過瘤胃蛋氨酸和賴氨酸對越冬期梅花鹿幼鹿生長性能、養分消化率及血清生化指標的影響

黃 健，鮑 坤，張鐵濤，崔學哲，李光玉，楊福合，張 婷，王凱英

(中國農業科學院特產研究所 特種經濟動物分子生物學國家重點實驗室，長春 130112)

過瘤胃蛋氨酸和賴氨酸對越冬期梅花鹿幼鹿生長性能、養分消化率及血清生化指標的影響

黃 健，鮑 坤，張鐵濤，崔學哲，李光玉，楊福合，張 婷，王凱英*

(中國農業科學院特產研究所 特種經濟動物分子生物學國家重點實驗室，長春 130112)

本試驗旨在研究低蛋白質飼糧中添加過瘤胃蛋氨酸(RPM)和過瘤胃賴氨酸(RPL)對越冬期梅花鹿幼鹿生長性能、消化代謝和血清生化指標的影響。16只健康8月齡遺傳背景相近的雄性梅花鹿，隨機分為4個組，組間體重無顯著差異(每個組4個重復，每個重復1只)，飼喂4種不同飼糧：對照組(Ⅰ組)飼喂粗蛋白質(CP)16.52%的高蛋白質飼糧，試驗組飼喂CP13.70%添加0.30%RPL并分別添加0(Ⅱ組)、0.08%(Ⅲ組)、0.16%(Ⅳ組)RPM的低蛋白質飼糧，試驗期為70 d。結果表明，對照組和Ⅳ組平均日增重(ADG)顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，平均日采食量(ADFI)顯著高于Ⅲ組(P<0.05)，Ⅱ組料重比(F/G)顯著高于其余各組(P<0.05)；對照組磷消化率極顯著低于試驗組(P<0.01)，且Ⅱ組顯著低于Ⅲ組(P<0.05)，Ⅱ組CP和粗脂肪(EE)的消化率顯著低于Ⅳ組(P<0.05)；對照組血清尿素氮(BUN)含量顯著高于Ⅲ(P<0.01)組和Ⅳ組(P<0.05)，葡萄糖(GLU)和尿酸(UA)含量極顯著高于其余各組(P<0.01)；其余各項指標差異不顯著(P>0.05)。由此可見，飼糧CP水平從16.52%降至13.70%直接降低氮、磷排放，幼鹿生長相應延緩，添加0.16%RPM和0.30%RPL能改善幼鹿生長發育、促進物質消化、提高代謝平衡。

梅花鹿；過瘤胃蛋氨酸；過瘤胃賴氨酸；低蛋白質

梅花鹿是我國的主要鹿種之一，鹿產品藥用和經濟價值極高。近年來蛋白質飼料短缺不斷加劇，飼料成本居高不下，調整飼糧蛋白質水平，提高蛋白質利用率，可降低飼養成本。但降低飼料蛋白質水平又難以滿足動物生長需求[1-2]，低蛋白質飼料添加限制性氨基酸是解決問題的有效方法之一。反芻動物瘤胃微生物能降解游離氨基酸，添加氨基酸作用有限，過瘤胃氨基酸技術克服了這一缺點。大量研究證明，降低飼糧蛋白質水平，添加過瘤胃氨基酸不影響生產性能[3-4]，甚至提高生長性能[5-6]，氮利用率得到提高[7-8]，氮排放明顯降低。低蛋白質氨基酸平衡飼糧在梅花鹿養殖是否擁有高蛋白質飼糧相同的價值，尚未見報道。

本試驗旨在研究低蛋白質飼糧中添加RPM和RPL對越冬期幼鹿生長發育、消化代謝和血清生化指標的影響，為幼鹿氨基酸營養研究提供依據，并進一步探索低蛋白質平衡日糧替代高蛋白質日糧在梅花鹿運用的可能性。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

選取平均體重40 kg的8月齡健康梅花鹿幼鹿16只隨機分為4個組(每組4個重復，每個重復1只)，分別飼喂 4 種不同飼糧：對照組飼喂CP16.52%的高蛋白質飼糧，試驗組在CP13.70%基礎飼糧添加0.30%RPL的基礎上分別添加0、0.08%、0.16%RPM配制Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組飼糧。以玉米、豆粕、玉米纖維、酒糟蛋白、玉米胚芽、苜蓿草粉、糖蜜、食鹽、預混料等按不同比例配制成直徑0.4 cm，長度1.2～1.5 cm的全混合飼糧(TMR)顆粒料，配方及營養水平見表1，基礎飼糧和試驗飼糧中 Lys 和 Met 含量見表 2。試驗于2014年1月16日-3月25日在中國農業科學院特產研究所茸鹿實驗基地進行，在每日08∶00和16∶00飼喂兩次，保證飼料充足，自由飲水。

1.2 樣品采集

1.2.1 血樣采集 試驗第35及70天早晨飼喂前對幼鹿進行麻醉，頸靜脈采血10 mL，放置至血清析出，4 000 r·min-1離心10 min，收集血清于1.5 mL EP管中，-20 ℃低溫保存，待測。

1.2.2 糞樣采集 試驗于2月20日～2月23日連續4 d于早飼前進行糞樣采集，每圈選取6個點按部分收糞法采集當天新鮮糞便。其中一份先在80 ℃下殺菌2 h，然后在65 ℃烘箱中烘干至恒重，測定干物質含量，烘干后粉碎過40目篩制成樣品，測定樣品中的鈣和磷；另一份加10%硫酸處理后，置于65 ℃烘箱中，烘干后粉碎，過40目篩，測定粗蛋白質。

1.3 指標測定及方法

1.3.1 生長性能測定 試驗第1及70天早晨飼喂前對幼鹿進行麻醉并空腹稱重(精確到g)，記錄體重(BW)，計算平均日增重(ADG)。于1月20日-1月23日及2月20日-2月23日記錄每天采食量，計算平均日采食量(ADFI)與料重比(F/G)。

1.3.2 消化代謝指標測定 營養物質消化率采用2N鹽酸不溶灰法測定，飼料及糞樣干物質含量105 ℃烘干測定(GB/T6435-2006)；粗蛋白質含量采用凱氏定氮法測定(GB/T6432-94)；粗脂肪含量采用索氏抽提法測定(GB/T6433-94)；粗灰分含量采用550 ℃灼燒法測定(GB/T6438-92)；鈣含量采用乙二胺四乙酸(EDTA)絡合滴定法測定(GB/T6436-92)；磷含量采用釩鉬酸銨比色法測定(GB/T6437-92)；ADF和NDF采用范氏洗滌纖維分析法測定(GB/T20806-2006)。均參考《飼料分析與飼料質量分析檢測技術》[9]。

1.3.3 血清生化指標測定 BUN采用酶偶聯法測定，TP采用雙縮脲法測定，ALB采用溴甲酚綠法測定，GLOB采用總蛋白與白蛋白的差值表示，GLU采用葡萄糖氧化酶法測定，UA采用尿酸酶法測定，各試劑盒購于中生北控生物科技有限公司，采用威圖-E全自動生化儀測定。

表1 基礎飼糧組成及營養成分(風干基礎)

Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) %

1).每千克添加劑含有：MgO 0.076 g；ZnSO4·H2O 0.036 g；MnSO4·H2O 0.043 g；FeSO4·H2O 0.053 g；NaSeO30.031 g；VA 2 484 IU；VD3496.8 IU；VE 0.828 IU；VK30.23 mg；VB10.092 mg；VB20.69 mg；VB120.001 38 mg；葉酸 0.023 mg；煙酸/煙酰胺1.62 mg；泛酸鈣1.15 mg；CaHPO45.17 g；CaCO34.57 g；2).ME為計算值，其余為實測值

1).One kilogram of premix contained the following：MgO 0.076 g；ZnSO4·H2O 0.036 g；MnSO4·H2O 0.043 g；FeSO4·H2O 0.053 g；NaSeO30.031 g；VA 2 484 IU；VD3496.8 IU；VE 0.828 IU；VK30.23 mg；VB10.092 mg；VB20.69 mg；VB120.001 38 mg；Folic acid 0.023 mg；Niacin 1.62 mg；Calcium pantothenate 1.15 mg；CaHPO45.17 g；CaCO34.57 g；2).ME was calculated value，while others were measured values

表2 基礎與試驗飼糧中 Lys 和 Met 含量(風干物質基礎)

Table 2 Content of Lys and Met in basal diet and test diet (air dry basis) %

項目Item組別GroupⅠ組Ⅱ組Ⅲ組Ⅳ組基礎飼糧中Lys水平Lyslevelinbasaldiet0.920.590.590.59基礎飼糧中Met水平Metlevelinbasaldiet0.290.220.220.22賴氨酸添加量AdditionofLys0.000.300.300.30蛋氨酸添加量AdditionofMet0.000.000.080.16飼糧中Lys水平Lyslevelintestdiet0.920.890.890.89飼糧中Met水平Metlevelintestdiet0.290.220.300.38

1.4 統計方法

應用SAS9.1.3的ANOVA進程進行單因素方差分析，運用DUNCAN法進行多重比較，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結 果

2.1 RPM和RPL對梅花鹿幼鹿生長性能的影響

如表3所示。幼鹿各組各時期BW差異不顯著(P>0.05)；與對照組相比，將飼糧CP水平從16.52%降低至13.70%，Ⅱ組幼鹿BWG和ADG顯著低于對照組(P<0.05)，F/G顯著高于對照組(P<0.05)，Ⅲ組ADFI極顯著低于對照組(P<0.01)，其余各項差異不顯著(P>0.05)；各試驗組之間，在低CP飼糧中添加RPM后，BWG和ADG隨飼糧RPM添加水平增加而增加，Ⅳ組顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，ADFI隨飼糧RPM添加水平增加先降低后增加，Ⅲ組顯著低于Ⅳ組(P<0.05)，而F/G隨飼糧RPM添加水平增加而降低，Ⅲ組和Ⅳ組顯著低于Ⅱ組(P<0.05)。

表3 過瘤胃蛋氨酸和賴氨酸對越冬期梅花鹿幼鹿生長性能的影響

Table 3 Effects of rumen-protected methionine and lysine on growth performance in sika deer

項目Item組別Group對照組Ⅱ組Ⅲ組Ⅳ組始重/kgInitialBW38.25±4.0937.58±3.0738.75±2.0138.15±3.57末重/kgFinalBW44.85±4.2742.65±2.2444.85±2.6344.85±4.01增重/kgBWG6.60±0.71a5.08±0.88b6.10±0.72ab6.70±0.74a平均日增重/(g·d-1)ADG94.27±10.17a72.50±12.53b87.14±10.24ab95.71±7.19a平均日采食量/(kg·d-1)ADFI1.81±0.06Aa1.76±0.02ABab1.70±0.03Bb1.78±0.07ABa料重比F/G19.44±2.27b24.89±4.25a19.79±2.19b18.66±1.35b

2.2 RPM和RPL對梅花鹿幼鹿營養物質消化率的影響

越冬期梅花鹿幼鹿低蛋白質添加RPM和RPL對營養物質消化率的影響如表4所示。與對照組相比，試驗組幼鹿P消化率極顯著升高(P<0.01)，CP、EE和Ca消化率有降低趨勢，而ADF消化率有一定降低，DM、OM和NDF消化率有一定升高，但差異不顯著(P>0.05)；各試驗組之間，CP和EE消化率Ⅳ組最高，Ⅱ組最低，Ⅳ組顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，DM、OM、NDF和P消化率均為Ⅲ組最高，且Ⅲ組P消化率顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，其余各項差異不顯著(P>0.05)。

表4 過瘤胃蛋氨酸和賴氨酸對越冬期梅花鹿幼鹿養分消化率的影響

Table 4 Effects of rumen-protected methionine and lysine on nutrient apparent digestibility in sika deer %

項目Item組別Group對照組Ⅱ組Ⅲ組Ⅳ組干物質DM59.18±2.6460.86±1.6961.51±3.5860.94±3.07有機物OM61.34±2.4062.87±1.6763.30±3.5962.61±3.20粗蛋白質CP71.34±2.94ab68.30±1.45b71.22±2.57ab71.99±1.54a粗脂肪EE74.02±4.75ab69.44±1.71b73.59±3.16ab76.24±1.53a中性洗滌纖維NDF50.27±2.2652.20±1.8353.21±3.6552.76±3.53酸性洗滌纖維ADF41.08±1.6240.22±2.0739.33±2.8139.21±4.12鈣Ca35.20±2.5231.95±4.8429.71±5.6631.24±5.15磷P50.37±1.35Bc59.13±4.82Ab65.30±2.75Aa61.36±3.06Aab

2.3 RPM和RPL對梅花鹿幼鹿血清生化指標的影響

如表5所示。各組血清TP、ALB、GLOB含量差異不顯著(P>0.05)；對照組BUN顯著高于Ⅲ(P<0.01)組和Ⅳ組(P<0.05)，比Ⅱ組高7.3%(P>0.05)，對照組GLU和UA含量極顯著高于其他各組(P<0.01)；試驗組間，血清BUN和UA含量隨RPM添加量的增加先降低后增加，Ⅲ組含量最低，血清GLU含量隨RPM添加量的增加先增加后降低，Ⅲ組含量最高，但差異不顯著(P>0.05)。

表5 過瘤胃蛋氨酸和賴氨酸對越冬期梅花鹿幼鹿血清生化指標的影響

Table 5 Effects of rumen-protected methionine and lysine on serum biochemical indices in sika deer

項目Item組別Group對照組Ⅱ組Ⅲ組Ⅳ組總蛋白/(g·L-1)TP61.06±1.9161.28±1.8461.10±2.3661.49±2.23白蛋白/(g·L-1)ALB34.32±1.2434.24±1.4834.88±0.9334.76±2.36球蛋白/(g·L-1)GLOB26.53±1.6727.05±2.3426.23±2.6326.74±1.98尿素氮/(mmol·L-1)BUN10.97±0.29Aa10.22±0.66ABab9.8±0.95Bb9.9±0.93ABb葡萄糖/(mmol·L-1)GLU15.2±1.25A11.84±2.13B12.81±0.79B11.44±1.13B尿酸/(μmol·L-1)UA8.15±0.68A5.49±1.11B4.79±1.23B5.6±0.62B

3 討 論

3.1 低CP飼糧添加RPM和RPL對越冬期梅花鹿幼鹿生長性能的影響

蛋白質和氨基酸是影響動物生長的主要因素[10-11]。云強等[6]發現，在CP為12.02%的飼糧中添加RPL和RPM，犢牛的ADG可超過14.67%CP的飼糧。本試驗通過降低飼糧豆粕含量升高玉米含量，將飼糧CP水平從16.52%降低至13.70%，導致適口性下降，蛋白質缺乏抑制了瘤胃微生物活性和營養物質消化吸收，幼鹿采食量降低，ADG和BWG相應降低，料重比升高。王欣等[12]研究表明，幼鹿采食量和飼糧CP水平高度相關，ADG隨飼糧CP增加而增加。R.M.Blome等[2]和K.S.Bartlett等[10]發現，犢牛采食量和ADG隨飼糧CP提高而線性增加，與本試驗結果一致。同時，本試驗添加RPL和RPM后，幼鹿的氨基酸吸收能力和利用率增強，ADG和BWG隨RPM增加而增加，甚至超過正常水平飼糧，與M.N.Paula等[13]在赤鹿的研究結果一致，而本試驗采食量卻隨RPM的增加先降低后升高，料重比逐漸降低，可能是因為飼糧中添加RPM后，氨基酸平衡性得到調節，Met滿足機體需要，采食相關神經及消化酶活性降低進而影響采食量，與周曉容等[14]的結果一致。可見降低飼糧CP水平，添加一定限制性氨基酸，可以緩解由于CP降低對幼鹿產生的影響。本試驗中，Ⅳ組幼鹿的增重要高于對照組，這可能是由于試驗組飼糧添加RPL和RPM后CP水平僅比對照組低2.62%，大多數試驗研究認為，降低飼糧CP水平在4%以內和添加限制性氨基酸均不影響動物的生產性能[5，15]，這也說明，研究中所用的試驗組飼糧有進一步降低CP水平的潛能。

3.2 低CP飼糧添加RPM和RPL對越冬期梅花鹿幼鹿營養物質消化率的影響

營養物質消化率在適宜蛋白質水平和氨基酸比例發揮最大潛力，偏離最適營養水平就會降低其消化率，并影響其他營養物質的消化利用。S.Y.Yang等[16]報道，梅花鹿適宜的蛋白質水平為17%。本試驗將飼糧CP從16.52%降低至13.70%，CP、EE和Ca消化率有降低趨勢，與于麗偉[17]和C.Lee等[18]對梅花鹿、奶牛研究結果一致，但也不盡相同，其研究認為，DM、OM、NDF和ADF消化率隨飼糧CP降低而降低，本試驗有一定升高，與云強等[6]和J.B.Holter等[19]結果相似，本試驗僅改變了飼糧中豆粕與玉米含量，豆粕和玉米均是優質蛋白質，而于麗偉[17]和C.Lee等[18]的試驗飼糧中多種成分均發生了改變，不同來源蛋白質影響了瘤胃微生物代謝和小腸吸收能力，進而影響營養物質消化[20-21]。本試驗發現，幼鹿CP和EE消化率隨飼糧RPM增加而增加，P消化率先增加后降低。Met和Lys作為反芻動物第一和第二限制性氨基酸，能夠調節氨基酸的平衡性和協同性[22]，Met是肉毒堿和脂載體蛋白合成的必要基團[23]，也是堿性磷酸酶和鈉磷協同轉運蛋白的組成成分，飼糧中添加RPM能提高CP、EE和P消化率，而P消化率也會受機體代謝及酶活性改變而受到影響，為滿足機體對P的需要，必須提高消化率來降低由于采食量降低帶來的影響，而DM、OM、NDF消化率在中間組最高也有可能是采食量降低的結果[24]。ADF和NDF受過瘤胃氨基酸添加量的影響較小，可能是因為ADF和NDF主要是在瘤胃中消化，而添加過瘤胃氨基酸對瘤胃微生物的影響甚微，甚至有可能受氨基酸包被物的影響而有所降低。

3.3 低CP飼糧添加RPM和RPL對越冬期梅花鹿幼鹿血清生化指標的影響

優化動物飼糧中蛋白質水平和氨基酸的比例可以提高畜產品品質和蛋白質飼料的利用率，動物對蛋白質和氨基酸攝入不足或吸收障礙最直接的表現就是血清蛋白質含量降低，在蛋白質攝入過多的情況下，為保持氨基酸的平衡性，富余氨基酸分解代謝加強，不足氨基酸合成增多，血清BUN和UA等代謝產物增多，同時在蛋白質分解的過程中會相應降低由糖代謝供能的過程，提高血清GLU含量[25-26]。K.S.Bartlett等[10]研究表明，犢牛血清TP、BUN、GLU隨飼糧CP增加而增加。K.M.Daniels等[27]報道，降低飼糧CP水平會顯著降低犢牛血清GLU濃度。本研究表明，降低飼糧CP水平可以降低血清BUN、GLU、UA含量，而血清TP、ALB、GLOB含量并沒有降低，李輝等[25]研究表明，只有部分血清蛋白質指標有差異，可能是由于試驗組添加了RPL和RPM，改善機體對蛋白質和氨基酸的吸收能力，提高血清蛋白質含量，并降低蛋白質分解代謝，提高氨基酸的利用率，促進正常的糖代謝，能夠基本滿足能量需要，不需要動員機體過多的蛋白質。試驗組間血清指標均沒有顯著差異，僅有BUN和UA降低和GLU升高的微弱變化，與M.N.Paula等[13]和李福昌等[28]對赤鹿和安哥拉兔研究的結果一致，而G.F.Schroeder等[29]報道，Met含量對其有顯著影響，與本試驗不盡相同，但變化規律是一致的，可能是因為幼鹿采食量低，組間采食RPM差異較大，甚至出現過量現象，而本試驗對幼鹿補充RPM量是合理的，同時鹿科動物適應力強，能夠通過部分機體調節改善營養缺陷。

4 結 論

將飼糧CP水平從16.52%降低至13.70%會延緩幼鹿生長，降低部分營養物質消化率，但可以提高磷消化率，降低血清BUN和UA含量，降低氮、磷排放，補充0.16%RPM和0.30%RPL有利于幼鹿代謝平衡，改善生長發育，提高飼料轉化率，進一步降低氮、磷排放，有力的促進了茸鹿養殖業與環境的和諧發展。

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(編輯 郭云雁)

Effects of Rumen-Protected Methionine and Lysine on Growth Performance,Nutrient Digestibility and Serum Biochemical Indices in Sika Deer during the Wintering Season

HUANG Jian，BAO Kun，ZHANG Tie-tao，CUI Xue-zhe，LI Guang-yu，YANG Fu-he，ZHANG Ting，WANG Kai-ying*

(StateKeyLaboratoryforMolecularBiologyofSpecialEconomicAnimals,InstituteofSpecialWildEconomicAnimalandPlantSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Changchun130112，China)

This experiment was conducted to investigate the effects of low crude protein diet supplemented rumen-protected methionine (RPM) and lysine (RPL) on growth performance，nutrient digesitibility and serum biochemical indices in sika deer during the wintering season.Sixteen healthy 8-month-old sika deer were randomly divided into 4 groups with 4 replicates per group and 1 sika deer per replicate.Sika deers were fed 4 diets：Control group (GroupⅠ) fed 16.52% crude protein (CP) basal diet，tests group fed 13.70% CP diet with 0.30% RPL and 0 (Group Ⅱ)，0.08% (Group Ⅲ)，0.16%(Group Ⅳ) RPM.The results showed that average daily gain (ADG) of control group and group Ⅳ were higher than group Ⅱ，and average daily feed intake (ADFI) of group Ⅲ was lower than control group and group Ⅳ，and feed to gain ratio (F/G) of group Ⅱ was higher than other groups(P<0.05)；digestibility of phosphorus (P) of control group was lower than other groups (P<0.01) and group Ⅱ was lower than group Ⅲ (P<0.05)，CP and ether extract(EE) digestibility of group Ⅱ were lower than group Ⅳ；serum urea nitrogen content of control group was higher than group Ⅲ (P<0.05) and group Ⅳ (P<0.01)，glucose and uric acid content of control group were higher than other groups (P<0.01)；other index had no significant influence (P>0.05).It is concluded that reducing diet CP level from 16.52% to 13.70% reduced nitrogen and phosphorus emission，slowed fawn growth，however，0.16% RPM and 0.30% RPL supplementation would enhance fawn growth，promoted nutrient digestion and metabolism balance.

sika deer；RPM；RPL；low crude protein

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.013

2014-08-04

吉林省重大科技攻關專項(20140203018NY)；長春市科技支撐計劃(13NK07)

黃 健(1989-)，男，四川德陽人，碩士生，主要從事特種經濟動物營養與飼養研究，E-mail：hj6503310@vip.qq.com

*通信作者：王凱英，副研究員，E-mail：tcswky@126.com

S825；S815

A

0366-6964(2015)06-0974-07