血清胸苷激酶1在兒童急性淋巴細胞白血病診療中的應用*

徐文鑫，梅序橋，劉慧麗(.漳州衛生職業學院，福建漳州 363000；.福建醫科大學附屬漳州市 醫院檢驗科，福建漳州 363000)

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·論 著·

血清胸苷激酶1在兒童急性淋巴細胞白血病診療中的應用*

徐文鑫1，梅序橋2，劉慧麗1(1.漳州衛生職業學院，福建漳州 363000；2.福建醫科大學附屬漳州市 醫院檢驗科，福建漳州 363000)

目的 探討血清胸苷激酶1(sTK1)在兒童急性淋巴細胞白血病臨床診療中的應用。方法 采用免疫印跡增強化學發光法檢測39例急性淋巴細胞白血病兒童患者化療前、化療后的sTK1濃度及30例同期健康體檢兒童的sTK1濃度。結果 患兒組化療前的sTK1濃度明顯高于化療后完全緩解組、部分緩解組及對照組，差異有統計學意義(P<0.01)；化療后不同療效組(完全緩解組、部分緩解組、未緩解組)之間sTK1濃度差異有統計學意義(P<0.01)；未緩解組與化療前的sTK1濃度差異無統計學意義(P>0.05)；化療前sTK1陽性檢出率明顯高于化療后及對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。結論 sTK1的檢測對于兒童急性淋巴細胞白血病的篩查、輔助診斷、化療效果的評估具有重要參考價值。

血清胸苷激酶1； 兒童急性淋巴細胞白血病； 免疫印跡增強化學發光法

急性淋巴細胞白血病(ALL)在兒童白血病中發病率最高，有研究報道其占整個兒童白血病的75%以上，嚴重威脅著兒童健康[1]。臨床上,對于兒童ALL的診斷及化療療效觀察,依賴于骨髓穿刺、細胞病理檢查等手段。減少骨髓穿刺和細胞病理檢查次數，尋找其他輔助檢查指標對疾病進行初篩、輔助診斷、療效觀察，成為很多學者研究探索的方向。胸苷激酶(TK)是參與DNA補救合成途徑的關鍵酶，細胞質胸苷激酶(TK1)是TK的一種同工酶，是一種細胞周期依賴性標志物，是與細胞的DNA合成和細胞增殖密切相關的關鍵酶[2]。在腫瘤細胞內，DNA復制循環加速,大量腫瘤細胞在S/G2期死亡，高濃度的TK1釋放到外周血，所以TK1在惡性腫瘤細胞和惡性腫瘤患者血液中升高。本研究利用免疫印跡增強化學發光法檢測30例健康兒童和39例ALL患兒化療前及化療后sTK1濃度變化，探討sTK1在兒童急性淋巴細胞性白血病臨床診斷中的價值及療效評估中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取福建醫科大學附屬漳州市醫院兒科2012年4月至2014年2月經骨髓形態學、病理細胞學以及流式細胞術免疫學分型等檢查確診的ALL患兒39例，年齡1～10歲，平均(5.7±1.1)歲;另取本院同期健康體檢兒童30例作為對照組，年齡1～12歲，平均(5.2±2.7)歲。化療1個療程后，根據治療結果將患兒組分為完全緩解組、部分緩解組及未緩解組，以各組研究對象的空腹血清作為檢測標本，標本采取時間分別為患兒組初次化療前及化療1個療程后，健康對照組標本采取時間為體檢時。患兒ALL的診療標準均按照2006年中華醫學會兒科學分會血液學組制定的兒童ALL診療建議進行。上述所有研究對象均排除其他腫瘤性疾病、傳染性疾病以及炎性疾病。

1.2 儀器與試劑 試驗所使用的主要儀器為化學發光數字成像分析儀，試劑是sTK1診斷試劑，均購自華瑞同康生物技術(深圳)有限公司。根據試劑盒說明書，以2 pmol/L 作為sTK1的水平臨界值，sTK1>2 pmol/L 即為檢出陽性。

1.3 方法 采用真空干燥管抽取空腹靜脈血3～5 mL，在2 h內以3 000 r/min離心15 min，分離血清，將血清分裝于干燥離心管內，保存于-20 ℃備檢。標本收集完后，以試劑盒中的標準品為參照，在標準曲線r≥0.95的情況下進行測定,嚴格參照試劑盒提供的操作說明進行。

2 結 果

2.1 各組sTK1濃度比較 患兒組化療前的sTK1值明顯高于化療后的完全緩解組、部分緩解組及對照組，差異有統計學意義(P<0.01)；完全緩解組與部分緩解組及未緩解組的sTK1水平差異有統計學意義(P<0.01)；未緩解組sTK1水平也明顯高于部分緩解組，差異有統計學意義(P<0.01)；未緩解組與化療前組的sTK1水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組sTK1 濃度比較

注：與完全緩解組、部分緩解組、對照組比較，*P<0.01；與部分緩解組、未緩解組比較，**P<0.01；與未緩解組比較，***P<0.01；與化療前組比較，#P>0.05。

2.2 化療前、化療后及對照組血清sTK1陽性檢出率 患兒組化療前陽性率明顯高于化療后及對照組，差異有統計學意義(P<0.01)；患兒組化療后陽性率也明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 患兒組與對照組sTK1 陽性檢出情況比較

3 討 論

白血病是常見的血液惡性腫瘤，我國每年有2萬例左右兒童白血病發生,在兒童白血病發病率中又以ALL為主。ALL是一種異質性疾病，表現為原幼淋巴細胞在造血組織中惡性增殖和克隆。近年來，隨著免疫學、分子生物學及細胞遺傳學的發展，人類深入了解了兒童ALL病因和發病機制,在診斷、治療上得到了長足的進步，使得大多數ALL患兒經化療后都能得到緩解。近年兒童ALL的無病生存率(EFS)已達80%以上。但在臨床上,對于兒童ALL的診斷、化療療效觀察及預后監測,目前還是缺乏可靠的血清學檢測指標，仍依賴于骨髓形態學、細胞病理檢查最終確定。骨髓穿刺是一種具有創傷性的標本采集手段，對患兒的身心造成一定的影響，特別是對兒童本身及其家屬帶來很大的心理生理負擔。是否有一種血清學檢測指標能對兒童ALL進行初篩、輔助診斷、療效觀察及預后監測，減少骨髓穿刺進行細胞病理檢查次數，成為目前不斷研究探索的方向。

TK是調控DNA合成的關鍵酶之一，在ATP為供體及鎂離子(Mg2+)參與的條件下，催化胸苷磷酸(Thd)為胸苷一磷酸(TMP)，是胸腺嘧啶核苷進入DNA代謝，參與合成DNA的唯一途徑。TK的兩種同工酶分別為TK1和線粒體胸苷激酶(TK2)，TK1主要存在于細胞質中[3]。TK1是細胞周期依賴性標志物，在細胞內的表達水平與細胞周期有關，細胞分裂G1期含量比較低，在G1期到S期交界處逐漸升高，至S期達到最高，其高水平持續在S期到G2期，至M期才開始降解[4]。腫瘤細胞的增殖不同于正常細胞,其增殖不受凋亡調控,DNA復制循環加速,當組織中S期細胞比例升高,大量腫瘤細胞在S/G2期死亡，高濃度的TK1釋放到外周血，引起體內TK1升高。正常細胞在G1期死亡，此時細胞中TK1濃度很低，釋放到外周血的TK1濃度極微[5]。TK1是一種新興的腫瘤細胞增殖標志物，大量研究表明，血清sTK1濃度檢測在鼻咽癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、肝癌等實體癌癥的輔助診斷、療效評估、病情監測及預后判斷都具有臨床意義[6-8]。但對TK1在血液腫瘤的治療評估中應用研究最早的是TK1活性檢測。Gronowitz等[9]通過大量臨床試驗證明TK1活性不僅可用于血液腫瘤的早期診斷，并可提示化療療效及預測疾病預后，與已知的腫瘤特異性標志物結合提高診斷敏感性方面也有很大價值。徐衛等[10]發現ALL患者sTK1表達水平與ALL其他預后因素相關,在ALL的預后中具有重要價值。TK1活性檢測主要采用放射免疫法,由于放免法存在放射性污染，技術要求比較高，難于在臨床上推廣。He等[11]采用免疫印跡增強化學發光法檢測sTK1濃度，發現sTK1濃度對于白血病化療效果的評估及臨床化療方案的調整也具有重要的臨床意義。曾智杰等[12]研究表明sTK1的濃度可用于血液腫瘤化療效果的評估,以及指導臨床進行化療方案的調整。sTK1濃度檢測在血液病臨床診治中的價值也得到重視，但目前相對研究還是較少。

本研究以兒童ALL患兒為研究對象，并以健康體檢兒童作為對照組，對患兒組化療前及化療后(完全緩解組、部分緩解組、未緩解組)血清和對照組血清進行sTK1濃度檢測，對各組的sTK1濃度及陽性率進行比較。試驗結果顯示，患兒組化療前sTK1濃度為(4.00±1.39)pmol/L，陽性率為87.1%；對照組sTK1濃度為(0.67±0.43)pmol/L，陽性率為3.4%，患兒組化療前的sTK1濃度及陽性率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，說明了ALL患兒骨髓造血干細胞的惡性增殖，白血病細胞在骨髓和其他造血組織中大量增生，白血病細胞中的TK1大量釋放進入血液中，導致血液中TK1濃度升高。提示sTK1可作為兒童ALL的篩查、輔助診斷的血清學標志物。

本研究同時對化療1個療程后的39例研究對象根據療效結果分為完全緩解組(19例)、部分緩解組(14例)、未緩解組(6例)，完全緩解組的sTK1濃度為(1.05±0.31)pmol/L，部分緩解組的sTK1濃度為(1.78±0.39)pmol/L，未緩解組的sTK1濃度為(3.56±0.64)pmol/L，3組間兩兩比較，sTK1水平差異均有統計學意義(P<0.01)，同時化療前sTK1濃度也明顯高于完全緩解組及部分緩解組，差異有統計學意義(P<0.01)，但化療前sTK1濃度與未緩解組差異無統計學意義(P>0.05)。這提示著兒童ALL在有效的化療之后，完全緩解及部分緩解的患兒骨髓中造血干細胞異常增殖被不同程度地有效抑制，白血病細胞在造血組織中大量減少，血液中sTK1濃度降低，在骨髓細胞病理學的療效判斷標準中，完全緩解患兒骨髓中的原幼淋巴細胞降至5%以下，部分緩解組的患兒骨髓內的原幼淋巴細胞降至5%至20%，可以發現sTK1濃度結果與ALL療效判斷標準中骨髓細胞病理學檢查結果是相符的。從sTK1檢出陽性率結果也顯示，化療后的陽性率(20.5%)與化療前的陽性率(87.1%)差異有統計學意義。綜上所述，sTK1濃度對于兒童ALL的療效監測及指導治療方案的調整具有重要意義。

本研究初步表明，sTK1濃度作為兒童ALL的初篩、輔助診斷具有一定的參考價值，并在兒童化療療效評估上也具有重要臨床意義。但本研究病例有限，缺少良性疾病的對照，研究結論有一定局限性，今后應通過增加病例及良性病種的深入研究，探討sTK1在臨床上的價值。

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Application of serum thymidine kinase 1 in diagnosis and treatment of childhood acute lymphoblastic leukemia*

XUWen-xin1,MEIXu-qiao2,LIUHui-li1

(1.ZhangzhouHealthVocationalCollege,Zhangzhou,Fujian363000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedZhangzhouMunicipalHospitalofFujianMedicalUniversity,Zhangzhou,Fujian363000,China)

Objective To study the clinical application of serum thymidine kinase 1 (sTK1) in the diagnosis and treatment of childhood acute lymphoblastic leukemia.Methods The Western blot-enhanced chemiluminescence assay was adopted to detect serum TK1 level in 39 cases of childhood acute lymphoblastic leukemia patients before and after chemotherapy and contemporaneous 30 healthy children.Results The sTK1 level before chemotherapy in the patients group was higher than that in the complete remission group and the partial remission group after chemotherapy,and the healthy control group,the differences were statistically significant(P<0.01);the sTK1 level had statistical differences among different curative effect groups after chemotherapy(complete remission group,partial remission group and non-remission group) (P<0.01);the sTK1 level had no statistical difference between the non-remission group and before chemotherapy (P>0.05);the positive detection rate of sTK1 before chemotherapy was significantly higher than that after chemotherapy and the healthy control group(P<0.01).Conclusion The sTK1 detection has the important reference value for screening,assisted diagnosis and evaluation of chemotherapeutic effect in childhood acute lymphoblastic leukemia.

serum thymidine kinase 1； childhood acute lymphoblastic leukemia； western blot-enhanced chemiluminescence assay

福建省教育廳科技項目(JB12320)。

徐文鑫，男，講師，本科，主要從事臨床實驗診斷學教學工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.16.006

A

1672-9455(2015)16-2311-03

2015-02-28

2015-05-20)