21-羥化酶缺陷癥基因診斷方法的建立及應用

張 麗，焦 凱，張 菊

(第四軍醫大學唐都醫院內分泌科，西安 710038)

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·論 著·

21-羥化酶缺陷癥基因診斷方法的建立及應用

張 麗，焦 凱△，張 菊

(第四軍醫大學唐都醫院內分泌科，西安 710038)

目的 建立一種熒光偏振檢測技術聯合直接測序法診斷先天性腎上腺皮質增生癥中21-羥化酶缺陷癥的新方法，并對中國人群中最常見的2種基因缺失和8種點突變進行檢測。方法 收集40例健康者及2例患者外周血，提取基因組DNA。設計通用引物，同時擴增CYP21A2和CYP21A1P等位基因片段，然后用序列特異的TAMRA熒光標記探針對擴增產物進行雜交檢測，利用熒光偏振儀檢測擴增雜交的熒光偏振值，確定是否存在該基因的缺失，同時用直接測序法驗證檢測結果；對Exon3 Del 8 bp(GAGACTAC)缺失進行檢測時，將缺失的8個堿基設計在引物上，確保引物的特異性。同時根據CYP21A2基因與其假基因序列差異，設計5對特異性引物擴增CYP21A2基因，PCR后直接測序檢測中國人群中最常見的8種點突變，包括P30L、i2g、I172N、E6Cluster、V281L、920-921insT、Q218X、R356W。結果 熒光偏振法未檢測到CYP21A2基因大片段缺失，檢測結果與直接測序法結果對比差異無統計學意義(P>0.05)，一致率達100%，40例健康者未檢測到點突變，1例患者檢測出Exon1 G56R,Exon7c.920-921InsT插入雜合突變，1例患者檢測出Exon4I172N、Exon8Q318X雜合突變。結論 熒光偏振檢測法聯合直接測序法診斷21-OHD是一種高效的檢測手段，可以廣泛用于臨床，不僅能對患者基因突變類型進行分析，在指導遺傳咨詢及產前診斷方面亦發揮重要作用。

先天性腎上腺皮質增生癥； 21-羥化酶缺乏癥； 熒光偏振； CYP21A2基因

先天性腎上腺皮質增生癥(CAH)是一組由于腎上腺皮質激素合成途徑中的必需酶基因的缺陷所引起的一種常染色體隱性遺傳病，是引起兩性畸形最常見的病因[1]。其……