標(biāo)本存放溫度和時(shí)間對血漿中抗凝蛋白活性的影響

李 蕾，王培昌

(首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100053)

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·論 著·

標(biāo)本存放溫度和時(shí)間對血漿中抗凝蛋白活性的影響

李 蕾，王培昌△

(首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100053)

目的 探討標(biāo)本存放溫度和時(shí)間對血漿中抗凝蛋白活性的影響。方法 用真空采血管采集住院患者空腹靜脈血20例，無黃疸、脂血、溶血，即刻以3 000 r/min離心10 min，上機(jī)測得的結(jié)果與在室溫(20～25 ℃)、4 ℃和-20 ℃放置4 h、12 h、24 h、7 d、14 d的血漿標(biāo)本測得的結(jié)果分別進(jìn)行比較。結(jié)果 在室溫下保存ATⅢ、PC活性24 h內(nèi)均無明顯變化，僅PS活性明顯降低，7 d和14 d時(shí)檢測抗凝蛋白活性均明顯降低(P<0.05)；在4 ℃放置7 d ATⅢ、PC活性有所降低，但與即時(shí)活性相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而PS活性明顯下降(P<0.05)，14 d時(shí)三者活性均明顯下降(P<0.05)；在-20 ℃保存14 d甚至更長時(shí)間抗凝蛋白活性均無明顯降低。結(jié)論 為保證抗凝蛋白活性，血液標(biāo)本應(yīng)置于低溫保存并盡快檢測。

抗凝蛋白； 抗凝血酶Ⅲ； 蛋白C； 蛋白S； 溫度； 時(shí)間

抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、蛋白C(PC)和蛋白S(PS)是人體內(nèi)重要的生理性抗凝蛋白，參與維持體內(nèi)凝血與抗凝系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡。其中，ATⅢ是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，主要作用于凝血酶和因子Ⅹα而發(fā)揮其抗凝活性[1]；PC在被激活形成活化PC后可滅活血漿中的凝血因子Ⅴα和Ⅷα，PS是其重要的輔因子[2]。上述生理性抗凝蛋白的先天性或獲得性缺乏(如肝臟疾病、維生素K缺乏、口服避孕藥、妊娠等)均可導(dǎo)致靜脈血栓栓塞癥(VTE)的發(fā)生[3]。目前臨床上對抗凝蛋白水平的檢測越來越多，為了減少分析前因素對檢測結(jié)果的影響，尤其是標(biāo)本采集后存放時(shí)間和溫度等因素的影響，因此，本室對不同溫度和時(shí)間下抗凝蛋白活性做如下研究，并報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 選取2014年3～6月住院患者的凝血標(biāo)本20例，無溶血、黃疸、脂血。患者早晨空腹，自肘靜脈采集兩管凝血標(biāo)本。采血管是以109 mmol/L枸櫞酸鈉為抗凝劑的定量真空采血管，各采集至3 mL，抗凝劑和血的比例為1∶9，并將其相互混合，即刻離心。

1.1.2 儀器與試劑 應(yīng)用法國Diagnostica Stago公司的全自動(dòng)凝血分析儀及其配套試劑和質(zhì)控血漿。ATⅢ批號：112286；PC批號：111458；PS批號：111433；離心機(jī)為普通離心機(jī)。

1.1.3 質(zhì)控品 應(yīng)用法國Diagnostica Stago公司生產(chǎn)的正常和病理質(zhì)控品，每天隨標(biāo)本進(jìn)行測定，質(zhì)控結(jié)果在受控范圍方可進(jìn)行試驗(yàn)，以保證結(jié)果準(zhǔn)確性。質(zhì)控品批號為111101。

1.2 方法 將采集的凝血標(biāo)本即刻以3 000 r/min離心10 min，分離乏血小板血漿，即刻測定抗凝蛋白活性，其余血漿一部分置于室溫加蓋容器保存，一部分置于4 ℃冰箱密封保存，一部分置于-20 ℃冰箱密封保存，并分別將于4 h、12 h、24 h、7 d、14 d測定的結(jié)果與即時(shí)測得的結(jié)果進(jìn)行比較。

2 結(jié) 果

2.1 在室溫(20～25 ℃)下血漿標(biāo)本放置不同時(shí)間對抗凝蛋白活性檢測結(jié)果的影響 從表1看，室溫下ATⅢ、PC和PS的活性隨血漿標(biāo)本放置時(shí)間而降低。其中ATⅢ和PC在4、12、24 h的檢測結(jié)果與即時(shí)檢測結(jié)果相比活性有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；分別放置7 d后活性明顯下降(P<0.05)，14 d后測得的結(jié)果與即時(shí)檢測相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PS活性在室溫放置12 h內(nèi)檢測結(jié)果無明顯降低，24 h后明顯下降(P<0.05)，放置7和14 d后活性明顯降低(P<0.05)。

表1 室溫下血漿標(biāo)本放置不同時(shí)間對抗凝蛋白

注：與即時(shí)相比，*P<0.05。

2.2 在4 ℃下血漿標(biāo)本放置不同時(shí)間對抗凝蛋白活性檢測結(jié)果的影響 從表2看，在冰箱冷藏室4 ℃保存，ATⅢ和PC的活性隨血漿標(biāo)本放置時(shí)間的延長無明顯降低，放置14 d時(shí)兩者活性均明顯下降(P<0.05)；PS活性在4 ℃保存24 h無明顯變化，但隨著時(shí)間延長活性逐漸降低，7 d后檢測結(jié)果與即時(shí)檢測相比有明顯下降(P<0.05)，14 d后活性下降明顯(P<0.05)。

表2 4 ℃下血漿標(biāo)本放置不同時(shí)間對抗凝蛋白

注：與即時(shí)相比，*P<0.05。

2.3 在-20 ℃下血漿標(biāo)本放置不同時(shí)間對抗凝蛋白活性檢測結(jié)果的影響 從表3看，在冰箱冷凍室-20 ℃保存不同時(shí)間下，血漿中ATⅢ、PC和PS的活性與即時(shí)檢測相比均有所下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表3 -20 ℃下血漿標(biāo)本放置不同時(shí)間對抗凝蛋白

3 討 論

抗凝蛋白在人體的出血與止血平衡中發(fā)揮著重要作用，從而保持血液的正常流動(dòng)狀態(tài)。抗凝蛋白的先天性或獲得性缺陷使機(jī)體處于高凝狀態(tài)并易發(fā)生血栓栓塞性疾病。有文獻(xiàn)報(bào)道中國漢族深靜脈血栓患者抗凝蛋白缺乏的檢出率高達(dá)50%，以PS缺乏為主，其次是PC和ATⅢ的缺乏[4-8]。抗凝蛋白活性檢測是診斷抗凝蛋白缺乏最常用的手段，對靜脈血栓栓塞疾病(VTE)的病因診斷及預(yù)防具有重要意義。

本院申請ATⅢ、PC和PS活性檢測的科室主要為神經(jīng)內(nèi)/外科、血管外科、血液科等臨床科室，住院患者血液采集大多由夜班護(hù)士完成，門診標(biāo)本由抽血室護(hù)士完成，由于血液標(biāo)本數(shù)量多及送檢流程不合理，送到檢驗(yàn)科后放置時(shí)間一般會(huì)超過最佳檢測時(shí)間(2 h內(nèi))而導(dǎo)致檢測結(jié)果不同[9-10]。另外,抗凝蛋白活性檢測不屬于凝血常規(guī)和急診檢測項(xiàng)目，且標(biāo)本量較少，考慮到試劑成本、臨床需求等因素，本科僅ATⅢ常規(guī)檢測，PC和PS 2周檢測1次。因此，血液標(biāo)本的保存時(shí)間和溫度對抗凝蛋白活性的檢測結(jié)果影響至關(guān)重要。

本文研究表明，在室溫下保存ATⅢ、PC活性在24 h內(nèi)均無明顯變化，僅PS活性明顯降低，7和14 d檢測時(shí)三種抗凝蛋白活性均明顯降低(P<0.05)；在4 ℃放置7 d時(shí)ATⅢ、PC活性有所降低，但與即時(shí)檢測活性相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但PS活性明顯下降，14 d時(shí)三者活性均明顯下降；在-20 ℃保存14 d甚至更長時(shí)間抗凝蛋白活性均無明顯降低。

從以上研究結(jié)果可知，凝血標(biāo)本采集后若由于各種原因不能即時(shí)檢測，室溫放置時(shí)，ATⅢ、PC在室溫下保存不宜超過24 h，PS不能超過12 h。標(biāo)本離心后置于4 ℃，ATⅢ、PC可保存7 d，PS應(yīng)在24 h內(nèi)盡快檢測；在20 ℃三者可保存14 d甚至更長時(shí)間。基于以上研究本科室ATⅢ作為常規(guī)檢測項(xiàng)目，而PC、PS標(biāo)本離心后分離取血漿于-80 ℃低溫冰箱保存，檢測前37 ℃水浴復(fù)融，對檢測結(jié)果不會(huì)有顯著影響。因此，對于檢測周期長的標(biāo)本需置于低溫保存以更好的保持蛋白活性，從而保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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Influence of storage time and temperature on plasma anticoagulation protein activity

LILei,WANGPei-chang△

(DepartmentofClinicalLaboratory,XuanwuHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100053，China)

Objective To investigate the influence of storage time and temperature on anticoagulation protein activity in plasma.Methods Fasting venous blood was collected from 20 inpatients without jaundice,lipidemia and hemolysis by vacutainer,immediately centrifuged by 3 000 r/min for 10 min and detected.The detected results were compared with those stored in the room temperature(20-25 ℃),at 4 ℃ and -20 ℃,for 4 h,12 h,24 h,7 d,14 d respectively.Results The ATⅢ and PC activity of the sample stored in the room temperature within 24 h had no significant change,but only the PS activity was significantly decreased,the anticoagulation protein activity detected on 7,14 d was significantly decreased(P<0.05);the ATⅢ and PC activity of the sample stored at 4 ℃ for 7 d was decreased,but the difference had no statistical significance compared with those of immediately detected samples,but the PS activity was significantly decreased(P<0.05),the activity of 3 indexes on 14 d was decreased significantly(P<0.05);the activity of anticoagulation protein of the sample stored at -20 ℃ for 14 d or even longer time had no obvious decrease.Conclusion The blood samples should be placed in the low temperature and detected as soon as possible for ensuring the anticoagulant protein activity.

anticoagulation protein; antithrombinⅢ; protein C; protein S; temperature; time

李蕾，女，碩士，檢驗(yàn)師，主要從事血栓與止血質(zhì)量控制方面的工作。△

，E-mail：mo_ciin@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.020

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1672-9455(2015)17-2533-02

2015-04-05

2015-04-15)