艾灸對類風濕性關節炎大鼠Th1/Th2漂移特異性轉錄因子T-bet和GATA-3的干預作用*

艾灸對類風濕性關節炎大鼠Th1/Th2漂移特異性轉錄因子T-bet和GATA-3的干預作用*

★周志剛1顏春明2張學強3覃肯3郭業頻1*通信作者：郭業頻，男，副教授。(1.江西中醫藥大學基礎醫學院南昌 330004；2.葡萄牙傳統醫學學院中醫系里斯本；3.江西中醫藥大學研究生院南昌 330004)

摘要：目的：觀察艾灸對類風濕性關節炎大鼠Th1/Th2漂移特異性轉錄因子T-bet和GATA-3的干預作用。方法：30只大鼠用弗氏佐劑進行造模，隨機分成模型組、艾灸組，西藥組三組，10只正常大鼠作為空白對照組，經處理后，觀察T-bet和GATA-3的表達。結果：模型組大鼠的脾臟細胞中T-bet表達較正常組明顯增高，差異存在著顯著性意義(P<0.01)，艾灸組和西藥組T-bet表達升高，但差異無顯著性意義(P>0.05)；模型組大鼠的脾臟細胞中GATA-3表達較正常組降低，差異存在著顯著性意義(P<0.05)；艾灸和西藥組中脾臟細胞中GATA-3表達較正常組降低，但差異無顯著性意義(P>0.05)。結論：艾灸可能通過抑制RA大鼠T細胞向Th1細胞分化，降低T-bet轉錄，促進GATA3轉錄，調整Thl/Th2功能失衡達到治療目的。

關鍵詞：艾灸；T-bet；GATA-3；類風濕性關節炎

類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一種以關節滑膜炎為主的慢性全身性自身免疫性疾病，其臨床表現為關節腫脹和疼痛、晨僵、畸形和功能損害，病理特征是關節滑膜慢性炎癥、血管翳形成，關節軟骨和骨組織的破壞[1]，我國RA患病率大約為0.33%，大多為女性，本病致殘率高，因RA的病因和發病機制尚不明確，目前對RA尚無特效治療治法。但大多學者認為是遺傳因素、環境因素和免疫功能失調等各種因素綜合作用的結果。現代研究已證明正常生理狀態下Th1與Th2細胞分化存在著一種動態平衡與交互抑制，Th1/Th2細胞分化的動態平衡一旦被打破，T細胞就會朝著Th1細胞分化占優勢或Th2細胞分化占優勢的“漂移狀態”發展，機體因此而發病。因此T細胞亞群Th1、Th2分化失衡被認為是誘導RA發病的中心環節[2]。

研究已經證明針灸具有良好的抗炎、鎮痛和免疫調節等作用，腧穴大多為足三里、脾俞、腎俞、大椎、命門等[3]。但艾灸法對RATh1/Th2漂移的干預實驗還鮮有報道。本課題是以Th1、Th2的兩個特異性指標T-bet和GATA-3來觀察RA大鼠的Th1/Th2細胞分化及艾灸干預后表達趨勢，以期深入揭示艾灸治療RA的作用機理。

1材料和方法

1.1材料健康SD雄性成年大鼠，體重在200~300g之間，清潔級(動物由江西中醫藥大學實驗動物科技中心提供)。

1.2方法40只SD健康大鼠購回后經適應性喂養7d，隨機抽取10只，納入空白對照組，于大鼠右側后肢足墊皮內注射0.1mL生理鹽水，30只大鼠作為納入模型組中，于足跖底部注射0.1mL完全弗氏佐劑進行造模[4]造模，造模成功的模型組大鼠隨機分成模型組、艾灸組，西藥組各10只，右側后肢足墊皮內注射0.1mL生理鹽水的10只大鼠做為空白對照組。空白對照組和模型組不做任何治療，只做與艾敏灸組相同的固定。艾灸組將大鼠固定，大鼠大椎、脾俞、腎俞、命門、足三里參照《實驗針灸學》動物穴位圖譜定位。每天一次，連續6天為一療程，連續3個療程；西藥組予甲氨蝶呤水溶液(3.8mg/kg)每周1次灌胃。

1.3標本采集大鼠脾組織的采集可參照前期實驗方法采集[5]。

1.4T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的擴增及檢測將采集后的脾細胞懸液按照參考文獻進行擴增并檢測[5]，表達量按參考文獻進行計算，引物序列見表1。

表1　T-bet、GATA-3和β-actin序列

2結果

結果顯示：與正常組比，模型組大鼠的脾臟細胞中T-bet表達明顯增高，差異存在著顯著性意義(P<0.01)，艾灸組和西藥組的T-bet表達升高，差異無顯著性差異(均P>0.05)，與模型組比較，艾灸組和西藥組的T-bet表達明顯降低，差異存在著顯著性意義(P<0.01，P<0.05)；與正常組比較，模型組大鼠的脾臟細胞中GATA-3表達量降低，差異存在著顯著性意義(P<0.05)；與模型組相比，艾灸組和西藥組中GATA-3表達明顯升高，差異無著顯著性意義(P>0.05)，與模型組比較，艾灸組和西藥組的GATA-3表達明顯降低，差異存在著顯著性意義(P<0.01，P<0.05)。

表2　大鼠脾組織的T-bet和GATA-3表達

注：與正常組比較，△P<0.01，▽P>0.05；與模型組比較，▲P<0.01，▼P>0.05。

3討論

RA是一種以對稱性、侵蝕性滑膜炎為病理特征，反復發作多發性小關節腫痛，晚期出現關節僵硬、畸形為主要臨床表現的自身免疫性疾病。屬于中醫痹證范疇，與中醫古籍記載的“頑痹”、“骨痹”、“歷節”、“鶴膝風”等病證相類似[6]。痹證的發生是由正氣不足為內因，風、寒、濕六淫邪氣感染為外因，內因、外因共同作用的結果[7]。灸法主要是借助艾炷燃燒發出的熱量給人體組織以溫熱性刺激，通過經絡腧穴的“小刺激大反應”作用，并將刺激轉換成良性生物信息，從而達到防治疾病目的的一種方法[8-9]。艾灸對RA有良好的治療效果，且無副使用[10-11]。“足三里”穴屬胃經，是治療下肢痿痹之要穴。脾經與胃經相表里，且脾胃被乃后天之本，具有運化水谷，化生氣血之功，故合取“脾俞”調理脾胃二經，有補養全身氣血之功效。“腎俞”屬足太陽膀胱經，具有補虛培元之功，對臟腑、經絡、氣血津液的失調都有很好的調整作用。

研究表明：Th1、Th2細胞及其分泌的細胞因子平衡狀態的紊亂是造成RA的主要原因，Th1細胞在RA中占主導地位，如IFN-γ,IIL-2，IL-6，L-4，IL-10等細胞因子分泌異常，這些細胞因子共同參與病理過程如滑膜增生、血管翳形成和軟骨破壞等[12-15]。以往動物實驗研究曾表明：艾灸足三里、腎俞、脾俞等穴能明顯減輕RA大鼠局部原發性和繼發性腫脹，提高實驗RA大鼠痛閾，調節細胞免疫因子，具有抗炎、鎮痛和免疫調節等作用[16]，但細胞因子分泌Th1/Th2細胞調控。Th細胞分化為Th1細胞過程中受到轉錄因子T-bet的調控，主要介導細胞免疫反應，分泌促炎細胞因子，導致炎癥反應[17]，是Th1細胞的特異性轉錄因子[18-19]。所有的Th2細胞因子的轉錄都需要GATA-3的參與，主要介導體液免疫反應，分泌抗炎因子，提高黏膜耐受性[18]。GATA-3特異性表達于Th2細胞，是Th2細胞特異性轉錄因子[20]。

本實驗結果顯示：模型組大鼠的脾臟細胞中T-bet表達明顯增高，GATA-3表達顯著降低，差異存在著顯著性意義(均P<0.01)，說明在RA期間，大鼠T細胞分化向著Th1分化，同時抑制向Th2細胞分化，總的趨勢向Th1漂移，Th1/Th2功能失衡；經艾灸治療后，脾臟細胞中T-bet表達明顯降低，GATA-3表達顯著升高，說明艾灸干預后大鼠T細胞分化向著Th2分化，同時抑制向Th1細胞分化，Th1/Th2功能基本恢復正常。

由此可見，艾灸足三里、脾俞、腎俞、命門、大椎等腧穴可以抑制RA大鼠T細胞向Th1細胞分化，降低T-bet轉錄，抑制促炎因子分泌，減輕炎性反應，阻止滑膜下層內皮細胞腫脹、內皮小靜脈形成等病變；促進RA大鼠T細胞向Th2細胞分化，促進GATA3轉錄，加快抗炎因子分泌，上調T細胞耐受性，抑制RA發生發展，恢復RAThl/Th2功能失衡。

參考文獻

[1]葛均波，徐永健.內科學[M].第8版.北京:人民衛生出版社,2013.

[2]郭明，安高，封桂英，等.CD4+T細胞亞群在類風濕性關節炎中的研究進展[J].細胞與分子免疫學雜志，2014,30(9):1 004-1 007.

[3]房繄恭.針灸對類風濕性關節炎信號轉導分子調節作用的研究進展[J].中醫藥學刊,2006，24(8)：1 447-1 449.

[4]蘇暢，張成義，韓慧明，等．佐劑性關節炎的佐劑劑量條件探索[J].北華大學學報(自然科學版)，2001，2(4):306-307．

[5]周志剛，陳麗旦，鄒樹仁，等.左歸丸對陰虛陽亢大鼠Th1/Th2細胞漂移特異性轉錄因子T-bet及GATA-3 mRNA的干預作用[J].遼寧中醫藥大學，2010，12(4)：52-54.

[6]章婷婷,王念宏.艾灸治療類風濕性關節炎臨床與實驗研究[J].針灸臨床雜志，2007，23(8)：69-70.

[7]李學勇，喻建平.中醫藥治療類風濕性關節炎研究進展[J].實用中西醫結合臨床，2007，7(1)：87-88.

[8]謝宇峰，陳赟，馮軍，等.艾灸預處理對胃黏膜細胞調控作用的研究進展[J].江西中醫藥，2014,45(9):72-75.

[9]李迎紅，李敏，郭義，等.從“穴感經傳”看腧穴放大效應[J].中國針灸，2013，33(10)：910-912.

[10]郝鋒，胡玲，羅磊，等．隔姜灸對活動期類風濕關節炎臨床療效的影響[J].中醫藥臨床雜志，2011，23(4):313-316.

[11]張鐳瀟，吳佳，蘭穎，等．針灸治療類風濕關節炎臨床及機理研究進展[J].黑龍江中醫藥，2013，42(1):51-52．

[12]Boissier MC．Cell and cytokine imbalances in rheumatoid synovitis[J].Joint Bone Spine，2011，78(3):230-234．

[13]Rengarajan J, Szabo SJ, Glimcher LH.Transcriptional regulation of Th1/Th2polarization. Immunol Today, 2000,21:479-483.

[14]Ruschpler P,Stiehl P.Shift in Th 1(IL-2 and IFN-gamma)and Th2 (IL-10 and IL-4)cytokine mRNA balance within two new histological main-types of rheumatoid arthritis(RA)[J].Cell Mol Biol,2002,48(3):285-293.

[15]程惠麗,郭君.Thl/Th2細胞因子平衡與類風濕關節炎的研究進展[J].吉林醫學,2006,27(3):334.

[16]羅磊，胡玲，宋小鴿，等.艾灸對類風濕關節炎模型大鼠跖關節中細胞因子的影響[J].環球中醫藥，2011，4(6):416-419．

[17]Fields PE,kini ST,Flavell NA .Cutting edge:changes in histone acetylation at the IL-4 and IFN-γ loci accompany Th1/Th2 differenitation[J].J Immunol ,2002,169(2):647-650.

[18]魏海明.Th1/Th2極化：轉錄因子的作用[J].上海免疫學雜志，2001，21(6)：379-381.

[19]秦衛兵.Th1和Th2細胞在體內的分化[J].國外醫學免疫學分冊,2002，25(1)：42-46.

[20]張琦，董莉，李麗珍，等.以T-bet/GATA-3的比率作為評價哮喘患者Th1/Th2失衡指標的探討[J].細胞與分子免疫學雜志，2005，21(1):118-190.

(收稿日期：2015-03-03)編輯：王河寶

*基金項目：江西省衛生和計劃生育委員會(原江西省衛生廳)資助(2009A055)。

中圖分類號：R245.81

文獻標識碼：B