妊娠期婦女高危型人乳頭瘤病毒感染與宮頸病變的相關性研究

謝建渝，虞柯靜，董國強，蔡春玲，劉 莉，黎 義，鄒光美

(重慶華西婦產醫院 400039)

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·論 著·

妊娠期婦女高危型人乳頭瘤病毒感染與宮頸病變的相關性研究

謝建渝，虞柯靜，董國強△，蔡春玲，劉 莉，黎 義，鄒光美

(重慶華西婦產醫院 400039)

目的 探討妊娠期婦女高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染與宮頸病變的相關性。方法 選取重慶華西婦產醫院就診的18～43歲妊娠期婦女486例，行第二代分子雜交捕獲技術(HC2-HPV-DNA)和超微病原體可視檢測技術(TH)2種方法聯合檢測及電子陰道鏡下病理活檢，以病理活檢結果為診斷宮頸病變的金標準。結果 486例妊娠期婦女HR-HPV檢測陽性患者161例,陽性率33.12%(161/486)；病理組織學診斷出宮頸癌(ICC)及癌前病變(CIN)24例;HPV陽性患者的宮頸癌及癌前病變22例，敏感性91.67%(22/24)。HR-HPV感染情況在不同年齡段分布，差異有統計學意義(P<0.05)，HR-HPV病毒載量及陽性表達率越高，宮頸病變的程度越高。結論 妊娠期婦女不同年齡段的HR-HPV感染率不同；HR-HPV陽病毒載量與CIN及ICC發生有關，與宮頸病變的發生過程有關，但與宮頸病變的嚴重程度無關；妊娠期婦女HPV感染的宮頸病變陽性率和病毒載量與非妊娠期婦女相似；HC2-HPV-DNA法是目前篩查癌前病變及宮頸癌的最佳方法。

第二代分子雜交捕獲技術； 超微病原體可視檢測技術； 病理活檢； 宮頸病變； 高危型人乳頭瘤病毒

宮頸癌(ICC)是嚴重威脅婦女健康的疾病之一，它位于女性惡性腫瘤的第2位，2008年世界衛生組織(WHO)公布的全球ICC病例已從2002年的49.3萬增長到2008年的52.9萬例，病死人數達到27萬例。目前，我國的ICC發病率正以每年2.3%～3.5%的速度遞增，發病率與死亡人數約占世界的1/3[1]。ICC的發生與人乳頭瘤病毒(HPV)感染密切相關,本研究通過對2012年11月至2014年10月重慶華西婦產醫院就診的483例妊娠期婦女采用第二代分子雜交捕獲技術(HC2-HPV-DNA)和超微病原體可視檢測技術(TH)2種方法聯合檢查，并以在電子陰道鏡下所取可疑標本病理診斷為金標準，分析妊娠期婦女高危型HPV感染的狀況及病毒載量，并探討其與宮頸病變發生的關系[2]。現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年11月至2014年10月重慶華西婦產醫院產科門診收治的妊娠期婦女486例，年齡18～43歲,平均(27.86±9.25)歲，所有研究對象均知情同意并全部簽署知情同意書，研究課題經過本院倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 HR-HPV DNA檢測 采用專用采樣器采集標本，先將采樣器刷伸進宮頸管外口，再逆時針方向旋轉3圈，刷取宮頸脫落細胞，放入緩沖保存液，置于4 ℃冰箱保存待查。標本采樣前3 d內，不得用藥沖洗陰道或在陰道內用藥，不得進行醋酸/碘液涂抹陰道，應避免經期采樣。HC2-HPV-DNA檢測采用美國Digene公司第二代雜交捕獲技術，可檢測HPV高危亞型中16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59及68這13種DNA。該方法已通過中國食品藥品監督管理局(SFDA)注冊及歐洲安全認證，是美國食品藥物監督管理局(FDA)唯一批準的HPV DNA檢查技術，并被世界衛生組織推薦為檢測HPV的“金標準”。采用美國Digene公司的HC2試劑盒進行檢測，嚴格按照說明書進行操作，以樣本光量讀數與陰性測定值之比值(RLU/CO)>1.0時表示為HPV 陽性。

1.2.2 TH宮頸脫落細胞學檢查 該方法采用超微病原體可視檢測技術。先用無菌宮頸采樣刷收集子宮頸外口、宮頸管的脫落細胞,再將采集的細胞立即洗入盛有NaCl保存液的保存瓶中,以4 000 r/min離心10 min,再用超微病原體可視系統進行細胞學檢查。

1.2.3 病理學診斷 在陰道鏡下取病變最嚴重處，采用多點取材；如無異常病變，則取陰道內口與宮頸外口移行帶第3、6、9、12點處標本。常規蘇木精-伊紅(HE)染色顯微鏡下觀察，以宮頸組織出現炎性、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC為發生病變。

2 結 果

2.1 HR-HPV DNA檢測結果 陽性患者161例,陽性率33.12%(161/486)；陰性患者325例，陰性率66.87%(325/486)。不同年齡組HPV感染結果分析見表1。

表1 妊娠期婦女不同年齡組HPV感染結果分析

結果顯示，HPV感染率在21～35歲年齡段高于其他年齡段，差異有統計學意義(P<0.05)。因41歲以上年齡組人數較少，未作評價。

2.2 HC2-HPV-DNA和TH 2種檢查結果的比較 以病理組織學診斷為金標準，HC2-HPV-DNA檢查方法陽性率73.41%(165/237)；TH檢查方法陽性率69.62%(26/237)，2種檢查方法靈敏度相近，差異無統計學意義(P>0.05)。各種宮頸病變的2種檢查結果分析見表2。

HC2-HPV-DNA和TH 2種檢查方法結果比較，在486例標本中，病理檢查診斷為宮頸病變者237例，其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC者24例；HC2-HPV-DNA診斷為CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC者22例，敏感度為91.67(22/24)。TH宮頸脫落細胞學檢查診斷為CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC者20例，敏感度為83.33%(20/24)。ICC病例僅有1例，HC2-HPV-DNA和TH 2種方法均診斷為陽性，故敏感度為100%(1/1)。2種檢測方法靈敏度相近，差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 各種宮頸病變HC2-HPV-DNA和TH檢查結果分析[n(%)]

2.3 HR-HPV載量與宮頸病變的關系 在檢查結果中，CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和ICC病變的HR-HPV載量明顯高于炎性組，差異有統計學意義(P<0.01)。CINⅡ、CINⅢ病變的HR-HPV載量明顯高于CINⅠ，差異有統計學意義(P<0.05)。ICC病變的HR-HPV載量與CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 HR-HPV病毒載量與宮頸病變的關系

注：與炎性組比較，*P<0.01;與CINⅠ比較，#P<0.05;與CINⅠ比較，△P>0.05。

3 討 論

HPV是一類無包膜的小DNA病毒，屬于乳多空病毒科。病毒體呈球形，基因組為一雙鏈環狀DNA，衣殼二十面體立體對稱，無包膜。HPV的16、18、45及58等亞型與ICC等惡性腫瘤的發生有關，也稱高危型HPV。與癌有關的E6、E7、L1、L2四個基因，其中E6、E7是致癌基因，LI、L2跟預防性疫苗關系密切。高危型HPV的早期基因編碼產物E6和E7蛋白有致癌作用。HPV的E6和E7轉化蛋白，可分別與P53和Rb抑癌蛋白結合并使之失活，因而干擾了正常細胞周期、使細胞發生惡性轉化。

HPV感染引起ICC通常要經過潛伏期、亞臨床期、臨床癥狀期和HPV相關腫瘤期，通過癌前病變,最終導致ICC。其病理過程大約需要10年，若在此期間能及早發現高危HPV感染，清除女性生殖道HPV的持續感染，阻斷CIN的形成，盡早治療上皮內瘤變，防止其向子ICC的演進顯得尤為重要。因此，HPV檢測是早期預警ICC非常有意義的指標，檢測高危HPV感染是預防ICC的必要措施。

2008年生理學醫學諾貝爾獎獲得者Hausen認為：幾乎所有ICC患者的標本中均能找出HPV，由此證明HPV是ICC的主要病因，使ICC成為當前人類癌癥中唯一明確病因的病變。2009年WHO提出在分子水平同時檢測到HPV的16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68亞型即可確認為ICC高危狀態。檢測HPV DNA為ICC的病因學診斷帶來了一場新的革命[3-4]。

國內學者吳霞等[5]報道，妊娠期婦女與非妊娠期婦女宮頸病變的發病率相似。本文對486例妊娠期婦女從不同年齡組的HPV發病率分析表明，13種HPV高危亞型陽性者為161例,陽性率為33.12%(161/486)，與國內相關報道基本一致[6]。有報道ICC的發病率為0.01%～0.10%，但CIN的發病率不一致，在0.08%～5.0%之間。本研究結果得出，妊娠期CIN的發病率為4.7%(23/486)，與國外報道基本一致[7-8]。Bergeron等[9]認為ICC主要發生在育齡期婦女，集中于20～40歲年齡段，此期為女性性活躍時期，是HPV感染的高發年齡。本研究表明，不同孕期婦女的HPV感染率，在21～35歲年齡段總體高于其他年齡段，差異有統計學意義(P<0.05)，與Bergeron等[9]的報道一致。

當前，HC2-HPV-DNA檢測是評估宮頸病變發生的客觀指標,也是WHO推薦的HPV檢測金標準。該方法應用全長的RNA探針，避免了由于L1基因段缺失所致的假陰性，具有較高的敏感性，適用于HPV感染的診斷。而PCR只針對L1段，若L1缺失就會出現假陰性。本文的分析表明，在病理診斷為CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC的24例中，HC2-HPV-DNA檢測HPV陽性者22例，敏感性為91.67(22/24)，與國內用同種方法檢測HPV的敏感性為88%～100%的報道基本一致[10]。

本研究還表明，HR-HPV的病毒載量隨宮頸病變的嚴重程度呈上升趨勢，即HPV病毒含量越高，患ICC的風險越大,而HR-HPV的載量與宮頸病變的嚴重程度無關。筆者在2012年曾報道，非妊娠期婦女高危型HPV感染的宮頸病變的發病率為35.96%，妊娠期與非妊娠期感染的發病率及病毒載量比較，二者差異無統計學意義(P>0.05)，妊娠期ICC和CIN的生物學行為與非妊娠期相仿，妊娠本身并不能影響CIN的自然發展，一定不可忽視妊娠期和產后婦女的子宮頸疾病的篩查[11]。在國內的檢測中，由于妊娠期的生理變化，易造成假陽性，產后復查，即可糾正診斷。妊娠期的宮頸病變很少發生惡化，可通過孕期觀察，產后復查，以預防ICC的漏診[12]。妊娠期CINⅡ和CINⅢ發展為ICC的風險極低，但產后的逆轉相當高，因此，絕大多數妊娠期宮頸上皮內瘤無需要治療[13-14]。妊娠期婦女TH檢查異常率可達33.95%，與非妊娠期一樣，TH檢查和HC2-HPV-DNA檢查及病理活檢都是極重要的診斷方法，TH檢查和HC2-HPV-DNA聯合檢查不會增加妊娠期流產及早產的發生，對妊娠期婦女生殖道HR-HPV高載量的妊娠期婦女應該提高警惕，同時對低載量的妊娠期婦女也要嚴密隨訪。

綜上所述，本文對486例不同年齡妊娠期婦女生殖道HR-HPV感染與宮頸病變的相關性分析表明，HC2-HPV-DNA法是目前癌前病變及ICC篩查的最佳方法，不同年齡妊娠期婦女HR-HPV感染情況不同，HC2-HPV-DNA檢測HR-HPV病毒載量與CIN及ICC發生有關，與宮頸病變的發生過程有關，與宮頸病變的嚴重程度無關。妊娠期婦女HPV感染的宮頸病變陽性率和病毒載量與非妊娠期婦女相似，二者差異無統計學意義(P>0.05)；利用HPV檢測和TH檢查的結果針對性地進行宮頸組織病理檢查，可有效地指導CIN及ICC的臨床診斷和預防，為孕期的婦女防治ICC、降低其病死率提供有效幫助。

[1]劉麗燕，劉麗麗，趙正云，等.液基細胞學與陰道鏡對宮頸癌前病變的診斷價值[J].檢驗醫學與臨床,2014，11(15)：2041-2042.

[2]Rao PH,Arias PH,Lu XY,et al.Chromosomal amplifications,3q gain and deletions of 2q33-q37 are the frequent genetic changes in cervical carcinoma[J].BMC Cancer,2004,4(1):5-8.

[3]Walboomers JM,Jacobs MV,Manos MM,et al.Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide[J].J Pathol,1999,189(1):12-19.

[4]Agorastos T,Diinas K,Lloveras B,et al.Human papillomavirus testing for primary screening in women at lowrisk of developing cervical cancer.The Greek experience[J].Gynecol Oncol,2005,96(3):714-720.

[5]吳霞，黃醒華，張為遠.液基細胞學篩查妊娠期婦女宮頸病變的臨床研究[J].中國婦產科雜志，2006,41(10):689-692.

[6]陳昕華，周蓓蓓，虞斌,等.高危型HPV在宮頸病變篩查中的應用[J].中國婦幼保健雜志,2010,25(7):898-899.

[7]Monroy-García A,Gómez-Lim MA,Weiss-Steider B,et al.A novel HPV 16 L1-based chimeric virus-like particle containing E6 and E7 seroreactive epitopes permits highly specific detection of antibodies in patients with CINⅠ and HPV-16 infection[J].Virol J,2011,59(2):158-165.

[8]Ueda Y,Enomoto T,Miyatake T,et al.Perinatal outcomes of cervical intraepithelial neoplasia in pregnant women determined by route of delivery[J].Reprod Sci,2009,16(11):1034-1039.

[9]Bergeron C,Cas F,Fagnani F,et al.Assessment of human papilloma virus testing on liquid-based cyto-screen system for women with atypical squamous cells of undetermined significance[J].Gynécologie Obstétrique Fertilité,2008,3(4):312-316.

[10]張玉梅,曹維克.高危HPV病毒第2代雜交捕獲法檢測應用于宮頸癌以及癌前病變檢查[J].武漢大學學報：醫學版,2011,32(4):489-491.

[11]謝建渝，余娟，董國強.762例婦女宮頸高危型HPV感染與宮頸病變的相關性研究[J].檢驗醫學與臨床,2012，9(20)：2533-2535.

[12]陳俊雅，楊慧霞，李克敏，等.妊娠合并子宮病變的分析[J].中國圍產醫學雜志，2004,7(6):335-338.

[13]錢德英.妊娠合并宮頸上皮內瘤樣病變的診斷和處理[J].中國實用婦科和產科雜志，2007,23(10)：748-749.

[14]陳俊雅，楊慧霞，李克敏，等.宮頸病變合并妊娠[J].中國婦產科臨床雜志，2004,5(3):226-227.

Correlation between cervical high-risk HPV infection with cervical lesions in pregnant women*

XIEJian-yu,YUKe-jing,DONGGuo-qiang△,CAIChun-ling,LIULi,LIYi,ZOUGuang-mei

(ChongqingHuaxiGynecologyHospital,Chongqing400039,China)

Objective To study the correlation between high risk human papilloma virus(HR-HPV) infection with cervical lesions in pregnant women.Methods A total of 486 pregnant women aged 18-43 years old treated in our hospital were selected and performed the second generation hybrid capture technique(HC2-HPV-DNA),and pathogens visual detection system(TH) and cervical biopsy under colposcopy.The pathology results served as the gold standard for the diagnosis of cervical lesions.Results Among 486 pregnant women,161 cases were positive in the HR-HPV detection with the detection rate of 33.12%(161/486);24 cases of cervical cancer(ICC) and cervical intraepithelial neoplasia(CIN) were diagnosed by histopathology,in which 22 cases were HPV positive,the sensitivity was 91.67%(22/24).The HR-HPV infection distribution had statistical difference among different age groups(P<0.05),the higher the HR-rHPV viral load,the worse the cervical lesions.Conclusion The HR-HPV infection rate is different in different ages of pregnant women;HR-HPV positive viral load is related with the occurrence of CIN and ICC,occurrence process of cervical lesions,but has no relation with the severity of cervical lesions;the positive rate of cervical lesions and viral load in pregnant women HPV infection are similar to non pregnant women;The HC2-HPV-DNA method is the best method for screening precancerous lesion and cervical cancer.

HC2-HPV-DNA； TH； pathological biopsy; cervical diseases; high risk human papilloma virus

重慶市九龍坡區科委社會發展類基金資助項目(201307)。

謝建渝，男，主任檢驗師，本科，主要從事實驗室診斷及分子生物學診斷研究。△

，E-mail:1050015199@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.15.014

A

1672-9455(2015)15-2175-03

2014-10-18

2014-12-16)