高效液相色譜法測定辛芩片中黃芩苷含量

李沉紋，程 猷，胡大強，向明鳳，徐 靖，宋宏宇，劉 冰，盧來春

（中國人民解放軍第三軍醫大學第三附屬醫院·野戰外科研究所藥劑科，重慶 400042）

高效液相色譜法測定辛芩片中黃芩苷含量

李沉紋，程 猷，胡大強，向明鳳，徐 靖，宋宏宇，劉 冰，盧來春

（中國人民解放軍第三軍醫大學第三附屬醫院·野戰外科研究所藥劑科，重慶 400042）

目的建立測定辛芩片中黃芩苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4．6 nm，5 m），流動相為甲醇-0．1%磷酸水-三乙胺（57∶43∶0．1），檢測波長為280 nm。結果 黃芩苷質量濃度在1．971～19．71 mg／L范圍內與峰面積呈良好的線性關系，r=0．999 9，平均加樣回收率為103．01%，RSD=1．84%（n=9）。結論該方法簡便、專屬、重復性好，可有效控制辛芩片的質量。

辛芩片；高效液相色譜法；黃芩苷；質量標準

過敏性鼻炎（AR）是由特應性個體接觸變應原，激發IgE介導的介質釋放而引起的鼻黏膜Ⅰ型變態反應性疾病，西醫主要采用抗組胺藥物、糖皮質激素、減輕充血藥物、色甘酸鈉等藥物以及特異性免疫脫敏等療法，但存在復發率高、根治困難、不良反應較大的問題。中醫多在補益肺氣、固表護衛、溫肺散寒、益氣健脾、溫運中陽的原則指導下，以補中益氣湯、玉屏風散、溫肺止流丹等方藥為主加減治療[1]，具有一定的優勢。目前，治療過敏性鼻炎的中藥復方制劑包括辛芩片、玉屏風散、芳香通竅丸等[2-3]。辛芩片是最常用、有效的藥物[4]，由黃芩、細辛、辛夷、防風等數味中藥研制而成。為控制該藥的質量，現對其主藥黃芩中黃芩苷的含量測定方法進行了研究，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200系列高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ-500E型醫用超聲波清洗器；BT25S型電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；ULUP-III-10T型觸摸屏高端超純水器（成都優普電子產品有限公司）。黃芩苷對照品（批號為110715-201318，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。辛芩片（四川志遠廣和制藥有限公司，批號為140702）。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4．6 nm，5 μm）；流動相：甲醇-0．1%磷酸水-三乙胺（57∶43∶0．1）；柱溫：30℃；檢測波長：280 nm；流速：1 mL／min；進樣量：10 μL。

2．2 溶液配制

稱取黃芩苷對照品10．23 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，靜置，即得質量濃度為0．102 3 g／L的對照品溶液。取辛芩片10片，研細，稱取0．5 g，精密稱定，加50%甲醇40 mL，超聲處理20 min，加50%甲醇定容于50 mL容量瓶中，搖勻，靜置，即得供試品溶液。按辛芩片處方比例取缺黃芩的方中其他藥材制成溶液，再按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

專屬性試驗：分別取2．2項下3種溶液及提取溶劑各10 μL，按2．1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果顯示，供試品溶液色譜中黃芩苷與其他雜質色譜分離度良好，陰性對照品溶液色譜在黃芩苷色譜峰相應位置處無干擾（見圖1）。因此，黃芩苷含量作為指標，可很好地控制該制劑的質量。

線性關系考察：稱取黃芩苷對照品19．71 mg，精密稱定，用甲醇定容于100 mL容量瓶中，超聲1 mim，使其完全溶解，再用甲醇補齊至刻度，搖勻，靜置，即得質量濃度為0．197 1 g／L的溶液，精密吸取，置10 mL容量瓶中，配制成6個不同梯度的對照品溶液（質量濃度分別為0．019 71，0．015 768，0．009 855，0．007 884，0．005 913，0．003 942，0．001 971 g／L），按2．1項下色譜條件進樣分析。以峰面積（Y）為縱坐標、質量濃度（X）為橫坐標（g／L）進行線性回歸，得回歸方程 Y=317 756．832 17 X-19．569 66，r=0．999 9（n=7）。結果表明，黃芩苷質量濃度在1．971～19．71 mg／L范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

進樣量精密度試驗：取同一對照品溶液，在2．1項下色譜條件連續進樣6次，測定峰面積。結果的 RSD=0．09%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同批樣品，依法配制供試品溶液6份并測定黃芩苷的含量。結果的 RSD小于0．52%（n=6），表明方法重復性良好。

日內、日間精密度試驗：取同一對照品溶液適量，分別于同日內3個時間點以及3 d內測定。結果日內精密度的 RSD=0．5%（n=6），日間精密度的 RSD=1．2%（n=6）。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品，精密稱定，置100 mL容量瓶中，平行3份，分別精密加入黃芩苷對照品（0．102 3 g／L）3 mL，用50%甲醇定容，按供試品溶液制備方法，制備待測溶液，按2．1項下色譜條件進樣測定黃芩苷含量，計算回收率。結果見表1。

圖1 辛芩片高效液相色譜圖

表1 黃芩苷加樣回收試驗結果（n=9）

定量限確定：將黃芩苷對照品溶液進行稀釋，以信噪比約為10∶1確定其定量限。結果黃芩苷的定量限為2．98 ng。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12 h時依法進樣分析，以黃芩苷峰面積計算。結果的 RSD為 0．75%（n=6），表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2．4 樣品含量測定

分別取3批樣品，依法制備供試品溶液，按2．1項下色譜條件進樣分析。結果見表2。

表2 辛芩片中黃芩苷的含量測定結果（n=3，g／g）

3 討論

現代藥理學研究表明，辛芩片能明顯緩解鼻部癥狀以及鼻黏膜病理改變，抑制組胺所致的鼻黏膜毛細血管通透性增加，顯著降低鼻超敏感應模型中鼻黏膜組胺的含量并抑制一氧化氮合酶（NOS）的活性[4]。辛芩片樣品成分復雜，其中黃芩為君藥，對其療效起重要作用。黃芩是唇形科植物黃芩的干燥根，藥性苦寒，具有清熱燥濕、安胎、瀉火解毒、止血等功效[5]。黃芩所含黃酮類成分包括黃芩素、黃芩苷、漢黃芩苷、漢黃芩素、野黃芩苷等，均是其主要藥效成分[6]。黃芩苷等黃酮類成分具有免疫調節、抗氧化、抗腫瘤、抗菌、抗過敏、保護心血管系統及保肝等作用[7-8]。

目前，黃芩苷的質量控制方法主要為高效液相色譜-紫外檢測法、近紅外漫反射光譜法及液質聯用法等[9-11]，而采用高效液相色譜法不經分離，直接測定其中黃芩苷的含量，方法簡便快速，結果可靠。本試驗中采用高效液相色譜-紫外檢測法對辛芩片中黃芩苷進行了定量測定，該方法前處理條件簡單、快速，測定結果準確可靠，重復性好，實用性強。因此，以黃芩苷為定量監控指標，可有效控制辛芩片的質量。

[1]楊麗珍，余邦良．過敏性鼻炎藥物治療新進展[J]．藥學與臨床研究，2013，21（5）：543-546．

[2]程 堅，蔡外嬌，張新民．中醫藥治療變應性鼻炎辨證用藥特點及分析[J]．中華中醫藥雜志，2012，27（7）：1 947-1 950．

[3]范愈燕，支 楠，張 羅．中草藥治療過敏性鼻炎概況[J]．中醫臨床研究，2013，5（1）：112-115．

[4]曾旭東，何源萍，嚴福波，等．Nd：YAG激光聯合辛芩片治療變應性鼻炎的療效觀察[J]．中國中西醫結合耳鼻咽喉科雜志，2010，18（2）：82-83．

[5]張 瑜，武 斌．黃芩藥理作用的研究進展[J]．醫學綜述，2013，19（6）：1 091-1 093．

[6]王孟華，曲 瑋，梁敬鈺 ．黃芩的研究進展[J]．海峽藥學，2013，25（9）：6-13．

[7]雷 芳．黃芩苷藥理作用研究進展[J]．中國藥業，2010，19（15）：87-88．[8]辛文妤，宋俊科，何國榮，等．黃芩素和黃芩苷的藥理作用及機制研究進展[J]．中國新藥雜志，2013，22（6）：647-653．

[9]張啟云，徐良輝，李冰濤，等．HPLC法同時測定葛根芩連湯中8種有效成分的含量[J]．藥物分析雜志，2011，31（7）：1 425-1 429．

[10]王德寬，皮德艷，潘鵬飛．高效液相色譜法同時測定消炎片中黃芩苷與黃芩素含量[J]．中國藥業，2012，21（8）：48-49．

[11]焦 燕，王英鋒，劉鎖蘭．LC-MS／MS法同時測定不同產地半枝蓮中野黃芩苷和芹菜素含量[J]．藥物分析雜志，2009，29（9）：1451-1452．

Determination of Baicalin Content in Xinqin Tablet by HPLC

Li Chenwen，Cheng You，Hu Daqiang，Xiang Mingfeng，Xu Jing，Song Hongyu，Liu Bing，Lu Laichun
（Department of Pharmacy，Third Affiliated Hospital，Research Institute of Surgery，Third Military Medical University，Chongqing，China 400042）

Objective To establish a high performance liquid chromatography(HPLC)method for the determination of the baicalin content in Xinqin Tablet．M ethods The Diamonsil C18column（250 mm×4．6 nm，5 μm）was used．The mobile phase was methanol-0．1% phosphoric acid-triethylamine（57∶43∶0．1）．The detection wavelength was 280 nm．Results The linear range of baicalin was 1．971-19．71 mg／L（r=0．999 9）．Theaverage recovery rate was 103．01%，RSD=1．84%（n=9）．Conclusion Theestablished method is simple，specific and better repeatable，which can effectively control the quality of Xinqin Tablet．

Xinqin Tablet；HPLC；baicalin；quality standards

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2015)04－0041－02

李沉紋（1987-），女，重慶人，碩士研究生，藥師，研究方向為藥物新劑型，（電話）023-68898867（電子信箱）lichenwen87＠163．com；盧來春（1973-），男，山東人，博士研究生，副主任藥師，研究方向為創新藥物研究，本文通訊作者，（電話）023-68757092（電子信箱）lulaicq＠163．com。

2014－09－13；

2014－11－13)

重慶市衛生局中醫藥科技項目，項目編號：2012-2-22。