.05)，見表1。

表1 各組 FBG水平（±s）

表1 各組 FBG水平（±s）

注：*P<0.05,與對照組比較;△P<0.05,與模型組比較。

組別FBG(mmol/L)對照組（n=10）模型組（n=10）TSG-L（n=10）TSG-M（n=10）TSG-H（n=10）FP 4.780.63(14.651.83)*13.911.93(12.661.99)△(11.311.28)△12.32<0.05

2.3 TSG對糖尿病大鼠心肌Akt蛋白表達的影響

5組SD大鼠心肌陽性細胞情況見圖1。5組Akt表達量相比，差異有統計學意義（F=9.28,P<0.05），與對照組比較，模型組Akt減少（P<0.05）；與模型組比較，TSG-M組和 TSG-H 組 Akt增加（均 P<0.05），見表 2。

圖1 TSG對糖尿病大鼠心肌Akt蛋白表達的影響

表2 TSG對Akt蛋白表達的影響（±s）

表2 TSG對Akt蛋白表達的影響（±s）

注：*P<0.05,與對照組比較;△P<0.05,與模型組比較。

組別心肌Akt表達量對照組（n=10）模型組（n=10）TSG-L（n=10）TSG-M（n=10）TSG-H（n=10）FP 0.93±0.13（0.28±0.07）*0.35±0.10（0.41±0.12）△（0.68±0.16）△9.28<0.05

3 討論

DCM發病機制包括代謝紊亂、自主神經病變和干細胞等[5]。在DM發病的早期，多種代謝危險因素會引起心臟的氧化應激，誘導心肌成纖維細胞增殖，分泌多種細胞因子，進一步導致心臟收縮和舒張功能的異常[6]。

Akt是心肌存活的重要因子，多數的細胞生存信號途徑均與Akt蛋白有關[7]。尿皮素可以保護DM大鼠心肌損傷、減少心肌纖維化程度、降低炎性反應，而上述功能是通過調控Akt/GSK-3β信號通路來實現的[4]。Akt在心肌細胞代謝水平的調控發揮重要作用，其活化能夠改善DM對心肌的損害[8]。

研究顯示，DM大鼠FBG升高，心肌Akt蛋白表達下降，經TSG干預后，FBG水平下降，心肌Akt蛋白表達增加。提示TSG調節Akt表達可能是治療DCM的機制。

[1]Sheu J J,Chang L T,Chiang CH,et al.Impact of diabetes on cardiomyocyte apoptosis and connexin43 gap junction integrity:role of pharmacological modulation[J].Int Heart J,2007,48(2):233-245.

[2]Wang L,Li J,Li D.Losartan reduces myocardial interstitial fibrosis in daibetic cardiomyopathy rats by inhibiting JAK/STAT signaling pathway[J].Int J Clin Exp Pathol,2015,8(1):466-473.

[3]Li C,Cai F,Yang Y,et al.Tetrahydroxystilbene glucoside ameliorates diabetic nephropathy in rats:involvement of SIRT1 and TGF-beta1 pathway[J].Eur J Pharmacol,2010,649(1):382-389.

[4] Liu X,Liu C,Zhang X,et al.Urocortin ameliorates daibetic cardiomyophay in rats via the Akt/GSK-3β signaling pathway[J].Exp Ther Med,2015,9(3):667-674.

[5]Joshi M,Kotha SR,Malireddy S,et al.Conundrum of pathogenesis of diabetic cardiomyopathy:role of vascular endothelial dysfunction,reactive oxygen species,and mitochondria[J].Mol Cell Biochem,2014,386(1-2):233-249.

[6]Gonzalez-Vilchez F,Ayuela J,Ares M,et al.Oxidative stress and fibrosis in incipient myocardial dysfunction in type 2 diabetic patients[J].Int J Cardiol.2005,101(1):53-58.

[7]Dorman BH,New RB,Bond BR,et al.Myocyte endothelin exposure during cardioplegic arrest exacerbates contractile dysfunction after reperfusion[J].Anesth Analg,2000,90(5):1080-1085.

[8]Foster L J,Li D,Randhawa V K,et al.Insulin accelerates inter-endosomal GLUT4 traffic via phosphatidylinositol 3-kinase and protein kinase B[J].J Biol Chem,2001,276(47):44212-44221.

R587.2

A

1672-4062（2015）07（a）－0019-02

董林(1974.1-)，男，江蘇泰興人，研究生，副主任醫師，主要從事糖尿病臨床和基礎研究。

2015-04-08）