制藥工程專業實驗開發
——鞣質的提取與含量測定

張延萍 牛睿祺 周冬菊

（河南科技大學化工與制藥學院 河南洛陽 471023）

制藥工程專業實驗開發
——鞣質的提取與含量測定

張延萍 牛睿祺 周冬菊

（河南科技大學化工與制藥學院 河南洛陽 471023）

以杠板歸為原料，70%丙酮提取，采用磷鉬鎢酸-干酪素比色法測定鞣質含量。在磷鉬鎢酸溶液的配制過程中，使用溴水替代液溴；在含量測定時，使用26%碳酸鈉溶液替代29%碳酸鈉溶液。通過本實驗教學改革，為制藥工程專業提供一個新的實驗項目。

杠板歸 磷鉬鎢酸-干酪素 鞣質 制藥工程實驗

教改實驗在深化教育改革、全面提高教育質量方面起著至關重要的作用，受到教育界的高度重視。開發新的實驗項目或新的試驗方法是很有必要的［1］。

鞣質是植物的次生代謝產物，廣泛存在于植物界中，據統計約70%以上的生藥中含有鞣質類成分。在醫藥領域，最初鞣質成分被認為僅有收斂及蛋白質凝固作用，臨床用于止血，止瀉及抗菌抗病毒［2］。近30年，由于新技術，新方法的應用，鞣質的研究取得重大進展，還發現其具有抗突變、抗脂質過氧化、清除自由基、抗腫瘤、抗艾滋病與降血糖等多種藥理活性［3］。尤其在抗腫瘤治療中顯示出了誘人的前景。

在制藥工程專業實驗中，涉及的天然產物成分有黃酮、生物堿、香豆素、多糖、揮發油等，鞣質未有涉及［4］，本研究旨在開發切實可行、操作簡便的學生實驗。

一、實驗部分

1.實驗目的

1.1 掌握標準曲線的繪制方法

1.2 掌握磷鉬鎢酸-干酪素法測定鞣質含量的原理及方法

2.實驗原理

鞣質，是存在于植物體內的一類結構比較復雜的多元酚類化合物。其理化性質如下：

2.1 物理性質

2.1.1 性狀：鞣質多為無定形粉末，呈米黃色、棕色、褐色等，具有吸濕性（很難結晶）。

2.1.2 溶解性：鞣質具有較強的極性，溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等親水性溶劑，可溶于乙酸乙酯、乙醚同乙醇混合物，難溶或不溶于無水乙醚、無水氯仿等親油性溶劑

2.2 化學性質

2.2.1 還原性：易被氧化，具有較強的還原性，可以與菲林試劑及福林試劑反應。

2.2.2 與蛋白質作用：可與蛋白質結合生成不溶于水的復合物沉淀。利用此性質，可使獸皮的蛋白質形成致密、柔韌、難以透水的皮革。

2.2.3 與三氯化鐵作用：鞣質的水溶液可與三氯化鐵作用呈藍黑色或綠黑色。藍黑墨水的制造就是利用鞣質的這一性質。

2.2.4 與生物堿作用：因具有酸性，可與生物堿結合生成難溶于水的沉淀。

2.2.5 與鐵氰化鉀的氨溶液作用：鞣質的水溶液與鐵氰化鉀氨溶液反應呈深紅色，并很快變成棕色［5］。

鞣質的量=總多酚-不被吸附的多酚

2.3 主要儀器

中草藥粉碎機、50目篩、恒溫水浴鍋、UV1200型紫外可見分光光度計、萬分之一天平、百分之一電子天平、棕色容量瓶（250mL×1個，50mL×1個，25mL×6個）、白色容量瓶（1000mL×1個）、圓底燒瓶（1000mL×1個，100mL×1個）、冷凝管、移液管（10mL×1個，5mL×7個，1mL×2）個，100mL量筒、燒杯（1000mL×1個，200mL×1個，50mL×2個）、100mL具塞錐形瓶、三角漏斗、布氏漏斗和1000mL抽濾瓶。

2.4 試劑

丙酮、鎢酸鈉、鉬酸鈉、硫酸鋰、鹽酸、磷酸、溴水、三氯化鋁（結晶）、結晶乙酸鈉、甲醇、無水碳酸鈉均為分析純；干酪素（生化試劑）；沒食子酸對照品（中國藥品生物制品鑒定所）；市售杠板歸藥材。

2.5 溶液的配制

2.5.1 對照品溶液的制備

精密稱取沒食子酸對照品25mg，置50mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5mL，置50mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.05mg·mL-1的對照品溶液。

2.6 標準曲線繪制

精密量取濃度為0.05mg·mL-1的沒食子酸對照品溶液1、1.5、2、2.5、3mL，分別置于25ml棕色容量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加入水11、10.5、10、9.5、9mL，用26%（質量/體積）碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，常溫放置30min，同時以相應的試劑為空白，在760nm處測定吸光度。以沒食子酸溶液濃度為縱坐標，以吸光度為橫坐標，繪制標準曲線。

2.7 鞣質含量測定

2.7.1 總酚測定方法

精密量取0.5mL供試品溶液，置于25mL棕色容量瓶中，各加磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加水11.5mL，用26%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，常溫放置30min，同時以相應的試劑為空白，在760nm處測定吸光度。計算總酚含量。

二、結果與討論

1.溶液的制備

磷鉬鎢酸試液藥典采用加0.2ml液溴煮沸［6］，溶液由墨綠色轉為鵝黃色，由于液溴容易揮發并且毒性較大，本實驗采用20ml溴水替代，可以達到滿意效果。如放置后變為綠色，可加溴水適量，煮沸出去多余的溴即可。

2.標準曲線的繪制

以吸光度為橫坐標，以沒食子酸濃度（mg·ml-1）為縱坐標，繪制標準曲線，經回歸分析，回歸方程為：C=0.009A-0.001，r=0.999，沒食子酸在0.001～0.006 mg·ml-1范圍內有良好的線性關系。在溶液配的準，儀器穩定的情況下，此法相關系數可以達到三個9以上。

三、結語

本實驗通過70%丙酮提取，磷鉬鎢酸-干酪素比色法測定杠板歸中鞣質含量。磷鉬鎢酸溶液配制時，采用溴水代替液溴；含量測定時采用26%碳酸鈉溶液代替29%碳酸鈉溶液。實驗操作簡便可行，可以讓學生掌握鞣質的理化性質、掌握標準曲線的繪制及紫外分光光度計的使用。此實驗試劑簡單易得，是適合制藥工程專業實驗的綜合實驗項目。

［1］雷解民，陳國先.對教改實驗復雜性和方法論的思考［J］.中國教育學刊，2001，5:47-51

［2］杜國成.中藥鞣質成分的藥理作用探析［J］.中國醫藥科學，2011，1（16）:27，28

［3］于占洋，金哲雄.鞣質抗氧化作用研究進展 ［J］.黑龍江醫藥，2014，1（26）:985，986

［4］天津大學等編.制藥工程專業實驗指導 ［M］.北京:化學工業出版社，2005.

［5］匡海學主編.中藥化學 ［M］.北京:中國中醫藥出版社，2011:337-338

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 ［M］.一部.北京:化學工業出版社，2005:

張延萍，女，1974年生，博士，副教授，河南科技大學制藥工程系主任，副主編出版《伏牛山藥用植物志》系列著作。

本研究獲河南科技大學實驗開發基金資助，項目號：SY1213027