脂聯素過表達對小鼠炎性因子的影響*

郝 坡，孟凡萍

(1.重慶三峽醫藥高等?？茖W校醫學技術系,重慶 404120;2.重慶三峽中心醫院檢驗科，重慶 404000)

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·論 著·

脂聯素過表達對小鼠炎性因子的影響*

郝 坡1，孟凡萍2△

(1.重慶三峽醫藥高等?？茖W校醫學技術系,重慶 404120;2.重慶三峽中心醫院檢驗科，重慶 404000)

目的 用攜帶小鼠脂聯素的基因過表達質粒轉染小鼠，研究小鼠血漿脂聯素及炎性因子分泌的影響。方法 用本課題組前期構建好的小鼠pcDNA3.1-Acrp30基因過表達質粒經股四頭肌注入C57BL/6J小鼠體內，72 h后檢測小鼠血漿脂聯素表達情況，并測定其血漿白細胞介素-2、白細胞介素-3、白細胞介素-6、白細胞介素-8和腫瘤壞死因子-α的分泌水平。結果 pcDNA3.1-Acrp30過表達載體轉染小鼠后，其血漿脂聯素水平顯著增高，血漿炎性因子分泌則顯著下調。結論 構建的小鼠Acrp30基因過表達載體能有效地增強脂聯素在小鼠體內的表達，并能拮抗炎性因子的分泌。

脂聯素； 過表達； 炎性因子

脂肪組織作為一個新近發現的內分泌器官，可分泌多種細胞因子。這些因子在胰島素抵抗及2型糖尿病(T2DM)發病機制中起著重要作用。脂聯素(Acrp30)也由脂肪組織分泌，在抗動脈粥樣硬化調節糖脂代謝、改善胰島素抵抗等方面具有廣泛的生理功能，與糖尿病有密切的關系。本研究著重探討其抗炎作用，首先將構建的小鼠Acrp30基因過表達質粒導入C57BL/6J小鼠體內，觀察后者血漿Acrp30的水平，并檢測其對小鼠炎性因子分泌的影響，旨在進一步探討Acrp30在脂代謝紊亂發生和發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 Acrp30基因過表達載體為本課題組前期構建并保存；C57BL/6J小鼠購自重慶醫科大學實驗動物中心；酶聯免疫吸附法(ELISA)小鼠Acrp30檢測試劑盒購自德國Phoenix公司；炎性因子檢測試劑購自美國BD公司。

1.2 動物分組及處理 C57BL/6J小鼠20只，8周齡，隨機分為pcDNA3.1(+)空質粒注射組(NC組,n=10)，pcDNA3.1-Acrp30重組真核表達質粒注射組(PA組,n=10)，空載及表達質粒(1 mg/kg)注射于小鼠股四頭肌。于注射前及注射后72 h采集空腹尾靜脈血，分離血漿。

1.3 小鼠血漿Acrp30測定 采用ELISA法測定小鼠血漿Acrp30水平，操作按照ELISA試劑盒說明書進行。以系列水平Acrp30標準品繪制A450標準曲線，根據標準曲線計算Acrp30水平。

1.4 小鼠血漿炎性因子水平測定 采用流式細胞法測定小鼠血漿白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-3(IL-3)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，操作按照BD公司炎性因子測定試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.1 小鼠血漿Acrp30分泌水平變化 小鼠血漿Acrp30 ELISA測定結果，見表1。質粒注射后PA組血漿Acrp30水平較注射前均升高(P<0.05),而NC組在注射前后差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 小鼠血漿Acrp30分泌水平變化情況

續表1 小鼠血漿Acrp30分泌水平變化情況

2.2 小鼠血漿炎性因子分泌水平變化 小鼠血漿IL-2、IL-3、IL-6、IL-8及TNF-α流式細胞儀測定結果，見表2。質粒注射后PA組血漿5項指標水平較注射前均降低(P<0.05),而NC組在注射前后差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 小鼠血漿炎性因子分泌水平變化情況±s，n=20)

3 討 論

肥胖、糖尿病、代謝綜合征等代謝性疾病患者都伴隨炎性反應，作為內分泌器官，脂肪細胞可以分泌大量的細胞因子，其中包括Acrp30，這些細胞因子接受外界信號并對之產生反應，從而調節食欲、胰島素敏感性、炎性反應等過程。

Acrp30是一種與胰島素抵抗密切相關的細胞因子，主要由脂肪細胞分泌，與受體(AdipoR1、AdipoR2)結合后具有增強胰島素敏感性、抗高血糖、抗動脈粥樣硬化等生物作用[1-3]。另有研究表明，低Acrp30血癥是動脈粥樣硬化發生的獨立危險因素，隨著動脈粥樣硬化的發展，血漿Acrp30水平呈進行性下降趨勢[4]。對人體的研究發現，Acrp30水平能預示T2DM和冠心病的發展，并在臨床試驗中表現出抗糖尿病、抗動脈粥樣硬化和炎性反應的潛力[4-5]。Acrp30通過激活蛋白激酶A(PKA)信號通路，使TNF-α介導的核因子-κB(NF-κB)的活化受到抑制，從而減輕內皮細胞的炎性反應[6]。對體質量指數(BMI)正常和異常人群中IL-6、IL-10、TNF-α與Acrp30關系的研究表明，BMI高的人群Acrp30表達顯著降低，IL-6和TNF-α水平則升高，相反，IL-10水平則顯著下降[7]。可以抑制人的白細胞產生IL-10，下調巨噬細胞中前炎性細胞因子干擾素-γ(IFN-γ)的產生[8]。Matsubara等[9]研究發現，低Acrp30血癥與超敏C反應蛋白血癥存在負相關，提示Acrp30可能具有抗炎作用，以上研究提示Acrp30是炎性反應中重要的調節因子。

為了進一步評價Acrp30和炎性因子的相互作用，本研究利用構建的Acrp30真核表達載體pcDNA3.1-Acrp30轉入C57BL/6J小鼠，成功上調了小鼠血漿Acrp30水平，并發現血漿炎性因子IL-2、IL-3、IL-6、IL-8和TNF-α水平卻顯著受抑。結果證明，Acrp30的過表達可拮抗小鼠分泌炎性因子，從而拮抗炎性反應過程。

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Influence of adiponectin overexpression on mice inflammation factors*

HAOPo1，MENGFan-ping2△

(1.DepartmentofMedicalTechnology,ChongqingThreeGorgesMedicalCollege,Chongqing404120,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingThreeGorgesHospital,Chongqing404000,China)

Objective To transfect into mice with plasmid carrying adiponectin gene overexpression for researching its influence on the plasma adiponectin expression and inflammation factors secretion.Methods The constructed mice pcDNA3.1-Acrp30 gene overexpression plasmid was transfected into the C57BL/6J mice body by quadriceps femoris and the plasma adiponectin expression after 72 h and the secretion levels of IL-2,IL-3,IL-6,IL-8 and TNF-α were detected.Results After transfecting the pcDNA3.1-Acrp30 oversxpression vector into mice,the plasma level of adiponectin was significantly increased and the levels of plasma inflammatory factor IL-2,IL-3,IL-6,IL-8 and TNF-α were significantly down-regulated.Conclusion The constructed Acrp30 gene overexpression vector can effectively increase the expression of adiponectin in mice and antagonize the secretion of inflammatory factors.

adiponectin; overexpression; inflammatory factor

重慶市衛生和計劃生育委員會醫學科技計劃項目(2011-2-411),重慶市萬州區科技計劃項目(201203060)。

郝坡,男，碩士，講師/主管檢驗師，主要從事醫學檢驗方面的教學與研究工作。△

，E-mail:menyfei2132@aliyun.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.012

A

1672-9455(2015)17-2513-02

2015-03-25

2015-04-15)