不同性別Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究*

李 娟，張德蓮，木拉力別克，李南方△，楊學磊，鄭靈玲，黃 昱 (.石河子大學醫學院，新疆 石河子 8000；新疆維吾爾自治區人民醫院：.高血壓中心/新疆高血壓研究所；.臨床醫學研究 中心，烏魯木齊 8000；.北京大學醫學部醫學遺傳學系，北京 009)

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·論 著·

不同性別Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究*

李 娟1，張德蓮2，木拉力別克2，李南方2△，楊學磊3，鄭靈玲3，黃 昱4(1.石河子大學醫學院，新疆 石河子 832000；新疆維吾爾自治區人民醫院：2.高血壓中心/新疆高血壓研究所；3.臨床醫學研究 中心，烏魯木齊 830001；4.北京大學醫學部醫學遺傳學系，北京 100191)

目的 了解Fabry病中不同性別患者α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)活性情況。方法 選取一個Fabry病家系的8例患者和13例健康者，應用干血片法測定經過GLA基因檢測確診的Fabry病患者和健康者α-Gal A活性并進行比較。結果 男性患者的α-Gal A活性[(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)]為健康對照者[(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)]的4.6%,女性患者[(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)]則為健康對照者的79.62%。男性半合子患者酶活性明顯下降(P<0.05)。α-Gal A活性檢測對男性半合子的靈敏度高于女性雜合子。結論 α-半乳糖苷A活性下降程度存在性別差異，男性半合子Fabry病患者酶活性明顯下降。

Fabry病; GLA基因; α-半乳糖苷酶

Fabry病是1898年由Anderson和Johann Fabry提出,故名Anderson-Fabry病,簡稱Fabry病。它是由于α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)先天性缺乏使其底物酰基鞘氨醇己三糖苷(Gb3)和酰基鞘氨醇己二糖苷的末端半乳糖酰基不能被降解進而不斷蓄積在體內，導致皮膚、心、腦、腎、胃腸、肺等組織器官損害,也是自Gaucher病后發現的第2種溶酶體貯積病(LSDs)[1-2]。因本癥缺乏特異性臨床表現，篩選體系尚不完善，其誤診率和漏診率都很高。目前針對Fabry病的診斷可以是通過在生化檢查中發現α-Gal A活性下降，在病理組織中找到特征性的嗜鋨性包涵體以及通過基因檢測發現GLA突變[3-4]。然而病理診斷為有創檢查，基因檢測則需要一定周期及較高的技術要求，而α-Gal A活性檢測是一快速、簡便、經濟的檢測手段，為此本研究通過對一個Fabry病家系中不同性別的患者和健康者的α-Gal A活性進行分析比較，了解Fabry病不同性別患者中α-Gal A的活性，以期為今后提高Fabry病的檢出率提供一定的理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取1個Fabry家系的8例Fabry病患者,其中男3例,女5例,平均(36.38±19.41)歲進行研究。8例中包括Fabry病先證者1例,先證者及其家系成員均經X染色體上GLA基因檢測確診為Fabry病,所有研究對象均知情同意。另對13例居住于同一地區的健康志愿者作為酶活性檢測健康對照組,其中男5例,女8例,平均(46.85±18.52)歲。

1.2 方法 α-半乳糖苷酶活性測定:應用干血片法測定肝素抗凝血漿α-Gal A活性,由北京大學醫學部醫學遺傳學系完成。熒光底物為5.0 mm 4-羥甲香豆素基-α-D-半乳糖基吡喃糖苷,抑制劑為0.1 mol/L N-乙酰-氨基半乳糖苷,標準物為4-羥甲香豆素，檢測濾紙上干燥血滴(約5.5 μL)的酶活性。正常參考范圍(100～500)×10-15mol/(d·spot)。

2 結 果

通過對13例健康對照組和8例Fabry患者組的α-半乳糖苷酶活性測定與比較發現：(1)對照組α-半乳糖苷酶活性平均值為(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)，其中在男性健康對照組為(152.76±14.32)×10-15mol/(d·spot)，女性健康對照組為(210.53±50.70)×10-15mol/(d·spot)，男女之間差異無統計學意義(P>0.05)。(2)Fabry病患者酶活性下降，平均值為(96.96±81.15)×10-15mol/(d·spot)，且與健康對照組比較差異有統計學意義(P<0.005)。(3)Fabry病患者中3例男性半合子患者α-半乳糖苷酶活性的平均值為(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)，是健康對照者的4.6%,明顯低于男性健康對照組(P<0.001)，α-半乳糖苷酶活性檢測靈敏度在男性半合子患者中為100%；5例女性雜合子患者的α-半乳糖苷酶活性的均值為(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)，為健康對照者的79.62%，雖然較女性健康對照者有所下降，但差異無統計學意義(P>0.05)。與男性患者相比，差異有統計學意義(P<0．05)。α-半乳糖苷酶活性檢測未能檢測出女性雜合子患者。健康對照組與Fabry病患者一般情況比較見表1，α-半乳糖苷酶活性對Fabry病男、女患者篩檢情況見表2，α-半乳糖苷酶活性在不同性別中的亞層分析情況見表3。

表1 2組一般情況的比較±s)

注：與對照組比較，*P<0.05。

表2 家系成員中男、女的基因檢測及酶活性情況(n)

表3 按性別分層后2組α-半乳糖苷酶活性的比較±s)

3 討 論

Fabry病是由于編碼α-Gal A的GLA基因發生突變，使鞘糖脂特別是三聚己糖神經酰胺沉積在溶酶體內，可引起多個系統臟器的損害[5]。Fabry病常見死亡原因是腎功能衰竭、腦血管意外和心肌梗死等。此外，由于α-Gal A代謝產物的沉積是一個漸進的過程，Fabry病的臨床表現也隨著年齡的變化而有所不同，男性半合子平均生存期較健康人群短20年，女性雜合子平均生存期則縮短約10年[6]。在歐洲針對Fabry病的酶替代療法已用于臨床治療，而國內尚無治療該病的特效藥物，對Fabry病的治療多為對癥治療[7]。所以早期準確地診斷Fabry病患者，從而盡早給予治療以減緩病情進展，成為Fabry病診療過程中非常重要的環節。

Fabry病的發病機制是由于α-Gal A活性缺陷導致機體內鞘糖脂異常代謝堆積致病,故酶活性測定可用于診斷Fabry病。1967年，Brady等首先提出Fabry病患者血中α-Gal A活性降低。本研究通過對一個經基因檢測確診的家系成員和健康對照者的α-Gal A活性進行分析比較，發現男性半合子患者酶活性明顯減低，僅是健康對照者的4.6%，而家系中女性攜帶者酶活性在正常范圍內，男性與女性患者之間的酶活性存在明顯差異，證實了α-Gal A活性檢測對于男性半合子具有非常高的敏感性及特異性，但是在女性雜合子患者酶活性檢測結果可在正常范圍內,從而使酶法診斷產生部分假陰性結果[8-9]。這一結果也與2005年Linthorst等[10]提出的在女性雜合子患者中，約有1/3因GLA基因上的特殊突變(如發生N215S突變)，其α-Gal A活性測定常在正常范圍一致。

總之，利用α-Gal A活性檢測在Fabry病女性患者篩查中易造成漏診，進而影響其自身的生活質量，增加后代的患病率。為此，針對家系中確診有Fabry病的患者以及Fabry病可疑的女性，在檢測α-Gal A活性的同時應進行基因檢測。此外，2011年，Paschke等[11]證實尿液Gb3總量和Gb3亞型可用于診斷女性Fabry病患者。但也有報道指出尿液和血漿中Gb3水平測定的可靠性和實用性還有待進一步探討[12]。因此，尋找無創、可靠、易測的生物標志物來快速診斷并評估Fabry 病女性患者的病情，提高Fabry病檢出率仍需進一步研究。

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基金項目：福建省大學生創新性課題(2011257)。 作者簡介：陳金花，女，副主任技師，本科，主要從事血液檢驗方面的研究。

Study of alpha galactosidase A activity in different genders of patients with Fabry disease*

LIJuan1,ZHANGDe-lian2,Mulalibieke2,LINan-fang2△,YANGXue-lei3,ZHENGLing-ling3,HUANGYu4

(1.MedicalSchoolofShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang832000,China;2.HypertensionCenter/HypertensionInstituteofXinjiang;3.ClinicalMedicineResearchCenter,People′sHospitalofXinjiangUygurAutonomousRegion,Wulumuqi,Xinjiang830001,China;4.DepartmentofMedicalGenetics,DepartmentofMedicine,PekingUniversity,Beijing100191,China)

Objective To investigate the activity of α-galactosidase A(α-Gal A) in different genders of the patients with Fabry disease.Methods 8 patients with Fabry disease GLA gene detection diagnosed by and 13 healthy members in a family were selected and detected the α-Gal A activity by using the dried blood spots method.Results The α-Gal A activity in the male patients with Fabry disease was [(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)],which was only 4.6% of [(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)] in the healthy controls,whereas female patients was 79.62% of [(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)] in the healthy controls.The α-Gal A activity in hemizygous male patients was significantly lowered(P<0.05),the α-Gal A activity detection had higher sensitivity in male hemizygote than female heterozygous.Conclusion The gender difference exists in the decreased degree of α-Gal A activity.The enzymatic activity is significant reduced in male patients with hemizygotie Fabry disease.

Fabry disease； GLA gene； α-galactosidase A

新疆維吾爾自治區重點實驗室資助項目(XJYS0906)。

李娟，女，在讀研究生，主要從事心血管系統疾病方面的研究。△

，E-mail:Lnanfang2010@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.16.010

A

1672-9455(2015)16-2323-02

2015-02-15

2015-04-20)