人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備研究

徐本錦，劉 玲

(山西醫(yī)科大學(xué)汾陽學(xué)院，山西汾陽 032200 )

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人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備研究

徐本錦，劉 玲

(山西醫(yī)科大學(xué)汾陽學(xué)院，山西汾陽 032200 )

外周血淋巴細(xì)胞； 染色體； 分裂相； 秋水仙素

1960年，Moorhead等建立了一套比較完整的外周血體外培養(yǎng)和染色體制備方法，該技術(shù)能夠清晰的顯示染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)上的變化，對于常見遺傳性疾病的快速診斷，提高人口素質(zhì)具有十分重要的作用，對我國優(yōu)生優(yōu)育工作意義重大[1]。但該技術(shù)對細(xì)胞的培養(yǎng)時間較長，使得實(shí)驗(yàn)易受溫度、pH、溶血和凝血等因素影響而導(dǎo)致失敗[2]。為了臨床上能高效、快速、準(zhǔn)確地診斷遺傳性疾病，有學(xué)者已經(jīng)報道了該技術(shù)的一些心得體會[3-5]。本研究立足于獲得高質(zhì)量的人外周血染色體標(biāo)本和提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)的可操作性，對該技術(shù)的4個影響因素進(jìn)行了優(yōu)化，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取8名健康男性和8名健康女性進(jìn)行外周血采集，使用肝素抗凝。

1.2 儀器與試劑 培養(yǎng)箱，光學(xué)顯微鏡，香柏油，乙醇燈，離心機(jī)，恒溫培養(yǎng)箱，人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液(湖南湘雅基因技術(shù)有限公司)，秋水仙素(20 μg/mL)，低滲液(0.075 mol/L 氯化鉀溶液)，固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)，Giemsa染液，500 U/mL肝素。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)方法 采血：采用10 mL一次性注射器吸取少量肝素潤濕針管，將多余肝素排出。接種：在無菌條件下，用注射器針頭刺透培養(yǎng)瓶橡皮塞，向培養(yǎng)瓶內(nèi)注入成年男子全血26滴，或成年女子全血28滴，輕輕搖勻。培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72 h[6]。……