嗜麥芽窄食單胞菌TopoⅡα耐藥途徑阻斷后的藥敏結果分析*

林列坤，劉 青，趙志敏，吳祥林，張 松，楊菊紅

(廣東省深圳市光明新區人民醫院檢驗科 518106)

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·論 著·

嗜麥芽窄食單胞菌TopoⅡα耐藥途徑阻斷后的藥敏結果分析*

林列坤，劉 青，趙志敏，吳祥林，張 松，楊菊紅

(廣東省深圳市光明新區人民醫院檢驗科 518106)

目的 探討多重藥耐藥醫院獲得性嗜麥芽窄食單胞菌(SMA)耐藥途徑阻斷后的藥敏情況，為其臨床治療與合理用藥提供試驗依據和思路。方法 選取2013年11月至2014年10月臨床分離的SMA 87株作為監測對象，通過阻斷SMA耐藥性的TopoⅡα途徑，來觀察其對醫院獲得性SMA多重藥耐藥性的生長、增殖及轉移的抑制作用。結果 SMA菌株檢測在呼吸科檢出率最高，為25.29%，高于其他科室來源菌株檢出率；在痰液中檢出率最高，為35.63%，高于其他標本類型菌株，差異均有統計學意義(P<0.05)；阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前，87株SMA的藥敏檢測結果顯示，對復方磺胺甲噁唑的敏感率最高，為87.36%；對亞胺培南耐藥率最高，為100.00%，分別高于其他抗菌藥物的敏感率和耐藥率，差異均有統計學意義(P<0.05)；阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑后，SMA對亞胺培南耐藥率最高，為83.91%；對復方磺胺甲噁唑的敏感率最高，為94.25%，與阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前比較，差異無統計學意義(P>0.05)；氨曲南、頭孢吡肟、亞胺培南的敏感性較阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前增加，耐藥性下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。結論 通過阻斷SMA耐藥性的TopoⅡα途徑來沉默基因的表達，對醫院獲得性SMA耐藥性的生長、增殖及轉移有一定抑制作用，值得臨床推廣。

多重耐藥； 醫院獲得性； 嗜麥芽窄食單胞菌； 耐藥機制

嗜麥芽窄食單胞菌(SMA)作為院內感染的重要病原菌之一，近年來明顯呈上升趨勢，且多重耐藥現象嚴重，其根本原因與還未能完全闡明多重藥耐藥醫院獲得性SMA的耐藥機制有關[1]。因此，本研究通過阻斷SMA耐藥性的TopoⅡα途徑來沉默基因的表達，觀察能否有效抑制醫院獲得性SMA耐藥性的生長、增殖及轉移，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年11月至2014年10月臨床各科室負責采集和送檢的SMA 87株作為監測對象，采用MicroScan WalkAway-40全自動微生物鑒定儀對所有菌株進行SMA鑒定。

1.2 方法及指標 對87株耐藥性SMA進行基因沉默轉導體系的設計、合成，根據Genbank數據庫中提供的SmeDEF、SmeABC序列，β-內酰胺酶即 Ll和L2酶序列和aac(6)2IZ序列，由中山大學達安基因股份有限公司利用計算機軟件設計合成10條siRNA序列；以shRNA的TopoⅡα質粒為載體分別和上述10種siRNA序列相連，構建10種質粒，然后分別轉染SMA菌株[2]。利用實時熒光定量PCR技術，在細胞分子水平通過阻斷SMA耐藥性的TopoⅡα途徑來沉默基因的表達；觀察基因沉默前后，醫院獲得性SMA多重藥耐藥性的情況。

1.3 藥敏試驗 藥敏試驗采用K-B試驗法進行，選擇藥敏紙片(英國Oxoid 公司生產)，抗菌藥物種類根據本院臨床常用確定氨曲南、頭孢他啶、替卡西林/克拉維酸、左氧氟沙星、米諾環素、復方磺胺甲噁唑等12種，選擇大腸埃希菌(ATCC 25922)和銅綠假單胞菌(ATCC 27853)為質控菌株。試驗結果判讀按2012年美國臨床實驗室標準化協會(CLSI) 推薦鑒定和檢測多重藥耐藥醫院獲得性SMA菌株的標準進行[3]。

2 結 果

2.1 SMA的菌株檢測結果 SMA菌株檢測在呼吸科檢出率最高，為25.29%，高于其他科室來源菌株檢出率；在痰液中檢出率最高，為35.63%，高于其他標本類型菌株，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 SMA的菌株檢測結果[n(%)]

注：與其他比較，*#P<0.05。

2.2 阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前87株SMA的藥敏檢測結果 阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前，87株SMA的藥敏檢測結果顯示對復方磺胺甲噁唑的敏感率最高，為87.36%，對亞胺培南耐藥率最高，為100.00%，分別高于其他抗菌藥物的敏感率和耐藥率，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑后SMA的藥敏檢測結果 阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑后，SMA對亞胺培南耐藥率最高，為83.91%；對復方磺胺甲噁唑的敏感率最高，為94.25%，與阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前比較，差異無統計學意義(P>0.05)；氨曲南、頭孢吡肟、亞胺培南的敏感性較阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前增加，耐藥性下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表2 阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前SMA的藥敏

注：-表示無數據。

表3 阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑后SMA的

注：與阻斷前比較，*#P<0.05；-表示無數據。

3 討 論

SMA可引起醫院獲得性肺炎、皮膚軟組織感染和尿道感染，嚴重者可引起導致心內膜炎和菌血癥的發生[4]。且醫院獲得性SMA患者的多重耐藥現象十分嚴重，并未隨著抗菌藥物的不斷更新而減輕[5]。如何特異性地阻斷醫院獲得性SMA耐藥途徑，有效抑制醫院獲得性SMA的生長及增殖，亟待進一步研究。

在醫院獲得性SMA多重藥耐藥的發生發展中，各種耐藥基因(轉換因子)可能起重要作用[6]：染色體遺傳基因介導的天然或突變產生的耐藥；質粒介導的耐藥性，所攜帶耐藥基因易于傳播；醫院中長期大量使用抗菌藥物，對許多耐藥菌株的產生起促進作用。

醫院獲得性SMA外膜具有低滲透性特點，對多種抗菌藥物天然耐藥[7]。該菌主動外排系統 SmeDEF可對大環內脂類、喹諾酮類、四環素等進行外排，SmeABC的菌株表達則對β-內酰胺酶、喹諾酮類和氨基糖苷類的耐藥性增強[8]。碳青霉烯類或頭孢菌素類抗菌藥物進入人體內后會迅速誘導SMA產生Ll和L2酶。L1型酶屬β-內酰胺酶3型，表現為對碳青霉烯類抗菌藥物高度耐藥；L2型酶屬β-內酰胺酶2e型，能水解青霉素類和頭孢菌素類抗菌藥物，克拉維酸可抑制其活性[9]。SMA菌臨床株可有染色體上存在aac (6) 2IZ基因的氨基糖苷類等修飾酶，可使菌株對阿米卡星尤其妥布霉素耐藥。

自發現RNA干涉(RNAi)作用后，其一直受到關注，并發展成為對特定基因功能實施關閉的新技術[10]。近幾年RNAi研究領域發展迅速，目前RNAi已經成為篩選新基因、探索基因功能和尋找有效藥物靶位的重要工具，利用短發卡結構RNA的質粒載體系統 psilence4.1-拓撲異構酶Ⅱα(TopoⅡα)，篩選出對目的基因沉默效果最佳 的iRNA序列，從而對SMA耐藥性的生長、增殖及轉移產生影響[11]。

本研究發現，阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑后，SMA對亞胺培南耐藥率最高，為83.91%，對復方磺胺甲噁唑的敏感率最高，為94.25%，與阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前比較，差異無統計學意義(P>0.05)，但對亞胺培南耐藥率有所下降，對復方磺胺甲噁唑的敏感率有所上升；氨曲南、頭孢吡肟、亞胺培南的敏感性較阻斷SMA耐藥性TopoⅡα途徑前增加，耐藥性下降，差異均有統計學意義(P<0.05)，提示通過阻斷SMA耐藥性的TopoⅡα途徑來對基因表達進行沉默，對SMA耐藥性的生長、增殖及轉移有一定抑制作用。

綜上所述，通過阻斷SMA耐藥性的TopoⅡα途徑來沉默基因的表達，對醫院獲得性SMA耐藥性的生長、增殖及轉移有一定抑制作用，值得臨床推廣。

[1]郝會青，胡利民.嗜麥芽窄食單胞菌醫院感染分布及耐藥性分布[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(4):414-417.

[2]Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI)．Perfor-malice standards for antimicrobial susceptibility testing Standards：twentieth Informational Supplement[S]．M100-S20，2010.

[3]艾效曼，胡云建，俞云松，等.中國CHINET嗜麥芽窄食單胞菌耐藥性監測[J]．中國感染與化療雜志，2012，12 (2)：105-109．

[4]平天洲．淺談呼吸機相關性肺炎的臨床分析[J]．中國醫藥指南,2012，10(14)：71-72.

[5]胡亞蘭，張彥華，韋慧玲.我院2007～2009年臨床檢出細菌分布及藥敏結果分析[J].中國現代藥物應用，2010，4(10)：111-113.

[6]胡雪梅．我院醫院獲得性嗜麥芽窄食單胞菌的臨床耐藥分布[J]．實用心腦血管病雜志，2011，19(12)：2113.

[7]吳錦，胡立芬，沈為華，等．嗜麥芽窄食單胞菌基因同源性分析的臨床耐藥分布[J]．安徽醫藥，2013，17(1)：43-45.

[8]胡田雨．嗜麥芽窄食單胞菌感染的危險因素及耐藥性分析[J]．中國感染與化療雜志，2014，14(2)：112-115.

[9]錢耀先，王燕,胡忠惠,等.嗜麥芽窄食假單胞菌64株臨床分布及耐藥分析[J]．現代診斷與治療,2012,28(7):956-957.

[10]李雷，劉健，劉靜．嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥現狀及臨床藥物選擇[J]．臨床合理用藥，2013，6(5)：83-84.

[11]劉燦．嗜麥芽窄食單胞菌對磺胺類抗菌藥物耐藥機制的研究進展[J]．安徽醫藥，2014，18(5)：961-963.

Analysis on drug susceptibility results after blocking TopoⅡα drug resistance pathway in Stenotrophomonas maltophilia*

LINLie-kun,LIUQing,ZHAOZhi-min,WUXiang-lin,ZHANGSong,YANGJu-hong

(DepartmentofClinicalLaboratory,GuangmingNewDistrictPeople′sHospital,Shenzhen,Guangdong518106,China)

Objective To investigate the drug susceptibility situation after blocking TopoⅡα drug resistance pathway in multi-drug resistant hospital-acquired Stenotrophomonas maltophilia (SMA) to provide the experimental evidence and thinking for its clinical treatment and rational drug use.Methods 87 clinically isolated strains of SMA in our hospital from November 2013 to October 2014 were selected as the monitoring objects.By blocking the Topo Ⅱα pathway of SMA drug-resistance,its inhibiting role on the SMA growth,proliferation and transferring was observed.Results The detection rate of SMA strain was highest(25.29%) in the respiration department,which was higher than the detection rate in the other departments;the highest detection rate was in sputum(35.63%),which was higher than that in the other types of specimen,the difference was statistically significant(P<0.05);before blocking the SMA drug-resistance Topo Ⅱα pathway,the drug susceptibility test results of 87 strains of SMA displayed that the sensitive rate to compound sulfamethoxazole was highest(87.36%) and the resistance rate to imipenem was highest (100.00%),which were higher than the sensitivity rate and resistance rate of other antibacterial drugs respectively,the differences were statistically significant(P<0.05);after blocking the SMA drug resistance Topo Ⅱα pathway,SMA had the highest resistance rate to imipenem(83.91%) and the highest sensitive rate(94.25%) to compound sulfamethoxazole,the differences had no statistical significance compared with before blocking (P>0.05);while the its sensitivity to aztreonam,cefepime and imipenem was increased comparing with before blocking the SMA drug resistance Topo Ⅱα pathway,and the drug resistance was dropped,the differences were statistically significant(P<0.05).Conclusion Silencing gene expression by blocking the Topo Ⅱα pathway of SMA has certain inhibitory effect on the growth,proliferation and transferring of hospital acquired SMA,which is worthy of clinical promotion.

multidrug-resistant; hospital-acquired; Stenotrophomonas maltophilia; resistance mechanisms

廣東省深圳市科技計劃項目(201303253)。

林列坤，女，本科，副主任技師，主要從事臨床醫學檢驗研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.011

A

1672-9455(2015)17-2510-03

2015-03-15

2015-04-18)