三氧化二砷聚乙二醇-聚乳酸偶聯(lián)人源抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2隱形納米粒的抗肝癌機(jī)制探討

殷香保，鄔林泉，黃躍英，黃明文，王 愷，周 凡，余 新

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·論著·

三氧化二砷聚乙二醇-聚乳酸偶聯(lián)人源抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2隱形納米粒的抗肝癌機(jī)制探討

殷香保，鄔林泉，黃躍英，黃明文，王 愷，周 凡，余 新

目的 探討以聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)為載體材料包載的三氧化二砷(As2O3)，同時(shí)偶聯(lián)人源抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2)的隱形納米粒的抗肝癌機(jī)制。方法 以PEG-PLA為載體材料，W/O/W型超聲乳化制備As2O3納米粒，同時(shí)偶聯(lián)具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，得到人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA納米粒，同時(shí)以相同方法制作香豆素6(C6)-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA納米粒。測(cè)定納米粒粒徑分布、Zata電位；MTT法計(jì)算As2O3、As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA對(duì)Bel 7402肝癌細(xì)胞IC50值；采用流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和激光共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人肝癌Bel 7402細(xì)胞攝取C6-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA納米粒的速度和強(qiáng)度；將18只肝癌裸鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，每組分別經(jīng)尾靜脈注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA溶液，給藥后12 h處死小鼠，取腫瘤、脾、心、肺、肝、腎等組織，測(cè)試其中As2O3濃度；再將另24只肝癌裸鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，每組分別經(jīng)尾靜脈注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA及0.9%氯化鈉溶液，給藥后第17 d，處死小鼠，計(jì)算腫瘤抑制率。結(jié)果 抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒徑為(141.9±13.2)nm(PDI=0.23)，呈正態(tài)分布，Zata電位為(10.2±1.1)mV。As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA的IC50值分別為(1.53±0.22)μmol/L，(2.30±0.18)μmol/L和(1.80±0.22)μmol/L。不同劑型IC50值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.503，P=0.018)。不同時(shí)間點(diǎn)人肝癌Bel 7402細(xì)胞攝取抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的速度均高于C6-PEG-PLA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.012，P=0.045；t=2.231，P=0.035；t=2.311，P=0.022)。As2O3組不同組織As2O3含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.568，P=0.018)；As2O3-PEG-PLA組不同組織As2O3含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.659，P=0.034)；抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組不同組織As2O3含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.001，P=0.022)。對(duì)照組、As2O3組、As2O3-PEG-PLA組和抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組腫瘤抑制率分別為32.6%、45.9%、66.2%和87.9%。4組腫瘤抑制率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.189，P=0.018)。結(jié)論 以PEG-PLA為載體材料制備得到As2O3納米制劑，且偶聯(lián)具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，用于肝癌的治療，可顯著提高As2O3的生物利用度，為構(gòu)建As2O3肝癌靶向納米遞送系統(tǒng)提供了理論依據(jù)。

砷劑；聚乙二醇-聚乳酸；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子類；肝腫瘤；機(jī)制

生物可降解材料作為基因和藥物載體，是腫瘤靶向治療研究的熱點(diǎn)[1]。聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)是目前研究應(yīng)用最多的生物可降解材料之一，廣泛應(yīng)用于藥物的傳遞系統(tǒng)，具有良好的生物相容性和生物可降解性[2]。將抗腫瘤藥物制備成納米粒，可使藥物在機(jī)體內(nèi)緩慢釋放，減小血藥峰谷濃度的波動(dòng)，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間[3]。PEG-PLA用于納米材料包載藥物可用于腫瘤的靶向治療。肝癌是富血管性惡性腫瘤，其生長(zhǎng)有賴于腫瘤血管的生長(zhǎng)，抗血管生成治療是近年來肝癌治療的新方向[4]。其中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是肝癌血管生成中最重要的因子，其生物學(xué)效應(yīng)是通過與其受體(VEGFR)結(jié)合后使其自身磷酸化而激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)[5]。VEGFR-2可作為肝癌免疫靶向治療及抗血管生成治療的雙重靶點(diǎn)。

三氧化二砷(As2O3)是中藥砒霜的主要有效成分，長(zhǎng)期以來被認(rèn)為是一種致癌物[6]。研究證實(shí)，As2O3具有顯著的肝癌治療效果，然而目前臨床上應(yīng)用的As2O3注射液，會(huì)給正常組織帶來不良反應(yīng)，同時(shí)降低腫瘤部位的有效藥物濃度[7]。本研究采用PEG-PLA為載體材料包載As2O3，同時(shí)偶聯(lián)具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，制成肝癌靶向納米粒，并對(duì)其抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行探討，以期提高As2O3的生物利用度，降低毒副作用。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與材料 VCX800型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(SONICS公司)；Allegra X-15R低溫高速離心機(jī)(Beckman公司)；Mastersizer 3000激光粒度儀(Malvern公司)；FACSCalibur流式細(xì)胞儀；激光共聚焦成像系統(tǒng)(Olympus FV1000)；CO2培養(yǎng)箱(REVCO公司)；CRI Maestro TM活體成像系統(tǒng)等。

As2O3(Sigma公司)；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT，Sigma公司)；RPMI 1640(GIBCOL公司)；VEGFR-2-scFv(單鏈可變區(qū)片斷)為本實(shí)驗(yàn)室自制；PEG-PLA為上海寶生提供；BALB/c(nu/nu)雌性裸鼠(上海市腫瘤研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)；其他常用試劑均為阿拉丁生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 As2O3-PEG-PLA及香豆素6(C6)-PEG-PLA納米粒制備 采用W/O/W型超聲乳化制備納米粒。將適量As2O3溶液在超聲條件下加入到5 ml PEG-PLA二氯甲烷溶液中，在所得溶液中加入少量Tween 80與Span 80混合乳化劑(Tween 80∶Span 80=5∶1)，超聲(100 W，5 min)使之成為均一穩(wěn)定的W/O初乳液。將所得初乳液在超聲條件(100 W，10 min)下滴加到50 ml O-羧甲基殼聚糖(O-CMC)水溶液中，形成W/O/W型復(fù)乳液。將所得復(fù)乳液在室溫下電磁攪拌4 h以上，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)。將所得混懸液以2 000 r/min離心，離心5 min，取沉淀，采用蒸餾水離心洗滌3次，除去未包埋藥物，將所得沉淀冷凍干燥，即得As2O3-PEG-PLA納米粒。C6-PEG-PLA的制備同上述方法，只是將As2O3替換為C6。

1.2.2 人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA隱形納米粒的制備 稱取質(zhì)量比為3∶1的As2O3-PEG-PLA納米粒和抗VEGFR-2單鏈抗體，溶于SBF溶液(pH=7.4的0.9%氯化鈉溶液)中，在電磁攪拌下加入碳二亞胺(與單抗質(zhì)量比為2∶1)溶液，4 ℃下攪拌2 h，將所得溶液以4 000 r/min離心5 min，超聲分散后采用去離子水洗滌3次，冷凍干燥，所得粉狀固體即As2O3-PEG-PLA納米粒與抗VEGFR-2單鏈抗體的偶聯(lián)物(抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒)。應(yīng)用Sephadex G-200層析柱對(duì)抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒進(jìn)行純化。抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA隱形納米粒的制備同上述方法，只是將As2O3替換為C6。

1.2.3 表征 取抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA隱形納米粒粉末適量，加水稀釋后，采用激光粒度儀測(cè)定平均粒徑及分布，同時(shí)用Zata電位測(cè)定儀測(cè)定其Zata電位。

1.2.4 MTT試驗(yàn) 參照王彥妹[8]方法，采用MTT法檢測(cè)As2O3、As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Bel 7402肝癌細(xì)胞，接種于96孔板，每孔100 μl，5 000個(gè)細(xì)胞，置于5% CO2、37 ℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后吸棄培養(yǎng)液，分別加入含As2O3、As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA隱形納米粒的RPMI l640培養(yǎng)液，抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA隱形納米粒終濃度為0.015、0.030、0.060、0.120、0.250、0.500、1.000、2.000和4.000 μmol/L，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組，對(duì)照組添加等量RPMI 1640培養(yǎng)液，每組各設(shè)5個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48 h后取出96孔板，加入MTT(5.0 mg/ml)10 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，每孔加入150 μl DMSO溶解生成的結(jié)晶，用酶標(biāo)儀于490 nm處測(cè)其吸光度值，以培養(yǎng)基空白孔調(diào)零，計(jì)算As2O3、As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA對(duì)Bel 7402肝癌細(xì)胞IC50值。

1.2.5 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

1.2.5.1 流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn) C6用作熒光染料研究As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA的細(xì)胞攝取機(jī)制。于6孔板培養(yǎng)Bel 7402肝癌細(xì)胞24 h，每孔約含5×105個(gè)細(xì)胞。每孔加入包載C6的納米制劑(C6濃度為100 μg/L)，37 ℃下分別孵育1、3、5 h后，消化，離心(4 000 r/min離心5 min)，采用冷磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，于流式細(xì)胞儀上檢測(cè)(激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，檢測(cè)波長(zhǎng)560 nm)。

1.2.5.2 激光共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn) 于玻璃表面皿上，在37 ℃下培養(yǎng)Bel 7402肝癌細(xì)胞24 h，加入包載C6的納米制劑(C6濃度為100 μg/L)，37 ℃下孵育6 h，除去培養(yǎng)基，用冷PBS洗滌3次，4%多聚甲醛固定。加入Hoechst 33258(λex352 nm，λem460 nm)5 min后，于激光共聚焦顯微鏡下觀察。

1.2.6 體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)

1.2.6.1 肝癌裸鼠模型的建立 將狀態(tài)良好的人肝癌Bel 7402細(xì)胞在超凈工作臺(tái)上用吸管吸凈培養(yǎng)液，消化后，用無菌0.9%氯化鈉溶液按照1×107個(gè)/ml的濃度配成細(xì)胞懸液。取一定數(shù)量4～6周齡的三級(jí)BALB/c雄性裸鼠，按0.2 ml/只接種于小鼠右側(cè)腋部皮下，繼續(xù)飼養(yǎng)2周，即建立荷肝癌裸鼠模型。

1.2.6.2 組織分布 將18只肝癌裸鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，每組分別經(jīng)尾靜脈注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA溶液。給藥后12 h處死裸鼠，取腫瘤、血液、心、肺、肝、腎等組織，測(cè)試其中As2O3濃度，砷含量采用氫化物原子熒光法測(cè)定。抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粉末微波消解后，在酸性條件下加入硫脲-維生素C和硼氫化鉀將砷還原為AsH3。稱取一定量的抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA隱形納米粒，溶于二氯甲烷中，加入5 ml蒸餾水，混懸后靜置1 h。將兩次分離收集的水相溶液混合在一起，經(jīng)2 000 r/min離心5 min后，取上清液測(cè)試其中的As2O3濃度。

1.2.7 體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn) 另取24只肝癌裸鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，每組分別經(jīng)尾靜脈注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA及0.9%氯化鈉溶液，1次/d，連續(xù)7 d。給藥后每2 d測(cè)量腫瘤的直徑和垂直徑，計(jì)算腫瘤的體積。給藥后第17 d，處死小鼠，取出腫瘤稱重，腫瘤相對(duì)體積=不同時(shí)間點(diǎn)腫瘤體積/第7天腫瘤體積，計(jì)算腫瘤抑制率。

2 結(jié)果

2.1 粒徑分布及Zata電位 制備的抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒徑分布見圖1。系列納米粒的粒徑、分散指數(shù)(PDI)及Zata電位見表1。

表1 系列納米粒表征

注：PDI=分散指數(shù)，C6=香豆素6

圖1 抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒徑分布圖

Figure 1 Distribution diagram of the average particle size of anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA

2.2 不同劑型As2O3對(duì)人肝癌Bel 7402細(xì)胞IC50值 As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA的IC50值分別為(1.53±0.22)μmol/L，(2.30±0.18)μmol/L和(1.80±0.22)μmol/L。不同劑型IC50值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.503，P=0.018)；其中As2O3-PEG-PLA IC50值高于As2O3和抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA，抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA IC50值高于As2O3，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 細(xì)胞攝取機(jī)制 不同時(shí)間點(diǎn)人肝癌Bel 7402細(xì)胞攝取抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的速度均高于C6-PEG-PLA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.012，P=0.045；t=2.231，P=0.035；t=2.311，P=0.022，見圖2)。激光共聚焦觀察人肝癌Bel 7402細(xì)胞孵育6 h時(shí)攝取C6-PEG-PLA和抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的熒光強(qiáng)度，其中抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的熒光強(qiáng)度較強(qiáng)(見圖3)。

圖2 不同時(shí)間點(diǎn)人肝癌Bel 7402細(xì)胞攝取C6-PEG-PLA和抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA

Figure 2 The uptake of C6-PEG-PLA and anti-VEGFR-2/C6-PEG-PLA by liver cancer Bel 7402 cells at different time points

注：B1=C6-PEG-PLA，B2=抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA

圖3 激光共聚焦觀察人肝癌Bel 7402細(xì)胞孵育6 h時(shí)攝取C6-PEG-PLA和抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的熒光強(qiáng)度

Figure 3 Fluorescence intensity of the uptake of C6-PEG-PLA and anti-VEGFR-2/C6-PEG-PLA by liver cancer Bel 7402 cells observed through laser scanning confocal microscope

2.4 體內(nèi)組織分布 As2O3組不同組織As2O3含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.568，P=0.018)；As2O3-PEG-PLA組不同組織As2O3含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.659，P=0.034)；抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組不同組織As2O3含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.001，P=0.022)。在腫瘤處，3組As2O3含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.231，P=0.011，見圖4)。

2.5 腫瘤抑制率 對(duì)照組、As2O3組、As2O3-PEG-PLA組和抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組腫瘤抑制率分別為32.6%、45.9%、66.2%和87.9%。4組腫瘤抑制率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.189，P=0.018)；其中抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA組腫瘤抑制率高于As2O3-PEG-PLA組和As2O3組，As2O3-PEG-PLA組腫瘤抑制率高于As2O3組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見圖5)。

圖4 給藥12 h后3組腫瘤、脾、腎、肺、心、肝中As2O3含量

Figure 4 As2O3content in tumor，spleen，kidney，lung，heart and liver of the three groups 12 hours after injection

圖5 4組腫瘤抑制率比較

3 討論

As作為抗腫瘤藥物在我國(guó)具有悠久的歷史。1999年，As2O3注射液正式通過臨床審批，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床，并取得了顯著效果。關(guān)于As2O3抗肝癌作用的研究，從體外實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)到臨床試驗(yàn)及應(yīng)用于治療晚期肝癌的治療，取得了令人鼓舞的效果，從而奠定了As2O3治療肝癌的基礎(chǔ)。目前臨床上應(yīng)用的As2O3注射液，由于給藥后血漿As濃度很快升高，生物利用度低，且給患者帶來多重不良反應(yīng)，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)腎功能損害，嚴(yán)重影響患者正常生活質(zhì)量[7]。為了減少不良反應(yīng)的發(fā)生，迫切需要一種新型As2O3制劑應(yīng)用于肝癌的臨床治療。

納米技術(shù)進(jìn)行納米載藥可顯著提高抗腫瘤藥物療效，增強(qiáng)靶向性，降低毒副作用，肝癌靶向給藥可有效降低As2O3的毒副作用。有報(bào)道稱，PEG-PLA可用于一些水溶性差，t1/2短，毒副作用大的藥物載體，可有效提高藥物的生物利用度，減輕藥物對(duì)全身的毒副作用[5]。本研究制備得到的抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒徑為(141.9±13.2)nm(PDI=0.23)，呈正態(tài)分布，Zata電位為(10.2±1.1)mV。

MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA對(duì)人肝癌Bel 7402細(xì)胞增殖抑制作用，結(jié)果顯示，IC50值大小順序?yàn)锳s2O3<抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA

通過流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡技術(shù)監(jiān)測(cè)體外細(xì)胞攝取發(fā)現(xiàn)，人肝癌Bel 7402細(xì)胞攝取抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA速度高于C6-PEG-PLA；孵育6 h后，抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的熒光強(qiáng)度高于C6-PEG-PLA，均表明抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA進(jìn)入細(xì)胞的能力強(qiáng)于不帶靶頭的C6-PEG-PLA，可能與細(xì)胞內(nèi)VEGFR-2高表達(dá)有關(guān)。體內(nèi)分布結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA腫瘤富集As2O3含量最高，其次是As2O3-PEG-PLA和As2O3，進(jìn)一步證實(shí)了VEGFR-2在體內(nèi)的主動(dòng)靶向作用，VEGFR-2偶聯(lián)的As2O3納米粒可高效定向遞送大量As2O3。其原理是利用抗VEGFR-2單克隆抗體能與VEGFR-2上的抗原特異性結(jié)合的免疫學(xué)特性，一方面可將經(jīng)其修飾的抗腫瘤藥物攜帶至腫瘤組織中，發(fā)揮免疫靶向治療作用；另一方面可競(jìng)爭(zhēng)性抑制VEGF與VEGFR-2結(jié)合，從而抑制腫瘤血管的生成。

綜上所述，以PEG-PLA為載體材料制備得到As2O3納米制劑，且偶聯(lián)具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，用于肝癌的治療，可顯著提高As2O3的生物利用度，為構(gòu)建As2O3肝癌靶向納米遞送系統(tǒng)提供了理論依據(jù)。

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(本文編輯：賈萌萌)

Anti-hepatoma Mechanism of Human Anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA Stealth Nanoparticles

YINXiang-bao，WULin-quan，HUANGYue-ying，etal.

DepartmentofHepatobiliarySurgery，theSecondAffiliatedHospitaltoNanchangUniversity，Nanchang330006，China

Objective To investigate the anti-hepatoma mechanism of human anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA stealth nanoparticles.Methods PEG-PLA was used as the vector material to prepare As2O3nanoparticles with W/O/W ultrasonic emulsification method，and VEGFR-2 that is targeted at liver cancer was coupled to obtain human anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA nanoparticles.C6-PEG-PLA and anti-VEGFR-2/C6-PEG-PLA stealth nanoparticles were also prepared using the same method.Size distribution and Zata potential of the nanoparticles were characterized using laser particle analyzer；IC50values of As2O3，As2O3-PEG-PLA and anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA against liver cancer cell Bel 7402 were determined using MTT method；laser scanning confocal microscope and flow cytometry were used to measure the speed and intensity of the uptake of C6-PEG-PLA and anti-VEGFR-2/C6-PEG-PLA nanoparticles by liver cancer cell Bel 7402；using random number table method，we divided 18 nude mice with liver cancer into three groups and assigned the three groups to receive the injection of As2O3,As2O3-PEG-PLA and anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA solutions respectively through caudal veins，and we killed the mice 12 months after the injection and obtained their tumors，spleens，hearts，lungs，livers and kidneys to measure the As2O3concentration within these tissues；using random number table method，we divided another 24 nude mice with lung cancer and assigned the three groups to receive the injection of As2O3，As2O3-PEG-PLA，anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA and 0.9% sodium chloride solutions respectively through caudal veins，and we killed the mice 17 days after the injection and calculated the tumor inhibiting rates.Results The average particle size of anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA was(141.9±13.2)nm(PDI=0.23)with a normal distribution.The Zata potential of anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA was(10.2±1.1)mV.The IC50values of As2O3， As2O3-PEG-PLA and anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA were(1.53±0.22)μmol/L，(2.30±0.18)μmol/L and(1.80±0.22)μmol/L respectively，with the differences significant(F=4.503，P=0.018).At different time points，lung cancer Bel 7402 cells were faster in the uptake of anti-VEGFR-2/C6-PEG-PLA than in the uptake of C6-PEG-PLA(t=2.012，P=0.045；t=2.231，P=0.035；t=2.311，P=0.022).In the As2O3group，As2O3content varied significantly with different tissues(F=5.568，P=0.018)；in the As2O3-PEG-PLA group，As2O3content varied significantly with different tissues(F=4.659，P=0.034)；in the anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA group，As2O3content varied significantly with different tissues(F=5.001，P=0.022).The cancer inhibition rates of control group，As2O3group，As2O3-PEG-PLA group and anti-VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA group were 32.6%，45.9%，66.2% and 87.9% respectively，with the differences significant(χ2=4.189，P=0.018).Conclusion The As2O3nanoparticles prepared with PEG-PLA as vector and coupled with VEGFR-2 that is targeted at liver cancer can evidently improve the bioavailability of As2O3and provide theoretical basis for the building of As2O3liver cancer-targeted nanometer delivery system.

Arsenicals；PEG-PLA；Vascular endothelial growth factors；Liver neoplasms；Mechanisms

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81060187)；江西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2008GQY0050)；江西省衛(wèi)生廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(20131078)

330006江西省南昌市，南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院肝膽外科

殷香保，330006江西省南昌市，南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院肝膽外科；E-mail：ysxiangb@126.com

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.23.014

2015-02-10；

2015-06-10)

殷香保，鄔林泉，黃躍英，等.三氧化二砷聚乙醇化聚乳酸偶聯(lián)人源抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2隱形納米粒的抗肝癌機(jī)制探討[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18(23)：2805-2809.[www.chinagp.net]

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