不同儀器檢測網(wǎng)織紅細胞結(jié)果的可比性分析

張青楊，刁瑩瑩，鄭軍

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科，沈陽 110001）

不同儀器檢測網(wǎng)織紅細胞結(jié)果的可比性分析

張青楊，刁瑩瑩，鄭軍

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科，沈陽 110001）

目的探討網(wǎng)織紅細胞（RET）在不同儀器之間檢測結(jié)果的相關(guān)性。方法使用參考方法對Sysmex XE-5000進行儀器校準(zhǔn)后，比較Sysmex XE-5000與Sysmex XN-20兩臺儀器檢測網(wǎng)織紅細胞比率的相關(guān)性。結(jié)果校準(zhǔn)之后，兩臺儀器檢測網(wǎng)織紅細胞比率的結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），與手工方法比較也無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論使用參考方法對Sysmex XE-5000的網(wǎng)織紅細胞校準(zhǔn)之后可使實驗室內(nèi)部的儀器比對具有可比性。

網(wǎng)織紅細胞；校準(zhǔn)；參考方法；可比性

網(wǎng)織紅細胞（reticulocyte，RET）是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)，對貧血疾病的診斷、療效觀察和預(yù)后有重要的臨床價值［1，2］。近年來，隨著臨床快速診療的需求，傳統(tǒng)的手工檢測方法逐漸被自動化網(wǎng)織紅細胞檢測技術(shù)所取代［3］。但是，目前國內(nèi)外尚未建立標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)系統(tǒng)，對儀器檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性評估尚未完善。同時，近年來醫(yī)療機構(gòu)間檢驗結(jié)果互認(rèn)的需求愈加迫切，為滿足此需求，實驗室內(nèi)不同儀器檢測結(jié)果的可比性更值得重視。

本研究選取本實驗室檢測網(wǎng)織紅細胞的兩種儀器，嘗試對廠家不提供校準(zhǔn)方案的儀器（Sysmex XE-5000）自建校準(zhǔn)方案校準(zhǔn)后，與經(jīng)配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)之后的儀器（Sysmex XN-20）進行結(jié)果比較，同時使用手工方法對儀器結(jié)果進行驗證，探索網(wǎng)織紅細胞校準(zhǔn)方案的可行性以及實驗室內(nèi)不同檢測系統(tǒng)之間的可比性。

1 材料與方法

1.1 研究對象

根據(jù)血紅蛋白（hemoglobin，Hb）＞120 g/L、90～120 g/L、＜90 g/L分為高、中、低3組。所有標(biāo)本均來自本院門診、住院患者和健康體檢者，隨機選取Hb高、中、低3個水平各20例，共60例標(biāo)本用于可比性分析。標(biāo)本均為空腹采集的EDTA-K2抗凝靜脈血，混勻后當(dāng)天完成檢測。

1.2 儀器與試劑

日本Sysmex公司生產(chǎn)的Sysmex XE-5000與Sysmex XN-20全自動血細胞分析儀及其原裝配套試劑、全血質(zhì)控物；Sysmex XN-20配套校準(zhǔn)品XNCAL；新鮮配制的新亞甲藍染液；帶Miler窺盤的Nikon共覽顯微鏡。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本處理：嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程，使用配套校準(zhǔn)品XN-CAL Sysmex XN-20進行儀器校準(zhǔn)（包括RET參數(shù)），分別對Sysmex XN-20和Sysmex XE-5000進行儀器驗證，空白計數(shù)、精密性均達到廠商要求的標(biāo)準(zhǔn)，3個水平的室內(nèi)質(zhì)控合格。60例新鮮全血樣本，分別使用Sysmex XN-20和Sysmex XE-5000的自動進樣模式進行RET檢測，每份標(biāo)本檢測2遍取均值；同時依據(jù)文獻［4］對儀器法計數(shù)剩余標(biāo)本進行新亞甲藍染色后制片，由2位工作人員使用帶Miler窺盤的共覽顯微鏡進行手工計數(shù)，每份標(biāo)本油鏡下計數(shù)1 000個紅細胞內(nèi)的RET百分?jǐn)?shù)，取均值。

1.3.2 校準(zhǔn)Sysmex XE-5000 RET檢測通道：使用參考方法［5］對1份標(biāo)本賦值。采集新鮮全血分裝在3個試管中，第1份標(biāo)本取100 μL與等量的新亞甲藍染液充分混勻后，室溫下染色5 min后制備3張玻片，由兩位經(jīng)驗豐富的工作人員使用共覽顯微鏡同時計數(shù)，每張玻片至少計數(shù)5 000個紅細胞后，計算該標(biāo)本RET比率為2.53%。

參考血細胞分析常規(guī)參數(shù)校準(zhǔn)方案［6］，驗證空白計數(shù)及精密度合格后，使用第2份標(biāo)本在Sysmex XE-5000連續(xù)檢測11次，去除第1次結(jié)果后計算均值為2.90%，與定值偏差為14.6%，參照Sysmex公司在Sysmex XN-20上標(biāo)定的校準(zhǔn)允許誤差（8.38%），嚴(yán)重超出范圍，需要調(diào)整儀器系數(shù)；通過計算將儀器校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整（1 000→871），然后使用第3份標(biāo)本在Sysmex XE-5000連續(xù)檢測11次，去除第1次結(jié)果后計算均值為2.55%，與定值偏差為0.79%，符合廠商標(biāo)定要求，校準(zhǔn)合格。

1.3.3 校準(zhǔn)后儀器比對：按照儀器操作規(guī)程對Sysmex XE-5000重新進行儀器驗證，空白計數(shù)、精密性均達到廠商要求的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)1.3.1方法重新對60例新鮮全血樣本進行儀器檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 校準(zhǔn)前儀器比對

Sysmex XE-5000在校準(zhǔn)之前，與經(jīng)配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)之后的Sysmex XN-20在檢測RET時的結(jié)果相比，除Hb高值組偏差較小外，其余2組和總體與Sysmex XN-20的均值相比，偏差均超過廠商標(biāo)定的儀器間比對標(biāo)準(zhǔn)（20%），需對Sysmex XE-5000進行RET通道校準(zhǔn)；同時進行t檢驗發(fā)現(xiàn)，2臺儀器總體數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 校準(zhǔn)后比對

表1 校準(zhǔn)前2種儀器RET檢測結(jié)果比較Tab.1 Comparison of RET between two instruments before calibration（

表1 校準(zhǔn)前2種儀器RET檢測結(jié)果比較Tab.1 Comparison of RET between two instruments before calibration（

*Bias=（XE 5000-XN 20）/XN 20×100%

Group n Sysmex XN-20 Sysmex XE-5000 t P Bias（%）* Total 60 2.35±2.03 2.92±1.72 -1.763 0.040 24.26 Hb＞120 g/L 20 1.27±0.59 1.42±0.55 -0.839 0.203 11.81 Hb 90-120 g/L 20 1.78±0.78 2.15±0.70 -1.728 0.046 20.79 Hb＜90 g/L 20 3.99±2.72 4.82±2.64 -0.989 0.164 20.40

表2中數(shù)據(jù)表明，在經(jīng)過校準(zhǔn)之后，Sysmex XE-5 000與Sysmex XN-20在檢測RET時的結(jié)果相比，分組及整體均值偏差均在廠商規(guī)定范圍之內(nèi)，t檢驗差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；整體數(shù)據(jù)進行回歸分析，相關(guān)性良好（回歸曲線為y=0.989x-0.018，r2= 0.993，t=91.01，P＜0.01）。

同時，2種儀器法檢測結(jié)果與手工法相比，除Hb低值組外差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；整體數(shù)據(jù)進行回歸分析，相關(guān)性良好（Sysmex XE-5000回歸曲線為y=0.907x+0.192，r2=0.985，t=55.53，P＜0.01；Sysmex XN-20回歸曲線為y=0.910x+0.227，r2= 0.975，t=47.20，P＜0.01）。

表2 校準(zhǔn)后RET檢測結(jié)果比較Tab.2 Comparison of RET after calibration

表2 校準(zhǔn)后RET檢測結(jié)果比較Tab.2 Comparison of RET after calibration

1）compared with by hand，P＜0.05；*Bias=（XE 5000-XN 20）/XN 20×100%.

Group n By hand Sysmex XN-20 Sysmex XE-5000 Comparison Between Different Instruments t P Bias（%）* Total 60 2.33±2.22 2.35±2.03 2.30±2.01 0.118 0.892 -2.13 Hb＞120g/L 20 1.26±0.77 1.27±0.59 1.26±0.58 0.081 0.936 -0.79 Hb 90-120g/L 20 1.71±1.01 1.78±0.78 1.77±0.87 0.019 0.985 -0.56 Hb＜90g/L 20 4.02±3.01 3.99±2.72 3.88±2.721） 0.128 0.898 -2.76

3 討論

隨著檢驗技術(shù)的快速發(fā)展，帶RET的全自動血液分析儀在臨床廣泛的應(yīng)用，使RET的檢測從傳統(tǒng)的人工染色鏡檢被全自動血液分析儀采用的流式分析技術(shù)取代，在計數(shù)RET的同時還可根據(jù)熒光強度等檢測多個RET參數(shù)，為臨床貧血性疾病的鑒別診斷以及療效監(jiān)測提供了新型指標(biāo)。同時，由于發(fā)展規(guī)模和所服務(wù)的臨床對象的變化，許多實驗室會同時擁有多個品牌或者同一品牌不同型號的血細胞分析儀，伴隨醫(yī)療機構(gòu)間檢驗結(jié)果互認(rèn)的需求，如何保證這些不同品牌或型號的血細胞分析儀檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，是目前各實驗室必須面對的問題。基層醫(yī)院已經(jīng)嘗試使用可溯源的定值抗凝新鮮全血對不同檢測系統(tǒng)進行實驗室間統(tǒng)一比對，效果顯著［7］。

2011年，衛(wèi)生部先后發(fā)布實施了《血細胞分析的校準(zhǔn)指南》和《網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的參考方法》兩份衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。然而，目前國內(nèi)外對于儀器法RET檢測的標(biāo)準(zhǔn)還未確立，參考區(qū)間建立也正處于研究之中，標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)體系尚未完善；而資料顯示［8］，儀器在長期使用過程中，其校準(zhǔn)系數(shù)會發(fā)生變化，為使血細胞分析儀的檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確，也更有臨床診斷價值，必須定期校準(zhǔn)。

Sysmex XN系列是Sysmex血細胞分析儀中首次配置了標(biāo)準(zhǔn)的RET校準(zhǔn)品的儀器，而Sysmex XE-5000則尚未生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)的RET校準(zhǔn)品，因此為2種類型儀器之間結(jié)果的可比性增加了難度。

本研究參考血細胞分析常規(guī)參數(shù)校準(zhǔn)方案［4］，使用參考方法［5］對新鮮全血樣本賦值后對Sysmex XE-5000的RET比率進行校準(zhǔn)，并對校準(zhǔn)前后2臺儀器之間的結(jié)果可比性進行研究，結(jié)果顯示，經(jīng)校準(zhǔn)后Sysmex XE-5000與Sysmex XN-20在不同濃度水平上的檢測結(jié)果均具有可比性，同時通過手工法驗證，結(jié)果準(zhǔn)確性良好，證明該校準(zhǔn)方案在臨床實驗室操作中具備可行性。但在本試驗進行過程中發(fā)現(xiàn)Hb低值組在Sysmex XE-5000與手工法間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中有3份標(biāo)本的偏差均超過10%，測定值均在9.8～12.9之間，考慮是由于RET數(shù)量大、密度高、RNA物質(zhì)多，這對于手工法及儀器法都造成一定干擾，使結(jié)果出現(xiàn)較大誤差。

綜上所述，通過自建方案對Sysmex XE-5000進行儀器校準(zhǔn)后，可使實驗室內(nèi)多臺儀器間的檢測結(jié)果更具可比性，檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。同時由于該校準(zhǔn)方案所需材料均為臨床標(biāo)本，也不需要高精端儀器，方便了基層醫(yī)院的借鑒與應(yīng)用。但仍需定期參加實驗室間比對計劃（衛(wèi)生部、省內(nèi)EQA等），以持續(xù)關(guān)注檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

［1］Karagülle M，Gündüz E，Mutlu FS，et al.Clinical significance of reticulocyte hemoglobin content in the diagnosis of iron deficiency anemia［J］.Turk J Hematol，2013，30（2）：153-156.

［2］Oustamanolakis P，Koutroubakis IE，Messaritakis I，et al.Measurement of reticulocyte and red blood cell indices in the evaluation of anemia in inflammatory bowel disease［J］.J Crohns Colitis，2011，5（4）：295-300.

［3］李琳，張磊，李偉.血細胞分析儀與手工法RET計數(shù)結(jié)果比對及其臨床意義［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（14）：1928-1929.

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：131-132.

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部.網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的參考方法（WS/T 346-2011）［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：1-5.

［6］中華人民共和國衛(wèi)生部.血細胞分析的校準(zhǔn)指南（WS/T 347-2011）［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：1-5.

［7］李芳文，張吉平，鐘蘭君，等.用新鮮血進行基層醫(yī)院實驗室間血細胞分析儀比對的探討［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（10）：1282-1284.

［8］張志強.血細胞分析儀校準(zhǔn)系數(shù)變化分析［J］.中國醫(yī)療設(shè)備，2014，29（5）：61-63.

（編輯 武玉欣）

Comparison Study of Reticulocyte Analysis Results Determined by Different Instruments

ZHANGQing-yang，DIAO Ying-ying，ZHENGJun

（Department of Laboratory Medicine，The First Hospital，China Medical University，Shenyang110001，China）

Objective To explore the correlation of reticulocyte（RET）detection results between different instruments.MethodsThe reference method（Sysmex XE-5000）for instrument calibration was carried out，then the results of reticulocyte ratio tested by Sysmex XE-5000 and Sysmex XN-20 was compared.ResultsThere was no statistical significance between two instruments for detecting reticulocyte ratio（P＞0.05）.Moreover，no statistically significant differences were found when comparing these data with the manual method（P＞0.05）.ConclusionInternal instruments are comparable for RET after calibrating Sysmex XE-5000 using reference method.

reticulocyte；calibration；reference method；comparability

R446.11

B

0258-4646（2015）11-0975-03

國家自然科學(xué)基金青年項目（81102231）

張青楊（1986-），男，技師，本科.

刁瑩瑩，E-mail：cmudyy@163.com

2015-04-02

網(wǎng)絡(luò)出版時間：